周玉坤
- 作品数：10 被引量：22H指数：3
- 供职机构：上海交通大学附属第六人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金黎介寿院士肠道屏障研究专项基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生化学工程轻工技术与工程更多>>
- 植物乳酸杆菌CGMCC NO．1258表层黏附蛋白的筛选鉴定被引量：2
- 2009年
- 黏附是细菌与肠上皮细胞（IEC）相互作用的基础。我们对植物乳酸杆菌CGMCC NO．1258表层黏附蛋白进行筛选和鉴定。
- 沈通一张明周玉坤秦环龙
- 关键词：植物乳酸杆菌黏附蛋白NO肠上皮细胞相互作用
- 植物乳杆菌对实验性阻塞性黄疸肠屏障功能的影响
- 目的：察植物乳杆菌对阻塞性黄疸胆汁内引流手术前后肠屏障功能的影响。方 法：建立实验性大鼠阻塞性黄疸和胆汁内引流模型， 观察喂饲植物乳杆菌前后门静脉血浆 D-乳酸、DAO和内毒素水平、肝功能改变，小肠黏膜肠上皮细胞凋亡变化...
- 周玉坤秦环龙
- 关键词：植物乳杆菌阻塞性黄疸肠屏障功能
- 益生菌对炎性肠病小鼠肠屏障功能的影响被引量：9
- 2011年
- 目的研究益生菌植物乳杆菌(LP)对炎症状态下肠屏障的修复机理。方法以白介素-10基因敲除(IL-10-/-)小鼠为炎性肠病模型,采用简单随机法(随机表)将空白对照(WT)小鼠和IL-10-/-小鼠分成4组:WT组、WT+LP组、IL-10-/-组和IL-10-/-+LP组,每组10只。分别灌饲Ringer液或LP溶液,持续4周。每周记录小鼠肠炎的临床表现,实验结束后收集小鼠结肠组织,进行病理评分和形态观察,ELISA法检测结肠组织促炎细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和干扰素-γ(IFN-γ)浓度,利用Ussing Chamber技术对小鼠结肠通透性及电生理变化进行分析,并用Western blot和免疫荧光分析法对结肠上皮细胞紧密连接蛋白进行定量和定位研究。结果与WT组相比,IL-10-/-组小鼠腹泻、直肠脱垂和体重丧失较明显(P<0.01);TNF-α和IFN-γ浓度明显升高(P<0.01);病理表现为大量炎性细胞浸润,偶见透壁性溃疡和隐窝脓肿形成;超微电镜提示紧密连接结构破坏;紧密连接蛋白(ZO-1、occludin、claudin-1)表达明显降低(P<0.01)且伴有异常分布;结肠上皮细胞甘露醇通透性升高(P<0.001),跨膜电阻值降低(P<0.001)。LP干预4周后,与IL-10-/-组相比,LP能显著改善肠道炎症的临床和病理表现,阻止紧密连接超微结构破坏,促进紧密连接蛋白的表达(P<0.01),降低结肠上皮细胞甘露醇通透性(P<0.001),升高跨膜电阻值(P<0.001),降低了TNF-α和IFN-γ的浓度(P<0.01),减轻了肠道炎症。结论 LP能通过促进肠上皮细胞间紧密连接蛋白的表达修复受损肠屏障功能,从而减轻肠道炎症。
- 陈红旗杨俊周玉坤张旻杭晓敏秦环龙
- 关键词：益生菌植物乳杆菌肠屏障紧密连接蛋白
- 结直肠癌转移生物标记物的蛋白质组学研究被引量：1
- 2009年
- 目的应用蛋白质组学技术寻找结直肠癌转移潜在标志物，研究氟尿嘧啶（5-Fu）对差异蛋白表达的影响，并初步探讨结直肠癌的转移机制。方法常规培养Lovo及SW480细胞至指数生长期后提取蛋白。采用MTF法检测5-Fu对此两种细胞的半数抑制浓度（IC50），分别用IC50的5-FU干预Lovo和SW480细胞后提取蛋白。对所提取的蛋白进一步行二维凝胶电泳，选取表达有显著差异的点进行质谱检验和生物信息学分析。采用Western blot及免疫荧光验证5-FU作用前后两种细胞显著差异蛋白的表达。结果二维凝胶电泳和质谱分析成功鉴定出11种差异蛋白．根据预设条件筛选出：核内不均匀核糖核蛋白K（hnRNP K）、蛋白质二硫键异构酶（PDI）。Western blot及免疫荧光实验显示;Lovo细胞株中hnRNPK蛋白表达较SW480高，PDI蛋白表达较SW480低：5-Fu干预后．Lovo细胞株中hnRNP K蛋白表达下调程度较SW480显著．免疫荧光强度减弱，SW480细胞株中PDI蛋白表达上调幅度较Lovo细胞显著，免疫荧光强度增强。结论hnRNP K和PDI表达在不同转移潜能结直肠癌细胞系Lovo和SW480存在显著差异，5-Fu干预后其表达有着规律性改变。
- 张鹏黄龙马延磊彭佳远沈通一陈红旗周玉坤储昭新张明秦环龙
- 关键词：LOVO细胞SW480细胞氟尿嘧啶蛋白质组学
- 阻塞性黄疸肠屏障功能变化研究进展被引量：2
- 2009年
- 阻塞性黄疸最重要的病理基础是肠黏膜屏障损伤导致的内毒素血症,肠黏膜屏障损伤机制十分复杂,近年来对于胆汁及其成分的作用、氧化应激及炎性介质的影响、肠道微生态的变化方面取得了一定的进展,本文将对此作一综述。
- 周玉坤秦环龙
- 关键词：黄疸阻塞性肠黏膜屏障胆红素
- 基于生物信息学的植物乳酸杆菌表层黏附蛋白的筛选及鉴定被引量：3
- 2009年
- 目的:筛选、鉴定及验证植物乳酸杆菌CGMCC No.1258表层黏附蛋白.方法:用盐酸胍结合超速离心法提取表层膜蛋白,通过HRP标记的黏蛋白作抗体Western blot找到含有黏附蛋白的条带进行质谱分析,生物信息学的TPP软件分析获得可能的蛋白,进行蛋白的分段表达克隆,并对纯化的蛋白用Western blot进行再次鉴定找到靶蛋白.同时将黏蛋白连接的sepharose 4B柱提取菌体黏附蛋白,通过制备的靶蛋白多克隆抗体对菌体黏附蛋白作Western blot进一步验证.结果:表层蛋白提取后,电泳及Western blot结果显示30-33 kDa处可及HRP标记的黏蛋白结合的阳性条带,随后进行质谱及TPP分析获得的蛋白为:(1)A型GTP连接蛋白;(2)丙酮酸氧化酶;(3)细胞分裂激活蛋白;(4)整合膜蛋白;(5)后期能力蛋白.并进行克隆表达及分段表达,并在此后的Western blot鉴定中呈强阳性条带显示靶蛋白是整合膜蛋白的第2段.在应用该靶蛋白制备的多克隆抗体进一步Western blot验证试验中发现同菌体黏附蛋白相作用的强阳性条带.结论:植物乳酸杆菌表层黏附蛋白为整合膜蛋白,并且该蛋白的黏附区域位于其第2段氨基酸序列中.
- 沈通一张明周玉坤陈红旗张鹏杭晓敏秦环龙
- 关键词：植物乳酸杆菌蛋白表达生物信息学
- 植物乳酸杆菌CGMCC NO.1258表层黏附蛋白同致病性大肠埃希菌竞争黏附肠上皮细胞的研究被引量：4
- 2009年
- 目的了解植物乳酸杆菌CGMCC NO.1258表层黏附蛋白(IMP2)在同肠上皮细胞(Caco-2)黏附作用中的机制。方法在制备和鉴定IMP2的多克隆抗体的基础上,同EPEC进行竞争黏附肠上皮细胞中,采用体外抗体阻断的方法检测IMP2对植物乳酸菌CGMCC NO.1258黏附作用的影响。结果多克隆抗体能够有效抑制植物乳酸菌CGMCC NO.1258对肠上皮细胞的黏附,并且导致EPEC对Caco-2细胞黏附的增加。结论IMP2在植物乳酸杆菌CGMCC NO.1258同肠上皮细胞黏附中发挥着重要的作用。
- 沈通一张明张鹏陈红旗周玉坤杭晓敏秦环龙
- 关键词：多克隆抗体
- 植物乳酸杆菌对阻塞性黄疸大鼠肝脏紧密连接蛋白表达的影响
- 目的：探讨植物乳酸杆菌（Lactobacillus plantarum, LP）对阻塞性黄疸大鼠肝脏 细胞凋亡及紧密连接（TJ）蛋白表达变化的影响。方法：健康雄性wistar 大鼠随机分为五 组：对照组;胆总管结扎组;胆...
- 张明周玉坤储昭新秦环龙
- 关键词：阻塞性黄疸植物乳酸杆菌紧密连接蛋白
- 植物乳杆菌关键技术开发及改善肠屏障临床应用
- 秦环龙杭晓敏陈红旗夏阳沈通一刘志华张和春周玉坤张旻张中伟
- 肠道因某些病理状态如继发于烧伤、体克、感染和大手术后，出现肠屏障破坏和微生态失衡，导致肠源性感染和细菌移位，且这一病理性改变贯穿于危重症患者救治的整个过程。可见，维持肠道功能的完整性和防控肠源性感染的发生是危重病人抢救的...
- 关键词：
- 关键词：植物乳杆菌微生态制剂
- 植物乳酸杆菌对阻塞性黄疸大鼠肝紧密连接蛋白表达的影响被引量：1
- 2009年
- 目的:探讨植物乳酸杆菌(LP)对阻塞性黄疸大鼠肝细胞凋亡和紧密连接(TJ)蛋白表达变化的影响。方法:将大鼠随机分为五组,即对照组、胆总管结扎组、胆总管结扎+LP组、内引流组和内引流+LP组,实验持续10d。给予添加LP组大鼠每天灌胃1010CFU。用TUNEL法测肝细胞凋亡阳性率;用透射电镜、Western blot、RT-PCR观察TJ超微结构及相关蛋白(Occludin,Claudin-1,Claudin-4,ZO-1)的表达和分布变化。结果:大鼠胆总管结扎10 d后肝细胞凋亡增多,口服LP后状况有所缓解。内引流+LP组较阻黄组凋亡降低(P<0.01)。大鼠肝细胞TJ破坏非常明显,口服LP后有所改善,内引流+LP组改善显著。内引流+LP组TJ蛋白mRNA及蛋白的表达改善最明显。结论:阻塞性黄疸大鼠内引流及口服LP对受损肝有明显地改善作用,肝细胞凋亡阳性率下降,TJ蛋白及mRNA表达明显好转,有效地抑制了阻塞性黄疸大鼠肝屏障的损伤。
- 张明周玉坤储昭新秦环龙
- 关键词：阻塞性黄疸植物乳酸杆菌细胞凋亡
