吴冰
- 作品数：5 被引量：21H指数：3
- 供职机构：第四军医大学唐都医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Stathmin蛋白的研究进展被引量：5
- 2005年
- Stathmin蛋白由于其特有的微管解聚活性,在细胞的增殖和分化及肿瘤发生中有十分重要的作用。抑制Stathmin蛋白的表达已经成为肿瘤基因治疗的新的靶点,并且已经证实Stathmin蛋白能够影响某些作用于微管的化疗药物的疗效,对于指导临床用药有一定的意义。Stathmin蛋白还能够促进神经系统的发育,因此受到更多的关注。
- 吴冰张立潮张惠中
- 关键词：STATHMIN神经系统肿瘤细胞周期
- SiRNA真核表达载体阻断HeLa细胞stathmin基因表达研究被引量：1
- 2005年
- 目的构建人stathmin基因的siRNA真核表达载体,探讨其对HeLa细胞中stathmin基因表达的干涉作用.方法将合成的siRNA寡核苷酸链退火形成双链,连接入经BamHⅠ和HindⅢ双酶切后的pSilencer4.1-CMV neo真核表达载体,酶切及测序鉴定.脂质体法转染重组质粒入HeLa细胞,G418筛选后RT-PCR检测其对stathmin基因mRNA的干涉效果.结果经酶切及测序鉴定,成功构建siRNA真核表达载体.经脂质体转染HeLa细胞后,RT-PCR显示所构建的干涉stathmin基因的真核表达载体成功地抑制了目的基因的表达,HeLa细胞中stathmin基因的mRNA表达水平明显降低.结论成功构建了人stathmin基因的RNA干涉真核表达载体pSilencer-S1和pSilencer-S2,并在HeLa细胞中有效地发挥了对stathmin基因表达的干涉作用.
- 王燕吴冰苏海川刘丽林芳张惠中
- 关键词：STATHMIN真核表达载体HELA细胞
- survivin启动子的克隆及在HeLa细胞中的特异生物活性被引量：7
- 2005年
- 目的:构建带有survivin启动子的pGL3Basic真核表达载体,探讨survivin启动子在HeLa细胞中的特异表达活性。方法:采用PCR技术扩增survivin启动子,插入pGL3Basic载体,构建携带survivin启动子的pGL3Basic真核表达载体(pGL3Basic/Surp)。纯化pGL3Basic/Surp质粒,用脂质体法转染HeLa细胞和正常血管内皮细胞ECV304,48h后收集转染细胞与荧光素酶底物反应,检测荧光素酶活性。结果:成功克隆1kbsurvivin基因启动子,并构建了携带有survivin基因启动子的pGL3Basic真核表达载体,转染后的Hela细胞荧光素酶活性为2074.2±78.5,而ECV304荧光素酶活性为9.7±1.1。结论:成功克隆的survivin启动子在HeLa细胞中表现出较高的肿瘤特异性活性,为进一步开发肿瘤的靶向基因治疗奠定了基础。
- 吴冰王燕任继鸿赵辉张利潮张惠中
- 关键词：SURVIVIN基因启动子基因治疗HELA细胞
- survivin启动子的克隆及在HeLa细胞中控制GFP特异性表达被引量：7
- 2005年
- 目的:扩增survivin基因启动子并构建带有survivin启动子的pEGFPN1真核表达载体,检测survivin基因启动子在HeLa细胞中的特异表达活性.方法:①以HeLa细胞基因组DNA为模板,PCR扩增survivin启动子,回收扩增产物并插入pGEMTEasy载体(T/Surp),测序鉴定.②分别双酶切TSurp载体和不含CMV启动子的pEGFPN1载体,回收surviv启动子酶切片段及pEGFPN1酶切线性化片段,连接回收产物构建携带survivin启动子pEGFPN1真核表达载体(pEGFN1/Surp),酶切鉴定.③转染HeLa细胞及正常血管内皮细胞ECV304,在荧光显微镜下观察GFP的表达.结果:酶切及测序证实成功扩增survivin基因启动子,并构建了携带有suvivin基因启动子的pEGFPN1真核表达载体.转染HeLa细胞和正常血管内皮细胞ECV304,在荧光显微镜下见HeLa细胞发出较强的绿色荧光,而在ECV304细胞未见绿色荧光结论:成功克隆的肿瘤特异性survivin启动子在HeLa细胞具有较强的肿瘤特异性启动活性,为进一步开发肿瘤的特异性基因治疗奠定了实验基础.
- 吴冰林芳刘丽王燕张惠中
- 关键词：基因疗法GFP
- survivin启动子调控siRNA真核表达载体的构建及对HeLa细胞中stathmin基因的干涉作用被引量：2
- 2007年
- 目的:探讨survivin基因启动子调控的siRNA真核表达载体对HeLa细胞中stathmin基因表达的肿瘤特异性封闭作用。方法:合成针对人stathmin基因的siRNA cDNA寡核苷酸链退火形成双链,连接入经BamHI和HindIII双酶切后的pSilencer4.1-CMV neo真核表达载体。PCR扩增suvivin基因启动子并测序,用EcoRI和BamHI分别双酶切,连接至经相同内切酶消化的载体,获得survivin启动子调控的siRNA真核表达载体,酶切及测序鉴定。脂质体法转染重组质粒入HeLa细胞,G418筛选。RT-PCR扩增stathmin基因,检测其对stathmin基因表达的干涉效果;流式细胞仪分析转染后HeLa细胞增殖周期的改变。结果:经酶切及测序鉴定,成功构建重组质粒;RT-PCR结果显示所构建的干涉载体可有效封闭stathmin基因表达;流式细胞仪分析结果显示,Hale细胞在stathmin siRNA作用下G2/M期细胞的比例明显增加。结论:survivin基因启动子调控的siRNA真核表达载体可有效地封闭HeLa细胞中stathmin基因表达并使HeLa细胞阻断于G2/M期,为以stathmin基因为靶点的恶性肿瘤生物治疗奠定了理论基础。
- 王燕吴冰苏海川高萍林芳刘丽任继鸿赵辉张惠中
- 关键词：SURVIVIN启动子STATHMINHELA细胞
