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用GAP启动子在毕节酵母中组成型表达人血管抑制素(英文)被引量：16: 2004年; 为探索用GAP启动子 (PGAP)取代AOX1启动子 (PAOX1) ,在毕节酵母 (P .pastoris)中组成型表达外源蛋白的可能性 ,应用PCR方法从P .pastoris染色体中扩增了GAP启动子 ,以其取代诱导型表达载体 pPIC9K上的PAOX1,构建了组成型表达载体 pGAP9K。将人血管抑制素 (AS)基因重组于pGAP9K的多克隆位点 ,获得含AS基因的重组质粒 pGAP9K AS。转化P .pastorisGS115 ,对获得的高拷贝转化子P .pastorisGS115 (pGAP9K AS)进行组成型表达 ,同时以诱导型转化子P .pastorisGS115 (pPIC9K AS)作为对照。SDS PAGE结果显示 :组成型转化子于培养 4d后AS的表达水平已达到高峰 ,分泌量为 5 8mg/L ;而诱导型转化子诱导 4d后表达的AS仅是组成型表达的 70 % ,诱导 6d后达到高峰 ,表达量也只是组成型表达系统表达高峰时 (4d)的 86 %。CAM分析和抗癌实验结果显示 :P .pastorisGS115 (pGAP9K AS)和P .pastorisGS115 (pPIC9K AS)表达的AS均具有抑制血管生成和C5 7BL/ 6J实验小鼠的B16黑色素瘤的生长 ,其平均瘤重抑制率分别达到 90 6 1%和 90 5 4 %。以上结果表明 ,以GAP启动子构建的组成型表达系统具有发酵时间较短、表达水平较高、不用甲醇诱导、操作系统比较简单等优点 ,PGAP可以取代PAOX1在P .pastoris中表达AS及其他外源蛋白。; 张爱联罗进贤张添元陈守才官文俊; 关键词：组成型表达毕节酵母 GAP启动子抗血管生成抗肿瘤

利用枯草杆菌整合表达嗜铬粒蛋白抗真菌片段被引量：6: 2004年; 为实现CGA1-76片段基因在枯草杆菌中的稳定表达,将CGA1-76片段基因的表达元件重组到枯草杆菌转座子质粒pHV1249微转座子mini＿Tn10内,利用mini＿Tn10将CGA1-76片段基因的表达元件整合到枯草杆菌DB1342染色体上,用氯霉素和红霉素筛选枯草杆菌转座工程菌DB1342(TnSVTQ)。DB1342(TnSVTQ)在无选择压力条件下经10d连续传代培养,转座子内氯霉素抗性丢失率为0%,说明转座子稳定整合在DB1342染色体上。SDS＿PAGE和免疫印迹分析结果表明,在蔗糖诱导下,CGA1-76片段基因在DB1342(TnSVTQ)中获得表达,产物被分泌到细胞外。孔穴琼脂扩散法测定表达上清的抑制真菌活性,结果表明重组CGA1-76能抑制烟曲霉菌和黄曲霉菌的生长,抑菌圈直径分别为9mm和8mm。; 李瑞芳罗进贤张添元贺国安吴江雪官文俊; 关键词：基因表达枯草杆菌抗真菌活性

枯草杆菌工程菌高密度发酵抗真菌肽的纯化与活性分析被引量：2: 2006年; 用30 L发酵罐研究了抗真菌肽枯草杆菌工程菌B.subtilisDB1342(pSC18 66)的高密度发酵工艺.通过补料和蔗糖诱导24 h后,工程菌DB1342(pSC18 66)生物量的A600值达到53,目的蛋白分泌量为25 mg/L.发酵液经硫酸铵沉淀浓缩后,过DEAE-Sephadex A 25离子交换柱和Sephadex G 75分子筛层析进行纯化,产物纯度达到90%以上.抑制真菌实验结果显示:纯化产物能抑制白假丝酵母、镰刀菌和链格孢霉菌的生长.; 李瑞芳罗进贤张添元顾取良官文俊甘菁菁; 关键词：抗真菌肽枯草杆菌高密度发酵纯化

钙网蛋白N50在毕节酵母中的表达、初步纯化及生物活性测定: 本文对钙网蛋白N50在毕节酵母中的表达、初步纯化及生物活性测定进行了研究。文章以实验室保存的pET-N58为模板应用PCR技术扩增了CRTN区编码122-171位氨基酸的DNA片段，克隆至酵母表达载体pPIC9K中，获得...; 官文俊; 关键词：癌细胞钙网蛋白生物活性; 文献传递

趋化因子受体CCR5亲合短肽的筛选被引量：4: 2005年; 趋化因子受体5(CCR5)是HIV-1与宿主细胞结合的辅助因子之一,其功能缺失或被CCR5拮抗剂封闭则会阻止HIV-1感染细胞.为得到与CCR5特异结合的肽类拮抗剂,采用噬菌体展示技术,以稳定表达CCR5的CHO细胞(CHO/CCR5)作为靶标,通过噬菌体随机12肽库筛选与CCR5特异结合的多肽;经过四轮筛选后,挑选20个阳性噬菌体克隆进行测序,从中得到11个含有AFDWTFVPSLIL序列的小分子肽.含该序列的噬菌体能与抗人CCR5单抗(2D7)竞争性结合CCR5,且合成肽AFDWTFVPSLIL对趋化因子RANTES与CHO/CCR5的结合具有明显的抑制作用,初步证明该小肽与CCR5具有特异性结合作用.; 王芳宇张添元罗进贤李瑞芳甘菁菁官文俊肖凡; 关键词：噬菌体展示 CHO细胞

人tumstatin基因的克隆、表达和抗体制备被引量：1: 2005年; 应用PCR技术从人胎肺cDNA文库中扩增tumstatin基因编码序列,克隆至pET_3c载体构建非融合表达的重组质粒pET_3c_tum,并在大肠杆菌E.coliBL21(DE3)中获得高效表达。表达蛋白经SDS_聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS_PAGE)分离、切胶回收后免疫新西兰大白兔,获得ELISA效价高达1∶1000的特异性兔抗人tumstatin抗血清。; 顾取良罗进贤张添元官文俊; 关键词：基因表达抗血清

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官文俊

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