刘红升
- 作品数：12 被引量：16H指数：2
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- 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>
- 妊娠相关血浆蛋白-A在血管平滑肌细胞中表达及其细胞学功能被引量：1
- 2008年
- 目的:研究兔动脉粥样硬化(AS)模型中AS易损斑块培养出的血管平滑肌细胞(VSMCs)妊娠相关血浆蛋白-A(PAPP-A)的表达及其细胞学功能.方法:建立新西兰兔AS易损斑块模型,体外培养来源于主动脉正常组织、易损斑块组织的VSMCs.RT-PCR检测这两个不同来源VSMCs中PAPP-A的mRNA表达水平;细胞免疫组化方法检测PAPP-A的蛋白表达,并确定表达部位.利用MTT法测定细胞生长曲线,采用划痕法检测细胞迁移能力,流式细胞仪检测细胞凋亡.结果:易损斑块组织的细胞PAPP-A的mRNA水平高;正常组织的VSMCs无PAPP-A的mRNA表达.免疫组织化学结果显示PAPP-A在易损斑块平滑肌细胞为强阳性表达,主要分布于细胞的胞质,正常主动脉的VSMCs中未见PAPP-A表达.来自易损斑块的血管平滑肌细胞生长能力强,较易迁移但易调亡.结论:易损斑块的血管平滑肌细胞强烈表达PAPP-A,并表现出相应的细胞学功能改变.
- 刘红升张清华蒋知新彭凌李安全
- 关键词：妊娠相关血浆蛋白-A血管平滑肌细胞易损斑块
- 艰难梭菌细胞毒素B羧基末端功能区的克隆、表达及其生物学特性
- 目的: 艰难梭菌(Clostridium difficile)是造成抗生素相关性结肠炎及伪膜性结肠炎(PMC)的最常见致病菌。该菌造成老年人和免疫功能低下的病人抗生素相关性腹泻及肠炎的发病率及死亡率明显升高。Cdi...
- 刘红升
- 关键词：艰难梭菌重组蛋白多克隆抗体酶联免疫吸附
- 文献传递
- PAPP-A、IGF-I表达与动脉粥样硬化相关功能的研究
- 本研究分为四部分：
第一部分：PAPP-A、IGF-I在ACS患者中的临床意义
目的：检测ACS患者外周血清PAPP-A、IGF-I浓度变化规律，探讨它们在ACS发病机制中的作用。
方法：选...
- 刘红升
- 关键词：动脉粥样硬化冠心病PAPP-AIGF-I表达发病机制酶联免疫测定
- 文献传递
- PAPP-A、IGF-Ⅰ在非ST段抬高的急性冠脉综合征患者中的临床意义被引量：2
- 2008年
- 目的探讨非ST段抬高的急性冠脉综合征(Non-STelevation acute coronary syndromes,NSTEACS)患者血清妊娠相关血浆蛋白A(pregnancy associated plasma-A,PAPP-A)及胰岛素样生长因子Ⅰ(insulin-like growth factor-1,IGF-Ⅰ)浓度变化的临床意义。方法选择最终以出院诊断为标准NSTEACS患者65例,冠脉造影证实的稳定型心绞痛(stableangina pectoris,SAP)患者28例,正常对照30例。入院后12h内均抽取静脉血5ml,测定IGF-Ⅰ、PAPP-A及C反应蛋白(C-reactive protein,CRP),常规测定肌钙蛋白T(cTnT)、血脂、血糖等,各组间进行比较并进行相关性分析。结果NSTEACS患者的PAPP-A、IGF-Ⅰ、CRP明显高于SAP组和对照组(P<0.01),IGF-Ⅰ在SAP组明显低于对照组(P<0.01),而PAPP-A、CRP在SAP与对照组中无显著差异(P>0.05)。在NSTEMI组中PAPP-A与IGF-Ⅰ呈正相关,PAPP-A、IGF-Ⅰ与CRP均呈正相关,而与cTnT无明显相关性。结论PAPP-A、IGF-Ⅰ对NSTEACS具有一定的诊断、预测价值。
- 刘红升张清华蒋知新彭凌李安全
- 关键词：妊娠相关血浆蛋白A胰岛素样生长因子I
- 艰难梭菌细胞毒素B功能区的原核表达及免疫原性被引量：2
- 2007年
- 目的纯化已表达艰难梭菌(CD)细胞毒素B羧基末端受体结合区(CD3)的基因,并检测其免疫原性。方法PCR克隆目的基因到表达载体pET22b(+),重组质粒转化到E.coliBL21(DE3),经IPTG诱导表达,利用金属螯合色谱层析方法纯化后,SDS-PAGE方法对纯化蛋白进行分析。并检测其免疫反应性。结果成功表达的是分子质量约为71.3 ku的重组蛋白,占菌体总蛋白的34%,可溶性表达占上清的22.7%,包涵体占沉淀的25.7%。重组蛋白纯化后可溶性蛋白浓度为0.781 g/L。并与抗毒素B抗体具有良好的免疫原性。结论成功克隆了CD3基因,构建的重组质粒可高效表达CD3重组蛋白,为CD相关性疾病的诊断及后期制备疫苗,提供了有力的保障。
- 刘红升张清华蒋知新姜泊
- 关键词：艰难梭菌基因表达蛋白质纯化免疫原性
- 艰难梭菌细胞毒素B功能区的表达
- 2007年
- 刘红升张清华姜泊蒋知新
- 关键词：艰难梭菌克隆分子基因表达
- 艰难梭菌细胞毒素B功能区的克隆及序列分析被引量：3
- 2007年
- 目的克隆艰难梭菌(Clostridium difficile,C.d)细胞毒素B羧基末端功能区(CDB3)基因,并对其进行测序及生物信息学分析。方法利用PCR技术扩增CDB3基因,并将其定向插入pET-22b(+)载体中,以DNA自动分析仪进行序列测定,并以生物信息学软件分析其生物学特性。结果成功克隆了艰难梭菌CDB3基因,经测序表明与GenBank中分布的Clostridium difficile VPI10463的ToxinB3基因序列完全一致。DNAstar软件预测其蛋白质的相对分子量(Mr)约为71.3 kD,并显示出良好的抗原性。结论研究获得了序列正确的CDB3基因,为其重组表达及其相关研究奠定了良好基础。
- 刘红升张清华蒋知新
- 关键词：艰难梭菌生物信息学分析
- 大鼠胸主动脉平滑肌细胞胶原酶解法培养与鉴定被引量：7
- 2009年
- 目的探讨复合胶原酶解离大鼠胸主动脉的原代细胞培养方法及其生长特性。方法0.2%Ⅰ型胶原酶和0.2%Ⅱ型胶原酶解离大鼠胸主动脉平滑肌,用相差显微镜观察其生长情况,免疫组化鉴定平滑肌细胞的纯度。结果24h内细胞贴壁生长,1周左右细胞可传代,传代后细胞呈典型的"峰-谷"样生长,第3代细胞用α-actin染色鉴定平滑肌细胞,其纯度为96%。结论复合胶原酶解离法原代细胞培养是一种简单、周期短、纯化速度快的方法;可作为一种可靠的细胞模型。
- 杨东伟张清华蒋知新刘红升
- 关键词：胸主动脉平滑肌细胞细胞培养胶原酶
- 炎性因子对妊娠相关血浆蛋白A分泌的影响
- 2008年
- 目的研究炎性因子白细胞介素-6（IL-6）和白细胞介素-1β（IL-1β）对人冠状动脉平滑肌细胞（HCASMC）分泌妊娠相关血浆蛋白A（PAPP—A）的影响。方法一期：分别加入20μg／L的IL-1β（IL-1β组）、10μg／L的IL-6（IL-6组）和0μg／L的炎性因子（对照组），孵育2、4、8、24、36h后，分别收集细胞上清液；二期：分别采用IL-1β（0、5、20、40μg／L）和IL-6（0、5、10、50μg／L）刺激HCASMC，6h后收集细胞和细胞上清液。采用ELISA法检测细胞上清液内PAPP—A的表达量。结果一期：IL-1β组PAPP—A表达量在2h时开始增加，8、24、36h其浓度显著高于对照组，并随时间的延长而不断增加；IL-6组PAPP—A的表达量在2h开始增加，4、8、24、36h其浓度显著高于对照组，并随时间的延长而不断增加。二期：随着IL-1β和IL-6剂量的增加，PAPP—A的表达量不断升高，其中TL-1β组20μg／L和40μg／L均显著高于0μg／L时的浓度；IL-6组10μg／L和50μg／L均显著高于0μg／L时的浓度。结论IL-1β和IL-6可使HCASMC分泌PAPP—A增加，并呈时间和剂量依赖性。
- 张清华李丽蒋知新祝开思王凯李运田刘红升夏爱祥
- 关键词：白细胞介素1白细胞介素6妊娠相关血浆蛋白A炎症
- Clostridium difficile细胞毒素B羧基末端功能区的克隆与表达
- 2005年
- 目的:克隆并表达Clostridiumdifficile(Cdifficile)胞毒素B羧基末端功能区基因,为探索高效的防治Cdifficile感染的疫苗和诊断抗原奠定基础.方法:提取Cdifficile染色体基因,用PCR方法扩增ToxinB3基因,将其克隆至表达载体PET22b(+),用重组质粒转化大肠杆菌[E.coliBL21(DE3)],并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达.用SDS-PAGE方法对表达产物进行分析.结果:从Cdifficile基因组DNA中成功地克隆了毒素B的羧基末端重复区域的1848bp基因,经过双酶切、PCR和测序鉴定分析,插入到载体的基因与GenBank中公布的CdifficileVPI10463的ToxinB3基因序列的同源性为99%.SDS-PAGE显示,目的基因表达产物的分子质量为71.3ku,利用表达载体PET22b(+)表达出蛋白质,重组蛋白表达量占菌体总蛋白的34.8%.结论:含CdifficileToxinB3基因的PET22b(+)重组质粒能高效表达目的基因.该重组子的构建为Clostridiumdifficile相关性疾病的诊断及后期制备疫苗,提供了有力的保障.
- 刘红升姜泊陈村龙陈学清
- 关键词：羧基末端功能区BL21(DE3)基因表达产物诊断抗原质粒转化
