冯晶晶
- 作品数：10 被引量：15H指数：3
- 供职机构：军事医学科学院野战输血研究所更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生轻工技术与工程化学工程更多>>
- 纤维蛋白止血敷料的免疫安全性研究
- 目的纤维蛋白止血敷料(Fibrin haemostatic dressings,FHD)是本课题组研制的1种新型可降解生物止血材料,由牛胶原蛋白、人纤维蛋白原等组成,主要应用于轻中度内脏伤和躯体伤的止血。FHD作为1种新...
- 赵雄曹晓涵马玉媛冯晶晶王卓唐倩吕茂民尹惠琼章金刚
- 纤维蛋白止血敷料的免疫安全性研究
- 2010年
- 赵雄曹晓涵马玉媛冯晶晶王卓唐倩吕茂民尹惠琼章金刚
- 关键词：可降解生物材料止血材料埋植生物相容性
- 猪α-干扰素的原核表达及活性测定被引量：3
- 2009年
- 目的:表达并纯化出具有生物学活性的重组猪α-干扰素。方法:根据前期合成的猪α-干扰素基因序列设计引物,用PCR方法扩增出猪α-干扰素基因,并将其定向克隆入原核表达载体pET28中,酶切及测序鉴定正确后,转化大肠杆菌BL21进行诱导表达,对表达产物通过镍琼脂糖凝胶柱亲和层析纯化、透析法复性后,采用微量细胞病变抑制法测定重组猪α-干扰素的活性。结果:测序结果表明构建了猪α-干扰素原核表达载体pET28-poIFN-α;诱导表达后经SDS-PAGE分析,在相对分子质量约21×103的位置出现明显的诱导蛋白条带,与目的蛋白大小相近;经分析表达产物主要以包涵体形式存在,约占菌体总蛋白的36%,纯化后的目的蛋白纯度约为90%;采用微量细胞病变抑制法测定其活性约为1.67×106U/mg。结论:获得了纯度较高并具有较高活性的重组猪α-干扰素,为下一步研究猪α-干扰素药物价值及其生物制剂的生产、应用奠定了基础。
- 贾自文吕茂民冯晶晶赵媛媛王卓章金刚
- 关键词：原核表达抗病毒活性
- 一种快速筛选酵母高表达菌株的新方法被引量：3
- 2008年
- 为建立一种快速筛选酵母高表达菌株的方法,将生长在固体培养基上的新转化的表达菌落原位转移到醋酸纤维素薄膜上,再利用硝酸纤维素薄膜原位捕获醋酸纤维素薄膜上的蛋白,然后用免疫印迹的方法检测原位转印到硝酸纤维素膜上菌落分泌蛋白,根据免疫印迹的强弱进行高表达菌株的筛选。结果显示,经过菌落原位转印和免疫印迹显色,显色信号强的菌落表达量相对较高。因此,双膜法原位检测是一种快速、高效的筛选酵母高表达菌株的方法。
- 冯晶晶赵媛媛杨梅吕茂民
- 关键词：酵母
- 重组人凝血因子Ⅶ在BHK细胞中的表达与鉴定
- 目的：表达具有促凝活性的重组人凝血因子Ⅶ。
方法：用PCR的方法从质粒pUC-FⅦ中扩增人凝血因子ⅦcDNA，并将其定向克隆入真核表达载体pIRESneo中，构建重组表达载体pIRES-FⅦ，转化感受态大肠杆菌...
- 吕茂民王卓冯晶晶章金刚
- 关键词：BHK-21细胞止血剂促凝活性
- 文献传递
- 重组人凝血因子Ⅶ在Flp-In-CHO细胞中的表达及鉴定被引量：6
- 2010年
- 目的利用Flp/FRT位点特异性重组技术,在Flp-In-CHO细胞中表达重组人凝血因子Ⅶ(rhFⅦ),并进行鉴定。方法用限制性内切酶EcoRⅠ和EcoRⅤ分别双酶切质粒pT-FⅦ与表达载体pcDNA5/FRT/TO,将回收的目的基因片段和载体片段连接,构建重组表达质粒pcDNA5/FRT/TO-FⅦ,并与辅助质粒pOG44共转染Flp-In-CHO细胞,经400μg/ml潮霉素B压力筛选,获得抗性细胞株。采用PCR、RT-PCR、Western blot和PT等方法对筛选出的细胞株分别进行基因组水平、mRNA水平、表达水平和蛋白活性的鉴定。结果重组表达质粒pcDNA5/FRT/TO-FⅦ经PCR、双酶切及测序鉴定证明构建正确;筛选出9株抗性细胞;外源基因FⅦ定点整合到Flp-In-CHO细胞基因组中并得到表达;重组蛋白表现出与血浆FⅦ相一致的促凝活性。结论利用位点特异性表达系统Flp/FRT,在Flp-In-CHO细胞中成功表达了hFⅦ,为其制备和纯化奠定了基础。
- 王卓吕茂民冯晶晶赵媛媛章金刚
- 关键词：位点特异性重组
- 一种表达重组人凝血因子Ⅶ的方法及其专用载体
- 本发明公开了一种高效表达重组人凝血因子VII的方法及其专用载体。该载体自上游至下游顺次包含人延伸因子1α亚基启动子EF-1α或巨细胞病毒即刻早期启动子CMV-IE，人凝血因子VII的cDNA基因，人工合成的内含子，内部核...
- 吕茂民章金刚王卓冯晶晶唐倩赵雄马玉媛尹惠琼杨姝
- 文献传递
- 重组人凝血因子Ⅶ的纯化与鉴定被引量：2
- 2010年
- 目的建立重组人凝血因子Ⅶ(rhFⅦ)的纯化方法。方法首先将制备并纯化的单克隆抗体与CNBr-Sepharose 6B Fast Flow介质偶联,制备单克隆抗体亲和层析柱,并用rhFⅦ标准品验证层析柱的层析效果;采用DE-AE-Sephadex A-50吸附细胞表达的上清,对吸附产物用Sephadex G-25脱盐柱做脱盐处理;然后用单克隆抗体亲和层析柱做亲和层析;通过SDS-PAGE、Western Blot等试验测定纯化产物的纯度;通过凝血酶原时间(PT)测定纯化产物的促凝活性。结果制备出rhFⅦ单克隆抗体亲和层析介质;细胞表达产物经DEAE-Sephadex A-50、Sephadex G-25脱盐和亲和层析纯化后,经SDS-PAGE鉴定获得了分子量为50kD的单一蛋白洗脱峰;纯化所获得的重组蛋白具有促凝活性,促凝时间(DT)为52s。结论建立了纯化rhⅦ的亲和层析方法 ,为rhFⅦ的研制奠定了基础。
- 吕茂民王卓冯晶晶章金刚
- 关键词：纯化单克隆抗体
- 人内皮抑素-白蛋白融合蛋白在毕赤酵母中的表达与鉴定被引量：3
- 2010年
- 目的构建编码人内皮抑素-白蛋白的融合基因,并在毕赤酵母(pichia pastoris)中获得高效表达。方法通过重叠延伸PCR的方法 ,构建编码人内皮抑素-白蛋白的融合基因,并克隆至pGEM-T载体中,测序正确后,将其亚克隆至酵母表达载体pPIC9中,然后将鉴定正确的重组表达载体pPIC9/ES-HSA线性化后转化入GS115宿主菌。采用原位双膜法筛选高表达菌株,对高表达菌株进行扩大培养,将表达上清液盐析后分别经阳离子交换层析、阴离子交换层析和亲和层析纯化,获得了重组融合蛋白,采用MTT法测定融合蛋白中内皮抑素的活性。结果成功构建了人内皮抑素-白蛋白融合基因和重组表达质粒pPIC9/ES-HSA,并筛选到表达较为理想的重组菌株pPIC9/ES-HSA/GS115,经甲醇诱导表达后纯化,融合蛋白的纯度达到92%以上,并具有抑制人血管内皮细胞系ECV-304细胞的增殖活性。结论本方法可成功获得具有人内皮抑素生物活性的重组人内皮抑素-人血清白蛋白融合蛋白。
- 赵媛媛吕茂民杨梅冯晶晶章金刚
- 关键词：人内皮抑素人血清白蛋白毕赤酵母
- 一种重组表达水痘-带状疱疹病毒截短型糖蛋白E的方法及其应用
- 本发明公开了一种重组表达水痘-带状疱疹病毒截短型糖蛋白E的方法及其应用。该方法是将去除跨膜区和胞内区并添加His标签的水痘-带状疱疹病毒(VZV)截短型糖蛋白E(gpE)的基因导入宿主细胞中，经表达得到重组水痘-带状疱疹...
- 章金刚王卓唐倩吕茂民冯晶晶马玉媛王建国
- 文献传递
