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创伤后感染的预防、诊断及治疗被引量：3: 2008年; Donald E．fry安静丁一妹张俊磊高娜高建川（编译）; 关键词：医院内感染创伤后手术部位血管内导管泌尿系感染

整合素在病毒感染宿主细胞过程中的作用被引量：2: 2004年; 张俊磊安静; 关键词：整合素病毒病毒受体

登革2型病毒与内皮细胞表面整合素β<,3>相互作用的研究: 本实验用DV2感染真皮微血管来源的HMEC-1和来源于人脐静脉内皮细胞的ECV304细胞株，检测DV2在两种内皮细胞中的增殖规律，病毒感染后细胞表面整合素的表达及功能的变化，以及细胞表面的整合素在DV2感染中的作用，探讨...; 张俊磊; 关键词：登革病毒内皮细胞整合素Β3; 文献传递

广州2002年登革病毒流行株的分离鉴定及进化分析被引量：7: 2005年; 目的　从 2 0 0 2年广州采集的可疑登革病人血清中分离登革病毒 ,明确流行株的血清型及基因型 ,并鉴定该分离株的毒力。方法　采集疑似登革热患者血清 2 0份 ,应用C6 3 6细胞体外培养的方法进行病毒分离 ,并合成登革病毒通用引物 ,进行逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)后 ,将PCR扩增产物克隆到T载体进行序列测定和比对。确定血清型后 ,进一步扩增在病毒进化上有代表意义的病毒血清型特异性E NS1连接区基因片段 ,测序后用邻位相连 (N J)法构建登革病毒进化树 ,分析此次登革病毒流行株的来源。通过乳鼠脑内接种及空斑实验 ,测定分离株的毒力。结果　上述 2 0份血清标本中 ,5份标本出现明显的细胞病变 ,主要表现为细胞融合 ,形成大小不一的空泡和网状结构。RT PCR扩增、序列测定证实为登革病毒Ⅰ型。E NS1连接区基因序列片段分析表明 ,2 0 0 2年广州分离株 (DEN 1 GZ2 0 0 2 )的核苷酸序列与基因型Ⅳ型的DEN 1 T14株 (澳大利亚 ,1981)同源性最高 ,达 98%。N J法构建进化树显示 :11株DEN 1病毒分成 3个基因群 ,分别与Rico Hesse 1990分型中的Ⅰ ,Ⅳ和Ⅴ型以及AnaP .Goncalvez 2 0 0 2年分型中的亚洲型 ,南太平洋型和美洲非洲型相符 ,本室分离的DEN 1 GZ2 0 0 2株属于Ⅳ型或者称南太平洋型。DEN 1 GZ2 0 0 2?; 张俊磊蹇锐万颖杰彭涛安静张复春唐小平; 关键词：登革病毒进化分析毒力

登革1型病毒GZ2002株全基因组测序与分析被引量：3: 2012年; 目的对2002年分离自广州登革热患者的1型登革病毒GZ2002株进行全基因组序列测定及分析,为探讨其来源和基因组特征提供依据。方法利用C6/36细胞增殖GZ2002株,出现典型细胞病变后收集感染细胞及病毒液提取R NA。根据5株登革病毒1型标准株AY145123、FJ176780、FJ176779、DVU88536、EF025110全序列设计6对相互覆盖的引物。采用R T-PCR法扩增覆盖GZ2002株基因组全长的6个cDNA片段,并将其分别克隆到pMD-18T载体上,通过序列测定和重叠序列拼接获得全基因组序列。结果 GZ2002株基因组全长10 735 nt,单一阅读框长10 176 nt,推测编码3 392个氨基酸,5'及3'-UTR分别为94 nt和462 nt,无显著的密码子偏嗜性。GenBank登录号:JN205310。系统进化分析显示GZ2002株属于DENV-1型基因IV型。比较不同致病性的DENV-1型毒株发现,随DENV毒株致病力的增强,编码区氨基酸突变位点明显增多。GZ2002株、泰国16007株、柬埔寨株及印度尼西亚98901530株的5'-UTR二级结构高度保守,3'-UTR分析显示强毒力泰国16007株与柬埔寨株均存在高突变区。结论 GZ2002株属于DENV-1型基因IV型,可能与1998年印度尼西亚DENV-1流行株相关,编码区株特有氨基酸变异位点及3'-UTR高突变区的生物学意义值得进一步探讨。; 方昕胡珍张俊磊朱军民陈炜尚伟龙袁文常程航黎庶胡晓梅饶贤才; 关键词：全基因组测序

利用DNA免疫技术制备抗登革2型病毒NS2B蛋白多克隆抗体被引量：4: 2010年; 目的构建登革2型病毒(dengue virus serotype2,DV2)非结构蛋白NS2B的真核表达质粒pCAGGS-P7/NS2B,进行DNA免疫,制备小鼠抗NS2B特异性多克隆抗体。方法PCR扩增DV2-NS2B基因片段,构建真核表达载体pCAGGS-P7/NS2B,采用脂质体介导的方法转染Vero细胞,检测目标蛋白的表达。用该表达质粒免疫BALB/c小鼠,制备抗NS2B抗血清。结果成功构建真核表达重组质粒pCAGGS-P7/NS2B,该重组质粒具有良好的免疫原性,免疫小鼠后所获的抗血清,抗体效价达1∶3200,Western blot和间接免疫荧光证实抗血清能特异性地识别DV2-NS2B蛋白。结论通过DNA免疫所制备小鼠抗DV2-NS2B抗血清能特异性地识别DV2-NS2B蛋白。; 刘丽梅陈宗涛高娜田衍平陈炜张俊磊王嘉丽安静; 关键词：登革热病毒病毒非结构蛋白质类近交BALBC

日本脑炎病毒基因片段-GM-CSF双顺反子表达载体的构建被引量：1: 2006年; 目的利用分子生物学技术,构建pCAG- JG双顺反子真核表达质粒,为研制新型的日本脑炎病毒(Japanese encephalitisvirus,JEV)核酸疫苗奠定基础。方法RT PCR扩增JEV的prM- E- NS1和小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte macrophagecolony stimulatingfactor,GM -CSF)后,分别克隆入中间载体pIRES,经酶切获得prM- E- NS1IRES- GM -CSF片段,并将其插入pCAGGSP7质粒,鉴定阳性重组子。结果成功的将prM- E -NS1IRES- GM- CSF片段插入到pCAGGSP7质粒,测序鉴定结果正确,该质粒命名为pCAG- JG。结论成功的构建了pCAG JG双顺反子真核表达质粒。; 高娜彭涛陈炜张俊磊王嘉丽万颖杰陈宗涛李东英田衍平安静; 关键词：日本脑炎病毒 GM-CSF

转录因子p53通过激活Ⅰ型干扰素通路抑制登革病毒感染被引量：2: 2014年; 目的：探讨转录因子p53在登革病毒感染中的作用。方法用逆转录病毒载体介导的RNA干扰技术构建p53低表达的人肝癌细胞株HepG2，并采用Western blot 进行鉴定。设定野生组和干扰组，分别用2型登革病毒感染。采用Vero细胞噬斑法检测病毒滴度；间接免疫荧光检测病毒增殖；流式细胞术检测病毒感染后细胞凋亡；酶联免疫吸附试验检测IFN-β分泌。结果与野生组比较，干扰组p53表达明显下调，表明构建p53低表达的HepG2细胞株成功。登革病毒感染24 h后，干扰组病毒滴度比野生组高100倍；免疫荧光显示干扰组发绿色荧光的细胞数明显多于野生组，说明p53抑制了登革病毒的感染。但是，登革病毒感染24 h后两组凋亡细胞的数目并没有明显差异，而野生组IFN-β分泌量增加6倍。结论转录因子p53抑制登革病毒感染可能不是通过促进细胞凋亡，而是通过激活Ⅰ型干扰素通路来发挥作用。; 李国利张俊磊胡艳玲孙厚良石中全李小山刘佳饶贤才胡福泉; 关键词：登革病毒 P53 细胞凋亡干扰素

登革病毒广州2002年流行株的分离鉴定及登革病毒感染ECV304细胞分子机制的初探: 登革(dengue,DEN)病毒是黄病毒属的单股正链RNA病毒,根据E蛋白的抗原性不同,分为DEN-1,DEN-2,DEN-3和DEN-4四个血清型.病毒基因组约含11000个核苷酸,编码三种结构蛋白和七种非结构(non...; 张俊磊; 关键词：登革病毒进化分析; 文献传递

登革病毒感染后ECV304单层细胞通透性与微丝关系的研究被引量：1: 2005年; 目的研究登革病毒感染后,ECV304单层细胞通透性与病毒滴度及细胞微丝骨架形态变化的关系。方法以人血管内皮细胞株ECV304和HUVEC为研究对象,用免疫荧光法观察登革病毒感染对微丝排列的影响;用transwell模型研究登革病毒感染后单层ECV304细胞通透性的变化;用噬斑法检测培养上清的病毒滴度。结果登革病毒感染后1 h内,ECV304细胞和HUVEC微丝骨架均发生了重新排布;感染后第3天,上清登革病毒滴度在达到峰值,同时ECV304细胞的微丝排列及通透性也有显著改变。结论登革病毒感染后所引起的微丝重排可能与ECV304单层细胞通透性的改变有着密切联系。; 王嘉丽陈炜万颖杰陈宗涛张俊磊彭涛高娜安静; 关键词：登革病毒 ECV304细胞 HUVEC 微丝

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张俊磊

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