刘晓
- 作品数：33 被引量：75H指数：5
- 供职机构：第二军医大学长征医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市科学技术委员会资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>
- 戊型肝炎病毒多拷贝重组质粒的构建及在毕赤酵母中的表达被引量：2
- 2014年
- 目的体外构建戊型肝炎病毒(HEV)ORF2128-660多拷贝重组表达质粒,以提高HEVORF2128-660在毕赤酵母中的表达水平。方法采用PCR技术扩增目的基因ORF2128-660(E),然后将ORF2128-660(E)同义点突变为ORF2128-660,构建重组表达质粒ORF212 8-660/p AO815(单拷贝),Bam HⅠ和BglⅡ双酶切获得的目的基因表达盒(AOX-ORF2128-660)插入去磷酸化的质粒ORF2128-660/p AO815,得到2(AOX-ORF2128-660)/p AO815(2拷贝)质粒。重复上述方法依次构建3(AOX-ORF2128-660)/p AO815(3拷贝)、4(AOX-ORF2128-660)/p AO815(4拷贝)等多拷贝重组质粒。得到的多拷贝重组质粒电转化毕赤酵母菌GS115,甲醇诱导表达,SDS-PAGE分析比较不同拷贝数转化子的表达产量,ELISA检测表达产物的生物活性。结果构建了戊型肝炎病毒(HEV)ORF2128-660多拷贝重组表达质粒,表达的目的蛋白相对分子质量约为59 000,4拷贝重组质粒表达水平高于其他拷贝数重组质粒表达水平。结论成功构建了HEVORF2128-660多拷贝表达质粒,提高了其在毕赤酵母中的表达水平。
- 郭敏雷清刘晓蒋琳
- 关键词：戊型肝炎病毒毕赤酵母
- 唐氏综合征产前筛查方法研究进展被引量：13
- 2014年
- 唐氏综合征作为一种常染色体疾病,对其进行产前筛查具有十分重要的临床意义。近年来,血清学筛查标记物的临床应用越来越广泛,虽然在一定程度上提高了唐氏综合征的检出率,但唐氏综合征检出率仍只能达到60%左右。而通过新一代测序技术进行直接核酸分析,筛查胎儿染色体非整倍体检测,能更精确地检出唐氏综合征患儿。本文对唐氏综合征产前筛查手段的历史进行了回顾和分析,对现行的筛查技术,特别是新型血清标记物和新一代测序技术的原理、筛查性能等进行了综述。
- 刘晓仲人前
- 关键词：唐氏综合征产前诊断生物学标记DNA序列分析
- 甲型副伤寒沙门菌培养条件的优化被引量：2
- 2014年
- 优化甲型副伤寒沙门菌的培养条件,提高菌体产量。方法通过单因素及正交试验,对影响甲型副伤寒沙门菌生长的培养温度、NaCl浓度和pH等条件进行优化。结果甲型副伤寒沙门菌在NaCl浓度0.75%、温度35℃、pH6.5时菌体产量最高。结论通过对甲型副伤寒沙门菌培养条件进行优化,获得较高的菌体产量,为后期诊断试剂盒的开发奠定了基础。
- 陈国怀曹玲罗广刘晓刘大东金红燕陈刚席仲兴
- 关键词：甲型副伤寒沙门菌
- 静注人免疫球蛋白(pH4)Fc段生物学活性检测条件的优化被引量：5
- 2013年
- 目的优化静注人免疫球蛋白(intravenous immunoglobulins,IVIG)Fc段生物学活性检测条件,并验证该方法的重复性。方法基于《中国药典》三部(2010版)人免疫球蛋白Fc段激活补体的试验方法,优化致敏红细胞的抗原(白喉类毒素)效价(25、50、100、150、200和250 Lf/ml)、IVIG浓度(5、10、20、30、40和50 mg/ml)和补体效价(15、50、75、100和150 CH50/ml)3个试验条件;采用优化的试验条件,对1批IVIG制品重复测定10次,计算变异系数(CV),验证该方法的重复性。结果在致敏红细胞的抗原(白喉类毒素)效价100～200 Lf/ml、IVIG浓度50 mg/ml和补体效价≥75 CH50/ml的条件下,补体介导的溶血反应动力学曲线呈典型的"S"型,可准确计算出IVIG Fc段激活补体的指数(IFc)。采用优化的试验条件,对1批IVIG制品重复测定10次,溶血反应动力学曲线几乎重合为一条,10次测定的IFc值的CV=8.91%。结论优化了IVIG Fc段生物学活性检测条件,优化后的检测方法重复性较好。
- 何彦林张璘张继鹏张齐明刘晓杨晓东张安山
- 关键词：静注人免疫球蛋白FC段生物学活性
- 人凝血酶原复合物生产过程中凝血因子活化分析被引量：2
- 2014年
- 目的通过比较以组分Ⅲ沉淀和血浆为原料制备人凝血酶原复合物(Prothrombin complex concentrates,PCC)过程中凝血因子活化情况,为选择最适PCC制备原料提供数据支持。方法分别对以组分Ⅲ沉淀和血浆为原料制备PCC过程中中间品的活化的凝血因子活性和人凝血酶活性两个项目进行检定,分析凝血因子的活化情况。观察以组分Ⅲ沉淀为原料制备PCC过程中添加肝素能否抑制PCC中凝血因子的活化。结果以组分Ⅲ沉淀为原料制备的PCC中间品活化的凝血因子活性和人凝血酶活性两个项目均不合格。以组分Ⅲ沉淀为原料制备PCC生产过程中添加肝素后,PCC中间品的活化的凝血因子活性和人凝血酶活性均不合格。以血浆为原料制备的PCC中间品活化的凝血因子活性和人凝血酶活性两个项目均合格。结论组分Ⅲ沉淀为原料制备PCC会增加凝血因子活化的风险,新鲜冰冻血浆可作为制备PCC的原料。
- 何彦林刘晓潘孟娇刘晓宇张璘张继鹏张安山杨晓东
- 白细胞介素-22在炎症性肠病中的免疫调节作用被引量：2
- 2011年
- 为进一步认识白细胞介素-22与炎症性肠病之间的关系。本文综述了白细胞介素-22的结构及其受体、来源和靶点,同时讨论了白细胞介素-22在炎症性肠病的免疫调节作用。
- 刘晓仲人前
- 关键词：白细胞介素-22炎症性肠病辅助性T细胞
- 原发性胆汁性肝硬化患者单核细胞内miR-302e表达降低及意义被引量：2
- 2012年
- 目的探讨miR-302e在原发性胆汁性肝硬化(PBC)发病机制中的可能作用。方法采用荧光定量PCR技术检测了10名健康对照者和12名PBC患者的T细胞(CD3+)、B细胞(CD19+)及单核细胞(CD14+)内miR-302e的相对表达量。以100 ng/ml的LPS刺激PBC患者、健康个体的单核细胞及转染了miR-302e mimics或inhibitor的THP-1细胞,24 h后采用ELISA法检测培养基内IL-6及TNF-α浓度的变化。结果 PBC患者外周血单核细胞内miR-302e的表达量较健康个体降低(P<0.01)。在LPS刺激的THP-1细胞中,miR-302e mimics和inhibitor分别可以抑制和促进IL-6、TNF-α的释放(P<0.05)。在LPS刺激下,PBC患者单核细胞释放IL-6、TNF-α的能力强于来自健康个体的单核细胞(P<0.05)。结论 miR-302e表达降低可能导致单核细胞对LPS刺激呈现高反应性,从而参与PBC发病。
- 刘晓胡志德邓安梅仲人前
- 关键词：微RNAS胆汁性肝硬化单核细胞
- 戊型肝炎病毒多拷贝分泌表达载体的构建及在毕赤酵母中的表达被引量：1
- 2015年
- 目的:将胞内表达载体p AO815改建成分泌型表达载体,并体外构建戊型肝炎病毒ORF2128-660多拷贝重组表达质粒,进一步比较不同转化子在毕赤酵母中的表达水平,以得到高表达重组菌株。方法:利用重叠PCR技术将α-factor信号肽基因与目的基因ORF2128-660拼接后插入去磷酸化的p AO815载体,得到分泌型表达重组质粒α-ORF2128-660/p AO815(单拷贝),然后将Bam HⅠ和BglⅡ双酶切获得的目的基因表达盒(AOX-α-ORF2128-660)插入到去磷酸化的重组质粒α-ORF2128-660/p AO815中,得到2(AOX-α-ORF2128-660)/p AO815(2拷贝),电转化毕赤酵母GS115,甲醇诱导,SDS-PAGE分析不同拷贝数转化子的表达产量,ELISA检测表达产物的生物活性。结果:α-factor信号肽基因与目的基因ORF2128-660已克隆入表达载体中,目的蛋白分泌至诱导液上清中,相对分子质量约为59 000,与阴性对照比,单拷贝、2拷贝转化子表达的产物均有生物活性但表达水平无区别。结论:成功改建成分泌型表达载体,构建了多拷贝重组表达质粒,并且成功表达了目的蛋白,为利用改造的p AO815载体表达其他蛋白奠定了基础。
- 郭敏雷清刘晓蒋琳
- 关键词：戊型肝炎病毒重叠PCR毕赤酵母
- GQ142高速管式分离机在血浆冷沉淀离心工艺中的应用被引量：3
- 2016年
- 目的对血浆冷沉淀离心工艺的关键设备GQ142高速管式分离机进行确认、试生产和生产试验,确保离心机能够满足冷沉淀离心工艺的要求。方法对GQ142高速管式分离机进行安装确认、运行确认、性能确认、3批试生产试验和10批冷沉淀生产。对冷沉淀离心工艺过程中的进出液温度、所有用具冲淋水内毒素、血浆微生物限度的监测。采用ACL7000全自动凝血分析仪检测凝血因子Ⅷ效价。采用双缩脲法检测冷沉淀溶解液蛋白含量。计算冷沉淀的收率和比活性。结果通过对离心机的确认,确保了离心机能够满足冷沉淀提取工艺的要求。冷沉淀离心工艺过程中的进出液温度、所有用具冲淋水内毒素、血浆微生物限度均符合质控标准。10批血浆冷沉淀的离心过程中,血浆的进液温度、出液温度符合工艺要求,冷沉淀收获率平均(9.3±0.8)kg/L,10批冷沉淀的比活性平均(34.4±8.0)IU/g,符合质量标准。结论通过对GQ142高速管式分离机的确认、试生产和生产试验,表明此离心机能够满足冷沉淀的提取工艺要求。
- 刘晓李青窦姿韩祥东张金张安山何彦林
- 关键词：原料血浆冷沉淀
- 人凝血因子Ⅷ工艺过程效价检测与分析被引量：3
- 2017年
- 目的测定人凝血因子Ⅷ(human coagulation factorⅧ,FⅧ)生产过程中各关键质控点的FⅧ活性,计算各工序收率。方法采用FⅧ效价测定法(一期法)测定原料血浆、冷沉淀溶解液、化学沉淀后溶液、S/D病毒灭活后溶液、层析纯化洗脱液、超滤后原液、冻干后样品及干热后样品中FⅧ的效价;Lowry法测定各样品的蛋白含量并计算比活;根据各步制品的效价和重量计算各工序FⅧ活性的收率。结果 10批血浆中FⅧ效价平均值为(0.62±0.17)IU/ml,比活平均值(0.011±0.003)IU/mg;FⅧ活性在各步工序中回收率为:离心冷沉淀工序73.78%,化学沉淀工序79.64%,S/D病毒灭活工序93.10%,离子交换层析工序64.96%,超滤工序94.20%,冻干工序90.33%,干热病毒灭活工序79.25%,整个工艺FⅧ的总活性回收率23.96%。按照血浆中FⅧ平均含量0.62 IU/ml计算,每升血浆可产出FⅧ149 IU。7批FⅧ的生产过程中,原液中FⅧ比活较冷沉淀平均提高了170倍。结论获得了由原料血浆到FⅧ成品各关键工序的收率,为生产出高纯度、高质量的FⅧ提供了数据支持。
- 李青刘晓文圆窦姿张安山张金何彦林
- 关键词：效价工艺过程收率
