刘玉良
- 作品数：31 被引量：137H指数：8
- 供职机构：扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学经济管理更多>>
- H9N2禽流感病毒反向遗传系统转录/表达载体的构建和验证被引量：6
- 2005年
- 设计带有BsmBI、BsaI或AarI酶切位点的引物,用RT-PCR扩增H9N2亚型禽流感病毒(AIV)的8个基因全长片段,克隆入双向转录/表达载体pHW2000,并在PB2、PB1和NA基因中共引入了3个沉默突变标签。将其2个表面基因(HA和NA基因)加上任意1个内部基因,而其它5个内部基因来自A/WSN/33,进行了6种3+5组合形式的基因重排,把相应组合的转录/表达质粒共转染COS-1细胞,均产生了预期组合、有感染性的H9N2亚型流感病毒,表明亲缘关系遥远的流感病毒可以互相获取基因片段产生重组病毒,提示表面结构基因和单个内部基因不足以限制H9N2AIV在哺乳动物细胞上的宿主范围,同时也验证了构建的8个转录/表达载体均能有效工作,为进一步研究H9N2亚型AIV基因结构与功能、AIV与宿主之间的关系打下了基础。
- 卢建红邵卫星龙进学刘玉良石火英刘秀梵
- 关键词：禽流感病毒H9N2亚型反向遗传技术基因重排
- H5N1亚型禽流感病毒A/duck/Shandong/093/2004株的全基因克隆及序列分析被引量：17
- 2005年
- 应用流感病毒通用引物[4]和H5N1亚型禽流感(Avian influenza virus,AIV)的型特异性引物,成功的扩增出H5N1亚型禽流感病毒A/duck/Shandong/093/2004株(简称A/D/SD/04)的全基因序列(包括5′和3′端的非编码区序列).A/D/SD/04的基因组核苷酸全序列与18株网上公布的禽流感基因序列进行比较和分析,结果与4株鸭源H5N1的5～7个基因具99%以上的同源性;与14株H5N1有至少一个以上内部基因同源性在95%以上.与H9亚型AIV代表株A/Quail/Hongkong/G1/97(简称G1株)和A/Chicken/Beijing/1/94(简称BJ94)比较,除了非结构基因(Nonstructural gene,NS)与G1株的同源性为95.3%外,其余基因均在36.6%～92.1%之间.说明A/D/SD/04没有H9N2基因的直接整合,是H5N1毒株在自然界的重组株.推导的HA氨基酸序列分析,A/D/SD/04 的血凝素(Heamgglutinin,HA)裂解位点与比较的16株AIV的序列一致,是高致病性禽流感的分子特征(PQRERRRKKR/G),第226位氨基酸是对禽类和哺乳细胞均具有亲嗜性的蛋氨酸(Met).神经氨酸酶(Neuraminidase,NA)在第48位氨基酸(颈部)后有20个氨基酸的缺失,但非结构蛋白(NS)没有在79～84氨基酸发生缺失.碱性聚合酶2(PB2)的627位氨基酸是亲禽类细胞的谷氨酸(Glu,E).结合生物学特性和分子特征,A/D/SD/04对小鼠的致病力是由多种因素决定,其可能是一株对鸡高度致病,并逐渐获得对哺乳动物致病能力的中间重组病毒.
- 龙进学王曲直卢建红刘玉良刘秀梵
- 关键词：H5N1亚型禽流感病毒通用引物全基因组序列
- 两种消毒剂对禽流感病毒的杀灭效果比较
- 2002年
- 卢建红邵卫星刘玉良韦栋平吴艳涛张如宽刘秀梵
- 关键词：消毒剂禽流感病毒杀灭效果
- 鹅源新城疫病毒NP、P和L基因的克隆与P基因的表达鉴定
- 本文对一株鹅源新城疫病毒NP、P和L基因成功克隆进真核表达载体,并且对P基因的表达进行了初步的鉴定.
- 刘玉良吴艳涛黄勇邵卫星韦栋平卢建红张艳梅张如宽刘秀梵
- 关键词：鹅源新城疫病毒基因克隆基因表达
- 文献传递
- 新城疫病毒P基因的RNA编辑及其抗干扰素作用被引量：7
- 2004年
- 新城疫病毒的P基因转录过程中在第484特定位置插入非模板G碱基发生RNA编辑现象 ,产生两种非结构蛋白 ,即V和W蛋白。文章综述了副黏病毒 (主要是新城疫病毒 )P基因RNA编辑的机理。
- 刘玉良刘秀梵
- 关键词：新城疫病毒P基因RNA编辑
- RNA病毒“拯救”技术被引量：6
- 2003年
- 介绍了RNA病毒拯救技术体系建立的简要过程、拯救成功与否的主要影响因素以及优化拯救体系的主要研究进展。着重介绍了该技术在分子病毒学研究和疾病防制中的重要应用及发展前景。
- 刘玉良刘秀梵
- 关键词：RNA病毒分子病毒学疾病防制
- 鹅源新城疫病毒ZJ1株拯救体系相关因素的探索
- 2006年
- 在构建了鹅源新城疫病毒(NewcastleDiseaseVirus,NDV)ZJ1毒株的微型基因组和表达该病毒NP、P与L蛋白的辅助质粒的基础上,通过对该病毒拯救体系中的重要影响因素如ZJ1在易感细胞的增殖、热休克对拯救效率的影响、表达T7RNA聚合酶的重组痘苗的感染复数、胞嘧啶阿拉伯呋喃糖苷(Arac)对重组痘苗复制的影响以及共转染质粒的比例和量等进行了探索。以上研究为该病毒的成功拯救及开展其它相关研究奠定了基础。
- 张艳梅提金凤胡顺林刘玉良刘秀梵
- 关键词：新城疫病毒
- 共表达新城疫病毒F基因和H9亚型禽流感病毒HA基因的重组鸡痘病毒被引量：16
- 2004年
- 应用RT PCR扩增出新城疫病毒F4 8E8株融合蛋白 (F)基因 ,将其克隆入pGEM Teasyvector构建重组质粒pGEM TF并进行测序确证。分别从pGEM T和pUCHA切下F基因和H9亚型禽流感病毒F株 (A chicken china F 1 998)血凝素 (HA)基因 ,通过一系列分子生物学操作步骤插入到质粒pFPV7S中的鸡痘病毒基因组复制非必需片段构建重组质粒p7SHF ,其中F基因和HA基因分别由鸡痘病毒启动子PE L和合成启动子PS调控。最后将P1 1 LacZ报告基因表达盒插入质粒p7SHF获得转移载体pFPVHF ,用以转染已预先感染鸡痘病毒 2 82E4疫苗株的鸡胚成纤维细胞 (CEF)。通过在含有X Gal的营养琼脂上连续挑选蓝色病毒蚀斑获得并纯化重组病毒。PCR和Southernblot检测证实了F基因和HA基因已插入鸡痘病毒的基因组 ;间接免疫荧光试验结果表明重组病毒能够同时正确表达HA和F蛋白。
- 韦栋平刘玉良邵卫星卢建红刘秀梵
- 关键词：新城疫病毒H9亚型禽流感病毒重组鸡痘病毒血凝素
- 用反向遗传技术致弱基因VIId型鹅源新城疫病毒ZJI株
- 将新城疫病毒ZJI株基因组cDNA全长分成7个片段,依次连接并克隆至TVT7R转录载体中,构建了含ZJI株全基因组cDNA的转录载体(pNDV/ZJI),pNDV/ZJI与三个辅助表达质粒pCI-NP、pCI-P和pCI...
- 胡顺林张艳梅孙庆刘玉良吴艳涛刘秀梵
- 关键词：新城疫病毒反向遗传技术
- 文献传递
- 用反向遗传技术致弱基因VIId型鹅源新城疫病毒ZJI株被引量：8
- 2007年
- 将新城疫病毒ZJI株基因组cDNA全长分成7个片段,依次连接并克隆至TVT7R转录载体中,构建了含ZJI株全基因组cDNA的转录载体(pNDV/ZJI),pNDV/ZJI与3个辅助表达质粒pCI-NP、pCI-P和pCI-L共转染BSR-T7/5细胞,成功拯救出了具有感染性的新城疫病毒粒子。设计两对引物,经overlapPCR方法将该毒株F蛋白裂解位点的112、115和117位碱性氨基酸突变成弱毒株特征的非碱性氨基酸后,替换pNDV/ZJI上的对应序列,构建了转录载体pNDV/ZJIFM,将pNDV/ZJIFM与3个辅助表达质粒共转染BSR-T7/5细胞,成功拯救出了致弱的基因VIId型鹅源新城疫病毒NDV/ZJIFM,获救病毒的鸡胚最小致死剂量平均死亡时间(MDT)大于120h,同时该病毒的脑内接种致病指数(ICPI)为0.16,上述结果表明,获救病毒的毒力已被致弱,是一个较为理想的疫苗候选株。
- 胡顺林孙庆吴艳涛张艳梅刘秀梵刘玉良王曲直
- 关键词：新城疫病毒拯救致弱
