刘艳青
- 作品数：15 被引量：19H指数：3
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- 一种重组减毒鼠伤寒沙门氏菌载体疫苗及制备方法
- 本发明涉及一种重组减毒鼠伤寒沙门氏菌载体疫苗，其包含抗原亚单位EspA、IntiminC300和Stx2B，上述抗原亚单位来源于肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7；本发明还涉及上述重组减毒鼠伤寒沙门氏菌载体疫苗的...
- 毛旭虎邹全明肖大平宁元元刘艳青王庆旭易勇余抒程建平童文德张卫军马颖
- 文献传递
- 一种肠出血性大肠杆菌O157:H7基因工程疫苗及其制备方法
- 一种多价融合型肠出血性大肠杆菌O157:H7基因工程疫苗，其采用肠出血性大肠杆菌O157:H7毒力抗原志贺毒素Ⅱ结合亚单位、紧密粘附素及Ⅲ型分泌蛋白A通过基因重组方法构建融合工程菌，经高密度发酵及一系列的纯化程序从而获得...
- 毛旭虎邹全明刘艳青王庆旭易勇顾江余抒
- 文献传递
- 肠出血性大肠埃希菌O157∶H7黏附HeLa细胞模型的建立被引量：4
- 2007年
- 目的建立肠出血性大肠埃希菌O157∶H7体外黏附HeLa细胞模型,为进一步研究其致病机制奠定基础。方法以细菌黏附HeLa细胞数量为指标,分别评价细菌数量、细菌与细胞孵育时间对细菌黏附数量的影响,得到最佳条件,最后肌动蛋白荧光染色(FAS)试验鉴定模型。结果加入细菌为1×105CFU,细菌与细胞孵育4h时,黏附细胞的数量最佳,FAS检测发现该条件下细菌能够引起细胞特异性黏附、擦拭(attaching&effacing,A/E)损伤,模型建立成功。结论成功建立O157∶H7体外黏附HeLa细胞模型,为进一步研究其致病机制提供了条件。
- 余抒顾江曾浩杨琴刘艳青张卫军罗萍王庆旭毛旭虎
- 关键词：肠出血性大肠埃希菌O157:H7细胞模型HELA细胞
- 肠出血性大肠杆菌O157：H7（EHEC O157：H7）基因工程多亚单位融合蛋白疫苗的实验研究
- 肠出血性大肠杆菌/(Enterohemorrhagic Escherichia coli, EHEC /) O157:H7/(本文简称O157/)是一种重要的人畜共患传染病病原菌。自1982年被确认为致病菌以来的20多年...
- 刘艳青
- 关键词：融合蛋白
- 文献传递
- 原核融合表达载体的设计、构建及应用被引量：7
- 2008年
- 目的利用EspA(肠出血性大肠杆菌O157:H7Ⅲ型分泌蛋白A)作为融合伴体分子,构建一种高效原核融合表达载体。方法在EspA的羧基端设计一Linker,包括柔韧区,肠激酶酶切位点和多克隆位点。PCR分别扩增EspA、Linker基因,利用重叠延伸PCR技术获得二者融合基因,T-A克隆后插入表达载体pET-28a(+),构建高效原核表达载体-pEspA。分别将IL-24、GFP等六种基因克隆入pEspA,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导融合蛋白表达,SDS-PAGE检测融合蛋白。以EspA单克隆抗体亲和层析柱纯化融合蛋白,融合蛋白经肠激酶酶切后再通过Ni2+亲和层析柱获得外源蛋白。分别利用MTT法和紫外光激发实验鉴定IL-24、GFP生物学活性。结果构建的表达载体pEspA可高效表达外源目的蛋白,使本身不表达或表达量低的目的蛋白获得高效表达。先以EspA单克隆抗体亲和层析一步纯化获得高纯度的融合蛋白,融合蛋白经肠激酶酶切后再以Ni2+亲和层析柱获得了外源蛋白,同时生物学活性实验显示纯化的IL-24、GFP具有较好的生物学活性。结论成功构建了基于EspA的新型高效原核融合表达载体,为蛋白的融合表达及纯化又提供了一种可供选择的工具。
- 程琰毛旭虎王庆旭余抒刘艳青张晓丽宁亚蕾邹全明
- 关键词：融合表达载体肠出血性大肠杆菌O157:H7
- 一种高效融合表达载体
- 本发明利用EspA(肠出血性大肠杆菌O157:H7Ⅲ型分泌蛋白A)作为融合伴体，构建一种高效原核融合表达载体。此载体含有T7强启动子、编码EspA伴体蛋白的核苷酸序列、连接区(包括柔韧区、6组氨酸纯化位点、肠激酶切割位点...
- 毛旭虎邹全明刘艳青王庆旭余抒顾江杨琴易勇杨珺张卫军程建平马颖童文德
- 文献传递
- 肠出血性大肠杆菌O157:H7 EspA与IntiminC300融合蛋白的构建与表达
- 目的：构建表达肠血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7Ⅲ型分泌蛋白EspA与紧密粘附素c-端免疫保护性片断(IntiminC300)的融合蛋白(EspA.IntiminC300)。方法：采用PCR技术从EHECO157:...
- 刘艳青毛旭虎王庆旭易勇曾明邹全明
- 关键词：融合蛋白
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- 肠出血性大肠杆菌O157：H7 EspA—Stx2B融合蛋白的克隆、表达及生物学活性研究
- 2009年
- 目的重组表达肠出血性大肠杆菌（EHEC）O157：H7的EspA与Stx2B融合蛋白，并对其生物学活性进行初步研究。方法采用PCR技术从EHEC O157：H7基因组中扩增espA基因及stx2B基因，两基因通过连接子（1inker）相连，T／A法克隆，克隆至pET-28a（＋）表达载体上，转化宿主细胞E.coli BL21（DE3），IPTG诱导表达，SDS—PAGE检测其表达量及表达形式，免疫印迹分析免疫反应性。用纯化的融合蛋白免疫BALB／c小鼠，检测其免疫原性，然后对免疫小鼠进行O157活菌攻毒试验和O157超声上清致死保护试验。结果构建的espa—stx2B融合基因片段的测序结果与理论预测值完全一致。融合蛋白在工程菌中以包涵体的形式表达，表达量约40％。免疫印迹显示融合蛋白能分别与EspA和Stx2B抗体发生抗原抗体反应。免疫小鼠其特异性抗体阳转率达100％，EspA和Stx2B抗体的几何平均滴度（GMT）分别增长了124．30倍和58．49倍。免疫小鼠O157活菌攻毒保护试验免疫后排菌时间和排菌量与对照组相比并没有明显改变，O157菌超声上清致死保护试验免疫组存活率为10／15，对照组全部死亡。结论在E．coli中高效表达了EspA—Stx2B融合蛋白，此融合蛋白具有良好的免疫原性和免疫反应性，融合蛋白免疫小鼠并不能降低细菌在小鼠胃肠道的黏附与定植，但却起到明显的免疫保护作用，保护率为66．7％（10／15）。
- 王庆旭毛旭虎彭燕刘艳青余抒程建平邹全明
- 关键词：EHECO157:H7融合蛋白
- 一种肠出血性大肠杆菌O157:H7基因工程疫苗及其制备方法
- 一种多价融合型肠出血性大肠杆菌O157:H7基因工程疫苗，其采用肠出血性大肠杆菌O157:H7毒力抗原志贺毒素II结合亚单位、紧密粘附素及III型分泌蛋白A通过基因重组方法构建融合工程菌，经高密度发酵及一系列的纯化程序从...
- 毛旭虎邹全明刘艳青王庆旭易勇顾江余抒
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- 新型免疫调节肽佐剂CEL-1000
- 2006年
- CEL-1000是一种新型的免疫调节肽,它在抗疟疾、人类免疫缺陷病毒(H IV)、单纯疱疹病毒(HSV)感染和肿瘤疫苗的研制方面具有潜在的佐剂活性,能促进1型辅助性T淋巴细胞(Th1)型免疫应答。
- 刘艳青毛旭虎邹全明
- 关键词：佐剂
