冯相伟
- 作品数：19 被引量：74H指数：4
- 供职机构：吉林大学第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金吉林省科技厅科研基金吉林省科技厅科技发展计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 定点突变去除抗乙酰胆碱受体抗体的补体结合功能被引量：1
- 2008年
- [目的]制备无补体结合功能的免疫球蛋白样抗乙酰胆碱受体抗体,用于重症肌无力的特异性免疫治疗.[方法]应用定点突变技术,将致病性抗乙酰胆碱受体抗体IgG 637的重链CH 2区的第322位氨基酸进行K 322 A突变,获得的突变型抗体IgG 637/K 322 A基因经转化大肠杆菌XL 1-Blue进行增殖,测定序列证实为突变序列,转染哺乳类细胞CHO-k 1进行表达,其产物经酶联免疫吸附试验检测与补体C 1 q的结合活性.[结果]突变型抗乙酰胆碱受体抗体IgG 637/K 322 A不能与补体C 1 q结合,而对照抗体IgG 637可与补体结合.[结论]经定点突变,成功地获得了失去补体结合功能的抗乙酰胆碱受体抗体.
- 冯相伟陈秋艳姜京植穆永佳温爱萍李红花李英信孟繁平
- 关键词：重症肌无力点突变补体结合抗体
- 人血小板源性生长因子A基因发夹结构小干扰RNA真核表达载体的构建及鉴定
- 2007年
- 目的:血小板源性生长因子对诱发视网膜色素上皮细胞移行、最终导致增生性玻璃体视网膜病变起到了重要作用。构建人血小板源性生长因子A具有发夹结构小干扰RNA(shRNA)表达质粒,以观察其对人血小板源性生长因子A基因表达的沉默效果。方法:实验于2007-04/2007-07在吉林大学第一临床医院传染科研究室完成。根据血小板源性生长因子A基因mRNA序列,设计有小发夹结构的3条寡核苷酸序列,克隆到空载体pGPU6/GFP/Neo中,构建重组质粒,同时设计构建分别针对人GAPDH干扰质粒作为阳性对照,不针对任何特异基因的质粒作为阴性对照。通过酶切鉴定和测序验证阳性克隆。结果:经重组质粒筛选,重组质粒测序鉴定与设计的shRNA转录模板序列相同,均证实重组质粒构建成功。结论:利用RNA干扰技术路线可成功构建靶向人血小板源性生长因子A的发夹结构小干扰RNA表达载体。
- 孙蕾吴雅臻于雷冯相伟
- 关键词：SHRNA
- 靶向CTGF的锤头核酶抑制人肝星状细胞介导肝纤维化的体外研究
- 高润平杨秀云王淑华鲍万国杨永广苏秀芬金清龙华瑞温小玉冯相伟
- 该研究来自吉林省科技发展计划项目，合同编号：200505211。我国是病毒性肝炎高发区，仅乙型肝炎病毒携带就达1.2亿，其中有3000万以上的慢性乙型肝炎患者。这些患者如得不到有效治疗，可发生肝纤维化，进而肝硬化、甚至肝...
- 关键词：
- 关键词：CTGF肝纤维化乙型肝炎病毒
- 大鼠agrin基因实时定量聚合酶链反应的检测方法
- 2008年
- 目的:agrin基因对神经肌肉接头的形成、维持起着决定作用,也对神经元轴突的形成、延长、维持有重要作用,其表达产物在机体内分布广泛。设计绝对定量嵌合荧光法检测大鼠agrin基因mRNA的实时定量聚合酶链反应方法,并检测其特异性、敏感性和可重复性。方法:实验于2007-04/11在吉林大学基础医学院三综合实验室和吉林大学第一医院传染科实验室完成。以Primer3软件设计大鼠agrin基因、ACTB基因mRNA嵌合荧光实时定量聚合酶链反应检测引物,经检索Blast验证特异性,并以Primer5设计构建agrin基因标准品引物。选择清洁级Wistar大鼠交配,获取3日龄乳鼠,取脑,获取mRNA、cDNA,常规反转录-聚合酶链反应获取agrin554个碱基DNA片断。PCR填加T7启动子后,T7 RNA Polymerase合成agrin基因标准品,消化模板。分光光度计测定其浓度,1:5倍比稀释3次;经反转录反应合成agrin基因cDNA标准品,测序验证特异性。以ACTB引物反转录cDNA,1:5倍稀释3次,构建ACTB基因标准品。常规聚合酶链反应确定、优化反应条件。标准曲线确定实时定量聚合酶链反应标准曲线的相关性,融解曲线验证检测方法的特异性,作重复性检测。结果:①agrin基因有意义链引物序列:GAA GGC CAG GTG CGA ATC A,反义链引物序列:CAC AGG TAG CAG TGG AGC CAA G,内标:ACTB基因有意义链引物序列:GGA GAT TAC TGC CCT GGC TCC TA,反义链引物序列:GAC TCA TCG TAC TCC TGC TTG CTG,优化反应条件:95℃变性5s,60℃退火20s,72℃延伸20s。②agrin基因、ACTB基因标准品所获得的标准曲线确定实时定量聚合酶链反应标准曲线的相关性均>0.95。③聚合酶链反应产物电泳、测序、实时定量聚合酶链反应融解曲线证明特异性高、重复性好、灵敏度达到精确定量要求。结论:绝对定量嵌合荧光法检测大鼠agrin基因mRNA的实时定量聚合酶链反应方法可以作为大鼠agrin基因mRNA检测的标准方法。
- 郭阳江新梅郭会敏刘永茂王峰施雨露冯相伟朱武飞邢英琦赵清石马学玲杨蕴天杨绿
- 关键词：实时定量PCR
- 慢性乙型肝炎患者血清HBV基因分型被引量：12
- 2007年
- 为了解长春市慢性乙型肝炎患者血清中的乙型肝炎病毒(HBV)基因型情况及其与临床特点的相关性,应用型特异性引物进行巢式PCR方法对长春市69例慢性乙型肝炎患者血清HBV进行基因分型检测。在69例血清标本中,B型10例(占14.5%);C型41例(占59.4%);B+C混合型8例(占11.6%);未分型的患者共10例(占14.5%)。C基因型患者的HBV-DNA定量、HBeAg阳性率明显高于B基因型患者(HBV-DNA:P<0.01;HBeAg:χ2=3.98,P<0.05),C基因型患者肝功检查指标谷丙转氨酶(ALT)和总胆红素(TB IL)均较B基因型患者高(P<0.01)。长春地区存在HBV B基因型、C基因型、B+C混合基因型及未分型,C基因型为优势基因,引起的肝脏活动性炎症较B基因型明显。
- 冯相伟孟繁平汪杨王峰陈秋艳
- 关键词：乙型肝炎病毒基因分型聚合酶链反应
- 乙型肝炎病毒基因分型与病毒核酸含量、肝功能相关性分析
- 目的：了解吉林省乙型肝炎患者血清中的乙型肝炎病毒基因分型情况及其临床特点;分析乙型肝炎病毒基因分型与病毒核酸含量、肝功能相关性。深入研究基因型对于进一步明确乙型肝炎病毒的分子流行病学特点、鉴定传染源、确定传播关系，阐明发...
- 冯相伟
- 关键词：乙型肝炎病毒基因分型核酸定量谷丙转氨酶肝功能
- 文献传递
- 长春市69例慢性乙型肝炎患者血清HBV基因分型
- 为了解吉林省长春市慢性乙型肝炎患者血清中的乙型肝炎病毒(HBV)基因分型情况及其与临床特点的相关性,我们对长春市69例慢性乙型肝炎患者血清HBV进行基因分型检测。结果发现,在69例血清标本中,B型10例(占14.5%);...
- 冯相伟陈秋艳姜京植孟繁平
- 文献传递
- IL-28B基因变异与丙型肝炎的易感性及其自然清除的关系被引量：13
- 2010年
- 目的探讨IL-28B基因变异与丙型肝炎的易感性和丙型肝炎病毒(HCV)自然清除之间的关系。方法利用焦磷酸测序的方法对411例HCV感染者(男性225人,女性186人)及100例健康对照人群进行了IL-28B基因变异位点rs12979860的多态性检测;对HCV感染者进行病毒定量的检测,比较HCV感染人群和健康对照人群,慢性丙型肝炎(CHC)人群和丙型肝炎自愈人群IL-28B基因变异位点的差异以及不同基因型的携带者病毒定量的差异。结果中国健康人群IL-28B基因变异位点rs12979860的最小等位基因频率为6%,与日本人相近,与欧洲人群相差较大。SNP(rs12979860)位点的等位基因频率和基因型频率在HCV感染人群和健康对照人群之间差异无统计学意义(P=0.066;P=0.072),C/C基因型CHC人群病毒定量水平高于C/T基因型,二者之间差异有统计学意义(P=0.02);丙型肝炎自愈人群中C/C基因型和C/T基因型差异无统计学意义(P=0.64)。结论 CHC人群rs12979860 SNP基因型与健康人群表达无明显差别,该基因型(rs12979860)不是HCV的易感基因,其CC基因型并不能预测丙型肝炎发生自愈的病程。
- 王东生潘煜牛俊奇姜晶姜艳芳张鹏冯相伟赵大辉杨帅
- 关键词：肝炎病毒属多态现象基因频率
- 氧乐果致运动神经元agrin基因mRNA水平改变
- 2007年
- 目的分析不同浓度氧乐果对运动神经元agrin基因mRNA转录水平的影响,探讨有机磷中毒突触前损害的发病机制。方法体外培养大鼠脊髓运动神经元,氧乐果染毒,检测不同浓度氧乐果对运动神经元agrin基因mRNA转录水平的影响,检测有机磷中毒是否对运动神经元的agrin基因表达产生影响。结果(1)正常组大鼠脊髓运动神经元agrin基因mRNA水平明显高于氧乐果染毒组大鼠脊髓运动神经元agrin基因mRNA水平;(2)不同浓度氧乐果染毒组(0.1mmol/L,0.01mmol/L)大鼠脊髓运动神经元agrin基因mRNA水平,各组间存在显著差异,损害程度与有机磷杀虫剂剂量存在正相关,即浓度大,agrin基因转录水平低;(3)0.1mmol/L浓度氧乐果染毒组大鼠脊髓运动神经元存活时间小于12h,0.01mmol/L浓度氧乐果染毒组大鼠脊髓运动神经元可较长时间存活。结论有机磷杀虫剂影响脊髓运动神经元agrin基因表达,且损害程度与有机磷杀虫剂剂量存在正相关,即浓度大,agrin基因转录水平低,神经肌肉接头损害严重,存在突触前损害。
- 郭阳江新梅邢英琦郭会敏刘永茂王峰冯相伟杨蕴天赵清石马学玲杨绿
- 关键词：脊髓运动神经元有机磷中毒
- 3种新型核苷类似物抗鸭乙型肝炎病毒活性及其对肝脏组织形态学的影响被引量：1
- 2011年
- 目的:研究3种具有新型结构的核苷类似物在体内的抗鸭乙型肝炎病毒的活性及其对鸭肝脏组织形态学的影响,探寻新型高效核苷类抗乙型肝炎病毒药物。方法:实验组鸭分为2、10和50mg.kg-1 3个剂量组,分别给予核苷类似物030703、030605和030705,对照组鸭给予阿德福韦10mg.kg-1,每日1次,经口服连续给药30d。分别在给药前、给药第15天、第30天和停药后第2周时静脉采血,采用荧光定量PCR方法进行血清鸭乙肝病毒脱氧核糖核酸(DHBV DNA)检测,同时设DHBV DNA阳性和阴性对照组。实验结束后处死鸭,取肝脏,进行光镜下的病理组织形态学检查。结果:受试药物030703的高、中、低剂量组在给药后分别有3只(60%)、2只(40%)、1只(20%)鸭的DHBV DNA含量下降至原含量1/3,与阿德福韦对照组比较,高剂量组DHBV DNA含量差异有统计学意义(P<0.01),而中、低剂量组差异无统计学意义(P>0.05)。受试药物030605的高、中、低剂量组在给药后分别有4只(80%)、3只(60%)、1只(20%)鸭的DHBV DNA含量下降至原含量1/3,与阿德福韦对照组比较,高、中剂量组DHBV DNA含量差异均有统计学意义(P<0.01),而低剂量组差异无统计学意义(P>0.05)。受试化合物030705药物的高、中、低剂量组在给药后分别有3只(60%)、2只(40%)、0只(0%)鸭的DHBV DNA含量下降至原含量1/3,与阿德福韦对照组比较,高剂量组DHBV DNA含量差异有统计学意义(P<0.01),而中、低剂量组差异则无统计学意义(P>0.05)。所有测试药物高、中、低剂量各组干预后的鸭肝脏组织形态分别与病毒阳性对照组比较,炎症均有不同程度的减轻,与阿德福韦对照组的表现相似。结论:3种新型核苷类似物030703、030605及030705具有体内抗鸭乙型肝炎病毒的活性,并且能够不同程度地缓解鸭肝脏组织炎症,是一类高效的新型核苷类抗乙型肝炎病毒药物。
- 吴荻牛俊奇鲍万国仲伯华吴新宇丁艳华冯相伟
- 关键词：核苷类似物肝炎
