周剑芳
- 作品数：49 被引量：118H指数：6
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学轻工技术与工程更多>>
- 表达分泌荧光素酶的重组流感病毒构建及体外生物学特性研究
- 2023年
- 目的采用不同的流感病毒骨架构建表达分泌荧光素酶(Gaussia luciferase,Gluc)的重组流感病毒,同时研究其生长特性、遗传稳定性、Gluc表达水平、体外抗流感药物活性。方法在PR8NA的C端插入猪捷申病毒2A肽(porcine teschovirus-2A autocleavage peptide,P2A)自剪切位点及Gluc编码基因,其余7个质粒分别来源于A/Puerto Rico/8/34(PR8)(H1N1)和A/WSN/1933(WSN)(H1N1),通过流感病毒反向遗传学8质粒系统拯救重组病毒,分别命名为PR8NAGluc/PR8和PR8NAGluc/WSN。检测重组病毒遗传稳定性;对比PR8NAGluc/PR8和PR8NAGluc/WSN的荧光强度;检测重组病毒的生长动力学;同时测定PR8NAGluc/WSN荧光强度与半数组织培养感染剂量(median tissue culture infective dose,TCID_(50))的相关性及对奥司他韦、法匹拉韦和莲花清瘟的体外抗流感药物活性。结果通过反向遗传学成功拯救出以PR8和WSN为骨架表达Gluc的重组病毒。相对于PR8骨架,以WSN为骨架明显提高了Gluc的表达且遗传稳定,复制动力学比野生型稍低。PR8NAGluc/WSN荧光强度与TCID_(50)有较好的相关性,其对奥司他韦、法匹拉韦和莲花清瘟具有良好的敏感性。结论以WSN为骨架的重组病毒荧光表达强度比PR8骨架高,为高通量筛选抗流感病毒药物及研发流感病毒载体疫苗提供参考。
- 王东红邓瑶叶飞周剑芳王文黄保英王梦微孟昕谭文杰
- 关键词：反向遗传学荧光素酶重组病毒
- 妊娠晚期流感病毒感染对后代小鼠肺发育的影响
- 2013年
- 目的:研究妊娠晚期流感病毒感染对后代小鼠肺组织形态和肺表面活性蛋白(surfactant protein,SP)-B、-C表达的影响。方法:用非致死量流感病毒A/四川/SWL1/2009 H1N1稀释液滴鼻感染孕15 d BALB/c孕鼠,待其自然生产,取后代小鼠。称取各时点小鼠体重及肺组织重量;观察小鼠肺组织病理学改变;Western blotting法检测肺组织SP-B、-C表达的变化。结果:与对照组相比,感染组小鼠体重明显减轻,肺组织重量轻度增加,肺泡发育程度较低,肺泡隔厚度明显增加,辐射状肺泡计数(radial alveolar counting,RAC)明显减少,肺泡Ⅱ型上皮细胞数量无明显改变;SP-B的表达量在出生当天(P0)降低,在出生后4、7和14 d均明显升高,SP-C的表达在P0升高,在其它各检测时点显著降低。结论:妊娠晚期流感病毒感染可影响后代肺发育,改变后代肺组织SP-B、-C的表达模式,可能对后代肺功能产生深远影响。
- 张钰韦红周剑芳于在江舒跃龙
- 关键词：小鼠肺发育表面活性蛋白
- B型流感病毒系间重配进化方式对其生长特性的影响被引量：3
- 2016年
- 研究系间重配进化方式对B型流感病毒生长特性的影响。挑选2013-2015年中国分离的B型流感病毒野生型及系间重配代表毒株并传代扩增。以相同量的病毒感染细胞,检测不同时间点的TCID50值,测定生长曲线;进一步对病毒神经氨酸酶动力学常数（Km值）进行检测,分析神经氨酸酶活性。病毒生长曲线显示2013年和2014年病毒在感染后48h达滴度高峰,维持至72h后滴度逐渐下降;2015年病毒滴度则在24h达到高峰。2013年系间重配株B/福建同安/1565/2013与野生型病毒相当,而2013-2015年的其他系间重配病毒的生长曲线的峰值均不及同期的野生型病毒。通过神经氨酸酶活性实验得到病毒的Km值,显示系间重配病毒中B/福建同安/1565/2013NA蛋白的亲和力最高。2014年和2015年系间重配病毒的NA亲和力低于同期的野生型病毒。2014-2015年病毒检测结果显示,神经氨酸酶亲和力较强则生长特性较好,2013年病毒的神经氨酸酶活性与生长特性表现不一致。表面蛋白基因交换造成的系间重配毒株其神经氨酸酶活性与生长特性表现并不一致,提示2013-2015年,病毒的内部蛋白影响了病毒的生长特性,有待进一步研究。
- 张瑶周剑芳李希妍鲁健秦堃舒跃龙王大燕
- 关键词：流行性感冒B型流感病毒
- Peramivir体外抗禽流感H7N9病毒有效性研究被引量：2
- 2015年
- 目的 研究Peramivir体外抗禽流感H7N9病毒效果 方法 采用体外抗病毒实验方法和流感病毒神经氨酸酶抑制实验并结合病毒序列分析的方法 结果 体外抗病毒实验发现三个抗病毒药物peramivir,oseltamivir和zanamivir针对禽流感病毒A/Anhui/1/2013（H7N9）的抗病毒有效浓度EC50分别是0.74±0.24 μmol/L,25.5±16.0μmol/L,29.4±6.2μmol/L,但是针对A/Shanghai/1/2013（H7N9）的有效浓度分别是74.4±18.7 μmol/L,＞1000 μmol/L,和37.1±11.9 μmol/L,各自有100倍,大于40倍和1.2倍的升高.体外神经氨酸酶抑制实验发现三种药物对两个实验病毒均是敏感的.序列分析发现A/Shanghai/1/2013（H7N9）神经氨酸酶基因有R292K的突变,这种突变公认是oseltamivir耐药的表现.结论 在MDCK细胞上三种抗流感病毒药物均表现出对病毒A/Anhui/1/2013（H7N9）的有效性.但针对A/Shanghai/1/2013（H7 N9）病毒peramivir,oseltamivir有一定的抗性.判断一个病毒是否是耐药毒株需要结合神经氨酸酶抑制实验、序列分析和药物的抗病毒实验结果来综合分析.
- 董婕高荣保董丽波周剑芳蓝雨邹淑梅郭俊峰张烨薄洪舒跃龙
- 关键词：流感病毒A型抗药性
- 表达人高致病性禽流感病毒H5N1(安徽株)结构基因的DNA疫苗在小鼠中诱导的免疫应答分析被引量：4
- 2010年
- 本研究旨在研发经济、高效的人高致病性禽流感病毒H5N1实验疫苗并优化免疫方案。首先优化并合成H5N1(安徽株)的血凝素基因(HAop)和神经氨酸酶基因(NAop)并证实其正确表达,再构建含有H5N1(安徽株)结构基因的多个单顺反子(HAwt、HAop和NAop)和双顺反子(HAop/M2和NAop/M1)DNA疫苗质粒。随后,采用不同途径的体内电转法在第0周和第3周2次免疫Balb/C小鼠,初步分析了抗原特异性体液免疫(HA血凝抑制抗体,NA特异性抗体,中和抗体)和细胞免疫应答(IFN-γELISpot)的特点。结果表明:含有优化血凝素基因(HAop)和优化神经氨酸酶基因(NAop)的DNA疫苗可以快速激发较强的免疫应答,尤其是细胞免疫应答;皮内电转所激发的体液免疫应答强于肌肉电转。本研究为新型H5N1疫苗的研发以及免疫方案的优化奠定了基础。
- 王文陈红谭文杰邓瑶王敏刘源殷霄张柯管洁周剑芳舒跃龙阮力
- 关键词：H5N1DNA疫苗
- 全人源化抗中东呼吸综合征冠状病毒中和抗体
- 本发明公开了全人源化抗中东呼吸综合征冠状病毒中和抗体。本发明公开的中和抗体，由重链和轻链组成，轻链由VL和CL组成，重链由VH和CH组成，VH和VL均由决定簇互补区和框架区组成，决定簇互补区由CDR1、CDR2和CDR3...
- 谭文杰周剑芳邓瑶秦堃卢帅余双庆刘雪王文玲舒跃龙
- 文献传递
- 流感病毒H10亚型重配病毒在不同细胞上生长能力的比较
- 背景：2013 年我国首次发现人感染H10N8 禽流感病毒，该病毒已造成3 例人感染病例，其中2 例死亡.构建H10N8 疫苗是疫情防控的重要技术储备.目前WHO 主要利用反向遗传技术构建的重配病毒作为流感大流行相关禽流...
- 刘丽琦周剑芳鲁健李梓曾晓旭王大燕舒跃龙
- 流感H10亚型重配病毒在不同细胞生长能力的比较
- 2016年
- 目的评估两株流感H10亚型重配病毒在不同细胞内的生长特性，筛选可用于疫苗生产的细胞。方法基于A／Jiangxi-donghu／346／2013（H10N8）病毒的表面基因，利用反向遗传技术构建以高产PR8病毒为骨架的RG—H10N8（6＋2）和RG—H10N1（7＋1）两种重配病毒，在SPF鸡胚增殖病毒后．经序列测定确认，以质粒拯救RG-PR8病毒为对照，比较病毒在MDCK和Vero细胞上的生长敏感性；以相同MOI感染MDCK细胞后，比较病毒的生长特性。结果两种流感H10重配病毒和RG—PR8病毒在MDCK细胞上均能检测到病毒滴度，但是在Vero细胞上，RG—H10N8检测不到病毒滴度，RG-H10N1和RG—PR8可以检测到病毒滴度；用相同的MOI感染MDCK细胞后，RG—PR8生长能力强于两种重配病毒，两种重配病毒间差异不大。结论两种流感H10重配病毒在MDCK细胞上生长能力较好，MDCK较Vero细胞对H10重配病毒更敏感，来源不同的NA会影响病毒在Vero细胞上的生长敏感性。
- 刘丽琦周剑芳鲁健李梓曾晓旭赵翔王大燕舒跃龙
- 关键词：流感病毒
- 新甲型H1N1流感病毒小鼠致死模型的建立被引量：2
- 2011年
- 建立新甲型H1N1流感病毒小鼠致死模型,为研究致病性、宿主适应性以及疫苗保护性提供动物模型,并寻找病毒在适应宿主过程中影响毒力和适应性的关键位点。将新甲型H1N1流感病毒A/四川/SWL1/2009 H1N1在小鼠中连续传15代,各代次毒株均在MDCK细胞上增殖后进行测序,根据序列分析结果选择6个传代毒株感染小鼠,连续监测14 d体重和死亡情况;并对第14代和15代病毒在噬斑实验纯化后克隆和测序分析。原代病毒不致死BABL/C小鼠,经动物体内连续传代适应宿主动物后,其毒力增强,具体表现为所选的6个传代毒株中第7、11、15代毒株可以100%致死试验小鼠;分析这6个传代毒株的全基因组表明这些毒株的部分氨基酸位点发生突变。新甲型H1N1流感病毒经小鼠体内连续传代后,建立了小鼠致死模型,病毒毒力增强可能与某些氨基酸位点的改变有关。
- 朱云刘丽琦周剑芳朱闻斐秦堃于在江王大燕赵翔李希妍蓝雨舒跃龙
- 关键词：全基因组分析
- 共表达甲型流感病毒M1和HA双基因的重组腺病毒的构建及鉴定被引量：4
- 2009年
- 以我国分离的首株人H5N1亚型禽流感病毒(A/Anhui/1/2005)作为研究对象,通过引入内部核糖体进入位点序列(IRES),构建共表达H5N1亚型禽流感病毒膜蛋白基因M1和HA的重组腺病毒。PCR扩增禽流感病毒H5N1亚型M1和HA基因的全长可读框片段,先后亚克隆入pStar载体,然后扩增M1-IRES-HA片段并将其插入穿梭载体pShuttle-CMV,再与pAd-Easy载体在BJ5183菌中通过同源重组产生重组腺病毒载体,转化293细胞,包装出重组腺病毒Ad-M1/HA。将Ad-M1/HA感染293细胞,可观察到明显细胞病变效应,用免疫荧光及Western-blot方法均检测到M1和HA基因的表达。共表达M1和HA双基因的重组腺病毒的成功构建为开发新型重组腺病毒流感疫苗奠定了基础。
- 郭建强姚立红陈爱珺徐一贾润清薄洪董婕周剑芳舒跃龙张智清
- 关键词：血凝素腺病毒载体
