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康晓燕: 作品数：28 被引量：106H指数：7; 供职机构：第二军医大学东方肝胆外科医院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划教育部留学回国人员科研启动基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

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中期因子转录物及其蛋白在肝细胞癌中的定位与表达研究被引量：10: 2002年; 目的了解中期因子 (Midkine,MK)转录物及其蛋白产物在肝细胞癌 (hepatocellularcarci noma ,HCC)中的定位情况与表达特点。方法应用原位杂交、免疫组织化学染色等方法对 33例人HCC组织、10例良性肝肿瘤组织及其配对瘤旁肝组织进行了MKmRNA及蛋白的定位与表达研究。结果免疫组织化学结果与原位杂交结果具有一致性 (χ2 =0 5 0 0 ,P >0 0 5 )。MK在HCC组织中呈高表达。MKmRNA及蛋白的阳性信号聚集于HCC细胞质。在HCC细胞外组织中亦有MK表达 ,尤以血管密集处明显。HCCMK表达率与肝癌组织学类型、分级等临床病理学特点无相关性。结论HCC在mRNA和蛋白水平上表达MK增加。; 罗祥基殷正丰康晓燕吴宗娣张柏和吴孟超; 关键词：生物因子原位杂交免疫组织化学肝细胞癌蛋白定位蛋白表达

腺病毒介导的VEGF启动子—胸苷激酶系统对骨肉瘤细胞的杀伤试验: 2004年; 目的　探讨腺病毒介导的VEGF启动子调控的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因 (HSV tk)系统 (AdVEGF tk)对体外培养的骨肉瘤细胞的选择性杀伤作用。方法　采用 2种重组腺病毒载体AdVEGF tk和AdCMV tk(CMV启动子调控tk基因表达 )体外感染低表达VEGF的成骨细胞系MC3T3 E1和高表达VEGF的骨肉瘤细胞系LM 8,并给予不同浓度的丙氧鸟苷 (GCV)处理 ,用MTT法检测感染细胞的增殖情况。结果　未感染病毒或感染空病毒的MC3T3 E1细胞和LM8细胞对GCV不敏感 ,感染AdCMV tk的MC3T3 E1细胞和LM 8细胞对GCV敏感。与感染空病毒的MC3T3 E1细胞相比 ,感染AdVEGF tk的MC3T3 E1细胞对GCV的敏感性轻度增加 ,用 5 0 μg/mlGCV处理时 ,30 %MC3T3 E1细胞被杀死 ;感染AdVEGF tk的LM8细胞对GCV的敏感性明显增加 ,用 5 0 μg/mlGCV处理时 ,95 %LM 8细胞被杀死 ,产生的细胞毒活性表现为剂量依赖性。结论　腺病毒介导的VEGF启动子 tk/GCV系统对高表达VEGF的骨肉瘤细胞具有杀伤作用。; 周正明殷正丰王孟龙吴宗娣康晓燕杨惠光吴孟超; 关键词：腺病毒介导骨肉瘤细胞杀伤试验

凝集素亲和电泳-免疫印迹法检测甲胎蛋白变异体被引量：11: 2001年; 钱海华殷正丰崔贞福康晓燕吴孟超

甲胎蛋白变异体作为肝细胞癌预后指标的研究被引量：10: 2001年; 目的探讨AFP变异体作为HCC预后指标的意义,为临床应用提供依据.方法本研究涉及1991～1994年在我院第一次行肝癌根治性切除术的AFP阳性HCC患者129例,术前采用小豌豆凝集素亲和免疫电泳自显影法测定血清AFP变异体含量,术后随访至1999年,将相关资料进行归纳整理,分析血清AFP变异体含量与HCC复发率、生存率的关系,并进行统计学分析.结果 129例HCC患者1,3,5年累计复发率分别为32.6%,66.7%和86.8%.AFP变异体含量≥20%组(A组,83例)和AFP变异体含量＜20%组(B组,46例)的累计复发率分别为37.3%和23.9%(1年),73.5%和54.3%(3年),92.8%和76.1%(5年).A组累计复发率明显增高(P＜0.05).129例HCC患者1,3,5年生存率分别为88.4%,63.6%和41.1%.A组和B组累计生存率分别为84.3%和95.7%(1年),56.7%和76.1%(3年),32.5%和56.5%(5年).B组生存时间明显延长(P＜0.01).结论AFP变异体是恶性生物学的良好指标,作为一个独立的预后标志物,可在临床上用于预测HCC预后和复发.; 殷正丰康晓燕钱海华吴宗娣虞紫茜吴孟超; 关键词：甲胎蛋白肝细胞癌预后肝肿瘤

应用改良的凝集素亲和免疫电泳自显影法检测甲胎蛋白异质体被引量：11: 2003年; 目的　解决在应用凝集素亲和免疫电泳自显影法检测甲胎蛋白异质体过程中对单一峰型的结果难以判断的问题。方法　对以往建立的凝集素亲和免疫电泳自显影法略作改进 ,在原来两块分别含凝集素和AFP抗血清的凝胶之间加一既不含凝集素也不含抗血清的凝胶条。选择 16例AFP异质体为均一型的血样本进行对照测定 ,并以凝集素亲和免疫电泳印迹法验证改良法的结果。结果　在只含凝集素的条件下表现为 1个峰的样本用改良法检测 ,良性肝病的样品峰型仍为 1个对称峰 ,恶性肝病的样品峰型由原来的 1个峰变为 2个峰。实验表明 ,应用改良法结果的重复性满意 ,并得到凝集素亲和免疫电泳印迹法的验证。结论　改良法使原本难以判断的结果清晰易辨。; 钱海华虞紫茜康晓燕殷正丰; 关键词：凝集素甲胎蛋白异质体肝癌

重组人成纤维细胞生长因子-20的原核表达、生物学活性鉴定及抗血清制备被引量：1: 2006年; 目的：表达具有生物学活性的重组人成纤维细胞生长因子-20（rhFGF-20），并制备rhFGF-20抗血清。方法：应用RT—PCR从人前列腺组织总RNA中扩增FGF-20的cDNA，将其克隆到pET24a中，在大肠杆菌中诱导表达，经NTA—Ni^2＋-琼脂糖亲和层析纯化，应用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、细胞增殖试验进行分析鉴定，并免疫新西兰雄性白兔制备多克隆抗体，免疫双扩散法测定抗体效价。结果：构建的pET24aFGF-20能在大肠杆菌中高表达；诱导表达的rhFGF-20蛋白主要存在于包含体中，经包含体溶解、Ni^2＋-NTAHis—Bind Resins亲和层析后，纯化产物呈单一条带；细胞增殖试验显示其能促进成纤维细胞生长，并具有剂量依赖性（浓度为50～5000ng／ml）；制备的抗血清效价为1：32，可与hFGF20产生免疫反应。结论：大肠杆菌表达的rhFGF-20蛋白具有刺激成纤维细胞增殖的活性，制备的抗血清具有特异性。; 姜治国殷正丰钱海华康晓燕罗祥基李瑾; 关键词：原核表达免疫血清

腺病毒介导IL-24联合化疗药物增强对肝癌细胞PLC/PRF/5增殖的抑制被引量：5: 2007年; 目的:研究腺病毒介导IL-24基因(Ad.IL-24)与化疗药物联用对肝癌细胞株PLC/PRF/5增殖的抑制作用。方法:用Ad.IL-24分别联合化疗药物氟尿嘧啶(fluorouracil,5-Fu)和表柔比星(epirubicin,EPI)处理培养的肝癌细胞株PLC/PRF/5,MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术(FCM)检测细胞周期和凋亡率。结果:10 MOI Ad.IL-24与25μg/ml5-Fu联合应用后72h,PLC/PRF/5细胞增殖抑制率达(67.4±0.58)%,显著高于单用Ad.IL-24组的(46.8±0.74)%和5-Fu组的(29.3±0.60)%(均P<0.05);10MOIAd.IL-24与2.5μg/mlEPI联合应用后72h,PLC/PRF/5细胞增殖抑制率达(72.5±0.92)%,显著高于单用Ad.IL-24组的(46.8±0.74)%和EPI组的(32.2±0.69)%(均P<0.05)。流式细胞术检测结果显示,Ad.IL-24与5-Fu或EPI联合应用明显导致细胞在G2/M期阻滞;Ad.IL-24+5-Fu组细胞凋亡率为(52.15±2.32)%,显著高于单用Ad.IL-24组的(28.36±3.49)%和5-Fu组的(8.27±2.61)%(均P<0.05);Ad.IL-24+EPI组细胞凋亡率为(58.67±1.73)%,显著高于单用Ad.IL-24组的(28.36±3.49)%和EPI组的(11.82±1.91)%(均P<0.05)。结论:Ad.IL-24与5-Fu或EPI联用能显著提高对肝癌细胞株PLC/PRF/5增殖的抑制作用。; 温莹浩殷正丰康晓燕李瑾钱海华陈玮; 关键词：白介素24 表柔比星氟尿嘧啶

异常凝血酶原酶免疫测定法作为肝癌标志物的研究被引量：5: 2001年; 新近越来越多的临床研究资料表明,异常凝血酶原对原发性肝细胞癌(HCC)具有相当的诊断意义[1,2].本文采用酶免疫测定法检测1*!026例各种良恶性疾病患者血浆异常凝血酶原,进一步探讨异常凝血酶原作为HCC标志物的应用价值.; 殷正丰崔贞福康晓燕吴宗娣陈汉吴孟超; 关键词：肝癌异常凝血酶原酶免疫测定法肿瘤标志物

重组人中期因子的原核表达、纯化及生物学活性鉴定被引量：7: 2004年; 目的 :表达和纯化具有生物学活性的重组人中期因子蛋白。方法 :应用 RT- PCR从人肝细胞癌组织总 RNA中扩增中期因子 c DNA,将其克隆到表达载体 p ET- 2 4 a,在大肠杆菌中诱导表达 ,经肝素 -琼脂糖亲和层析柱纯化 ,应用 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、Western印迹和细胞增殖试验对纯化产物进行分析鉴定。结果 :构建的重组质粒 p ET- HMK能在大肠杆菌中高表达 ,诱导表达的蛋白主要存在于包涵体中 ,经肝素 -琼脂糖柱亲和层析后纯化产物呈单一条带 ,特异性抗体反应证实是重组人中期因子 ,细胞增殖试验显示其能有效促进 NIH 3T3细胞生长 ,并且具有剂量依赖性。结论; 钱海华康晓燕殷正丰王翠红李瑾吴孟超; 关键词：原核表达纯化生物学活性

中期因子mRNA在原发性肝癌中的表达及其意义被引量：5: 2002年; 目的　探讨中期因子 (MK)mRNA在原发性肝细胞癌 (HCC)中的表达及其意义。方法　收集 33例人肝细胞癌组织、配对癌旁肝组织及 1 0例肝良性肿瘤组织、5例正常肝组织 ,采用TRIzol一步抽提法提取总RNA ,应用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)检测MKmRNA的表达。结果　 2 8例肝细胞癌可见MKmRNA表达 ,阳性率为 84.8% ,而配对的癌旁组织中仅见 3例表达 ,正常肝脏和肝脏良性肿瘤组织无 1例阳性。统计学分析表明 ,肝细胞癌MKmRNA表达率与其他各组的差异有非常显著性 (P <0 .0 1 ) ,但肝细胞癌MKmRNA表达与其组织学类型、病理分级、瘤体大小、包膜状况及其甲胎蛋白 (AFP)值之间差异无显著性 (P >0 .0 5)。结论　肝细胞癌在mR NA水平上表达MK增加 ,检测MK表达情况可作为HCC的辅助诊断指标之一。; 罗祥基殷正丰吴宗娣康晓燕钱海华吴孟超; 关键词：MRNA 原发性肝癌肿瘤标志物

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