尹仕伟
- 作品数：5 被引量：10H指数：2
- 供职机构：第三军医大学新桥医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- ANCA诱导中性粒细胞释放正五聚素蛋白3
- 2014年
- 目的:研究正五聚素蛋白3(PTX3)在中性粒细胞的表达及释放情况,为进一步探讨PTX3在抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)相关性小血管炎(AAV)中的作用及机制奠定基础。方法:采用PolymorphprepTM进行密度梯度离心分离健康志愿者和AAV患者外周静脉血中性粒细胞,通过健康人血清、AAV患者血清、TNF-α和溶酶体膜蛋白2(LAMP-2)抗体分别刺激健康人外周血中性粒细胞,ELISA检测培养上清PTX3水平,免疫荧光观察中性粒细胞胞外捕网(NETs)的形成,激光共聚焦显微镜检测可溶性识别受体PTX3的表达。结果:LAMP-2抗体及AAV患者血清均能促进中性粒细胞PTX3的释放。与正常中性粒细胞对照组相比,LAMP-2抗体刺激组中性粒细胞上清PTX3水平明显升高(P<0.01);AAV患者血清刺激组中性粒细胞中PTX3表达的荧光强度显著高于用健康人血清刺激的对照组(P<0.01),进一步通过激光共聚焦显微镜进行形态学观察,发现PTX3由中性粒细胞通过NETs形成释放。结论:PTX3可由ANCA诱导的NETs释放至胞外,参与血管炎的病理生理过程。
- 谢京唐莎张莹尹仕伟高雪静施维维王莉邹丽云吴玉章张静波
- 关键词：中性粒细胞抗中性粒细胞胞浆抗体血管炎
- FimH融合蛋白诱导大鼠肾小球局灶坏死性损伤的机制研究被引量：2
- 2014年
- 目的探讨细菌FimH融合蛋白诱导大鼠肾小球局灶坏死性损伤的可能机制。方法采用纯化的大肠杆菌FimH1-156融合蛋白（150μg）联合Titermax金佐剂（150μl）皮下注射免疫Wistar—Kyoto（WKY）大鼠，对照组采用PBS（150μl）联合Titermax金佐剂（150μl）。监测各时间点（0、3、7、14、21、28、35、50d）大鼠24h尿蛋白量（mg）的变化，于免疫后21d、35d和50d处死大鼠，检测大鼠血清BUN、Scr、尿酸（UA）水平，观察肾、肺组织病理变化，ELISA法检测血清白细胞介素（IL）-17A水平。结果（1）模型组大鼠24h尿蛋白量在免疫后第3天开始升高，第7、35、50天时显著高于对照组[（8．59±1．25）mg比（3．08±1．08）mg、（10．33±1．10）mg比（6．40±0．61）mg、（12．45±1．73）mg比（5．93±0．83）mg，均P〈0．05]。（2）免疫后50d，模型组大鼠血清BUN、Scr、UA水平均显著高于对照组[（6．76±0．20）mmol／L比（5．82±0．13）mmol／L、（58．00±1．53）μmol／L比（25．67±1．45）μmol／L、（61．67±7．27）μmol／L比（31．33±2．73）μmol／L，均P〈0．05]。（3）免疫后35d，肾脏组织显示局灶坏死，肺泡壁增厚、部分断裂及炎性细胞浸润，免疫后50d肾小球新月体形成。（4）免疫WKY大鼠35、50d后，模型组血清IL-17A水平均显著高于对照组[（46．97±5．00）ng／L比（11．27±2．67）ng／L、（41．95±5．51）ng／L比（16.31±1．64）ng／L，均P〈0．05]。（5）线性回归分析显示模型组大鼠血清IL-17A与24h尿蛋白量呈正相关（r=0．557，P=0．021）。结论细菌FimH融合蛋白诱导大鼠肾小球局灶坏死性损伤及肺损伤，IL-17A参与了FimH融合蛋白诱导的大鼠肺、肾损伤过程。
- 尹仕伟张莹唐莎邹丽云高雪静张晋宇吴玉章张静波
- 关键词：血管炎白细胞介素-17
- 抗中性粒细胞胞质抗体相关性血管炎的治疗现状及进展被引量：7
- 2012年
- 随着大量针对抗中性粒细胞胞质抗体(ANCA)相关性血管炎(ANCA-associated systemic vasculitis,AASV)临床试验的开展,一些新的循证医学结果逐渐达成共识:(1)糖皮质激素和环磷酰胺仍是AASV诱导期最主要的治疗手段,静脉注射环磷酰胺较口服更好;(2)对早期轻症AASV,甲氨蝶呤可以替代环磷酰胺,重症患者可行血浆置换;(3)利妥昔单抗(美罗华)已被证明在诱导AASV缓解方面与环磷酰胺有同样效果,对复发病例更优,有望成为标准治疗药物;(4)维持期治疗可用硫唑嘌呤;(5)随着疾病机制的不断深入,"分子治疗"被寄予厚望。本文就近年来基于主要临床试验所取得的免疫治疗进展作一综述。
- 尹仕伟张静波
- 关键词：系统性血管炎抗中性粒细胞胞质抗体免疫抑制剂
- FimH_(1-156)融合基因的构建及其原核蛋白表达与纯化
- 2014年
- 目的构建含有与溶酶体膜蛋白2(LAMP-2)P41-49完全同源序列的尿路致病性大肠杆菌(UPEC)Ⅰ型菌毛FimH1-156为目的基因的原核载体,表达并纯化FimH1-156融合蛋白。方法采用PCR克隆pPKL241质粒获取FimH1-156基因,插入原核表达载体pET28a(+);将重组表达质粒转染感受态E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达FimH1-156融合蛋白,超声裂解细菌,NiNTA层析法进行纯化,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析、蛋白免疫印迹法(Western blot)对其进行鉴定。结果成功构建表达载体,经对融合蛋白表达条件的优化,在IPTG浓度为1mmol/L,诱导4h目的蛋白表达量最高,主要以包涵体形式存在;Western blot证实该FimH1-156融合蛋白可与抗6×His单克隆抗体发生结合反应。结论成功克隆FimH1-156融合蛋白表达基因并构建至原核表达载体,获得了包涵体纯化的FimH1-156融合蛋白,为下一步建立实验动物模型奠定了基础。
- 尹仕伟邹丽云张莹张晋宇唐莎施维维吴玉章袁发焕张静波
- 关键词：FIMH1融合蛋白纯化
- 法舒地尔对血管紧张素Ⅱ诱导的足细胞自噬的影响被引量：1
- 2014年
- 目的：探讨Rho激酶抑制剂法舒地尔对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导人足细胞（AB 8/13）自噬的影响. 方法：体外培养人足细胞株,采用不同浓度的AngⅡ（10-8～10-6 mol/L）刺激人足细胞24h和固定浓度AngⅡ（10-7moVL）刺激不同时间（0h、6h、12h、24h、36h）,以及特异性自噬阻断剂3-MA（5 mmol/L）和不同浓度（10-8～1O-6mol/L）法舒地尔进行干预.免疫荧光法和Westem印迹法检测自噬相关蛋白[微管相关蛋白1轻链3B（LC3B）、Beclin-1]的表达变化. 结果：AngⅡ可刺激足细胞LC3B、Beclin-1蛋白表达上调,且呈剂量、时间依赖性（P＜0.05）,在浓度10-7mol/L AngⅡ和时间24h时达高峰.3-甲基腺嘌呤（3-MA）能明显降低AngⅡ引起的LC3B蛋白表达（P＜0.01）.法舒地尔本身对足细胞自噬没有影响,但可以明显下调AngⅡ诱导的足细胞LC3B和Beclin-1蛋白表达（P＜0.05）,10-7mol/L时效果最明显. 结论：AngⅡ可诱导人足细胞自噬增强,3-MA和法舒地尔均可抑制此过程的发生,提示Rho激酶途径可能参与了AngⅡ诱导的足细胞自噬过程.
- 高雪静唐莎尹仕伟张莹谢京施维维王莉邹丽云牟芝蓉张静波
- 关键词：自噬RHO激酶足细胞ANGIOTENSIN
