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张克君: 作品数：48 被引量：186H指数：8; 供职机构：海南医学院附属医院更多>>; 发文基金：卫生部科学研究基金海南医学院科研基金资助学报项目海南省自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生更多>>

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腹腔镜胆囊切除术并发症回顾及预防被引量：29: 2010年; 目的探讨腹腔镜胆囊切除术（LaparoscopicCholecystectomy，LC）并发胆管损伤、胆漏和出血的原因、预防及处理。方法回顾性总结分析219例LC患者的临床资料。结果219例患者中216例在腹腔镜下完成手术，3例中转开腹（1．37％）。胆囊动脉后支撕脱出血5例（2．27％）；术后发生胆漏4例（1．82％）。结论肝外胆管、迷走胆管损伤及胆囊管残端钛夹脱落是LC术后胆漏的主要原因。正确解剖Calot三角，尽量靠近胆囊壁分离处理胆囊动脉、胆囊管，适当放宽中转开腹指征，可以预防胆漏和出血的发生。; 高富元张克君朱东明; 关键词：腹腔镜胆囊切除术胆漏出血

Slug在胰腺癌中的表达及干扰Slug对胰腺癌转移的影响被引量：3: 2011年; 目的探讨Slug和E-CADHERIN（E-cadherin）表达与胰腺癌转移的关系以及干扰Slug转录因子对胰腺癌转移的影响.方法采用免疫组化和RT-PCR技术分别检测36例胰腺癌组织中Slug、E-cadherin和mRNA表达.将肝脏高转移潜能的胰腺癌细胞株SW1990H4,分为3组：对照组、空载体质粒（shRNA-1）和转染干扰S1ug质粒（Slug-shRNA-1）,观察Slug对E-cadherin mRNA表达的逆转作用,及对SW1990H4体外侵袭、运动的抑制作用.结果胰腺癌组织中Slug高表达,而E-cadherin低表达.转移组胰腺癌组织中Slug蛋白和mRNA表达明显高于非转移组,差异分别有统计学意义（P＜0.05）,而E-cadherin在转移组胰腺癌中无表达.PCR产物凝胶电泳结果显示,Slug mRNA在空白对照组SW1990H4中表达为0.985±0.016,E-cadherin mRNA表达为0.120±0.001.shRNA-1时转染48 h时,Slug mRNA的表达水平为0.973±0.014,E-cadherin mRNA表达水平分别0.160±0.001,与对照组比差异分别无统计学意义（P＞0.05）.转染Slug-shRNA-1组瞬时转染48 h时,Slug mRNA的表达水平为0.554±0.011,E-cadherin mRNA表达水平为0.36±0.002,与对照组和shRNA-1组比差异分别有统计学意义（P＜0.05）.SW1990H4稳定转染后,shRNA-1和Slug-shRNA-1组Slug mRNA表达水平分别为0.968±0.015,0.206±0.017,两组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）,而E-cadherin mRNA表达水平分别为0.18±0.002,0.727±0.006,两组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）.体外细胞运动实验表明,对照组、转染shRNA-1和SlugshRNA-1组跨膜细胞数393±28、352±24、96±13,差异有统计学意义（P＜0.01）.重组细胞基底膜（Matrige1）侵袭实验显示,3组穿透基底膜细胞数分别为223±69、202±64、65±19,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 Slug高表达,E-cadherin低表达与胰腺癌的转移相关.胰腺癌细胞中存在Slug mRNA与E-cadherin mRNA表达的逆转关系,抑制Slug mRNA的表达对胰腺癌细胞的侵袭和运动有抑制作用,可能为胰腺癌转移的�; 张克君余壮明王正文孙传东李德春张炳远卢云赵伟; 关键词：胰腺肿瘤钙黏着糖蛋白类转染肿瘤转移

rAAV2-slug-siRNA对原位胰腺癌移植瘤转移和血管生成影响的实验研究被引量：2: 2012年; 目的:研究slug基因的RNA干扰重组腺病毒载体(rAAV2-slug-siRNA)对原位胰腺癌移植瘤的转移和血管生成的影响。方法:建立胰腺癌细胞株AsPC-1裸鼠原位胰腺癌移植瘤模型,随机分成3组,每组8只,分为空白对照组(腹腔注射生理盐水)、阴性对照组(腹腔注射rAAV2-GFP)、实验组(腹腔注射rAAV2-slug-siRNA)。10周后利用CO2麻醉法处死裸鼠,观察原位胰腺癌移植瘤的重量,抑瘤率,肝、胃肠、腹腔转移,腹水等情况,及肿瘤细胞微血管密度(MVD)。RT-PCR检测移植瘤的slug mR-NA表达,Western blot检测slug蛋白的表达。结果:胰腺癌细胞株AsPC-1裸鼠原位胰腺癌移植瘤模型建立成功,成瘤率100%。实验组原位胰腺癌移植瘤瘤重明显低于阴性对照组(P<0.05),抑瘤率为70.83%。阴性对照组诱发的裸鼠胰腺癌质地硬,肿块向四周浸润并形成癌性粘连,与阴性对照组相比,实验组腹膜、肝、毗邻脏器转移率和形成腹水率均明显下降(P<0.05)。实验组MVD明显少于阴性对照组(P<0.05),slug mRNA相对表达量(RT-PCR)和slug蛋白相对表达量(Western blot)明显低于阴性对照组(P<0.05)。结论:rAAV2-slug-siRNA可能通过抑制肿瘤血管生成而抑制原位胰腺癌移植瘤转移。; 陈俭云崔海宁王正文张克君; 关键词：胰腺癌血管生成

PTTG和bFGF在原发性胆囊癌中表达及意义被引量：2: 2004年; 探讨垂体肿瘤转化基因 (PituitaryTumorTransformingGene ,PTTG)和碱性成纤维细胞生长因子 (basicFi broblastGrowthFactor,bFGF)在原发性胆囊癌中的表达及相互关系 ,研究它们的表达与肿瘤临床病理指标及预后的联系。应用免疫组织化学 ,检测 4 1例原发性胆囊癌及 2 0例慢性结石性胆囊炎中PTTG和bFGF的表达水平。在原发性胆囊癌中PTTG和bFGF阳性表达率分别为 85 4 %、5 6 1% ,其阳性率及表达等级均明显高于慢性胆囊炎 (P <0 0 1)。PTTG和bFGF表达等级均与胆囊癌的Nevin分期和淋巴结转移密切相关 (P <0 0 5或P <0 0 1) ;PTTG表达与bFGF表达成等级正相关 (r =0 5 2 6 ,P <0 0 1)。PTTG或bFGF阳性患者的累计生存期明显低于阴性者 (P <0 0 5 )。PTTG或bFGF与胆囊癌生物学行为及预后有密切关系 ,二者的联合检测。; 张耀明高焱明李荣张克君左超海李称才; 关键词：PTTG BFGF 原发性胆囊癌垂体肿瘤转化基因碱性成纤维细胞生长因子免疫组织化学法

核因子-κb、iκb-a、mmp-9在肝细胞癌中的表达及临床意义: 研究乙型(b)肝炎或/和丙型(c)肝炎相关性hcc和非肝炎相关性hcc中nf-κb的亚基p65、iκba和mmp-9的表达和它们之间的相互联系,探讨nf-κb的亚基p65和mmp-9对hcc生物学行为的影响;从而为其对h...; 张克君; 关键词：C型肝炎肝细胞癌核因子-ΚBP65 MMP-9; 文献传递网络资源链接

NF-κB和PUMA与重症胰腺炎致急性肺损伤的关系以及PDTC的干预作用被引量：9: 2010年; 目的探讨NF-κB（核因子-κB）与PUMA（P53正向凋亡调节因子）表达在大鼠重症急性胰腺炎致急性肺损伤（SAP-ALI）的作用及脯氨酸二硫代氨基甲酸酯（PDTC）的影响.方法 SD大鼠随机（随机数字法）分为假手术组、SAP-ALI组、PDTC组,每组18只.各组再按6,12,24 h时间点分为三个亚组,每个亚组6只.假手术组开腹后翻动胰腺数次;SAP-ALI组采用胰胆管逆行注入5%牛磺胆酸钠（1 mL/kg）诱导SAP-ALI模型;PDTC组在SAP-ALI组的基础于术前1h给予PDTC（15 mg/kg）,各组按时间点处死大鼠.观察胰腺和肺脏病理变化.Western-blot法检测肺组织NF-κB p65,PUMA表达,采用RT-PCR法测量各组bax,bcl-2和Caspase-3 mRNA,通过荧光检测试剂检测Caspase-3活性.投射电镜下观察各组肺泡Ⅱ型上皮细胞超微结构的变化,TUNEL检测肺泡上皮细胞的凋亡指数.结果成功建立了大鼠SAP-ALI模型,Western-blotting结果显示,SAP-ALI组肺组织NF-κB p65和PUMA蛋白表达在6h后增加,24 h增加最明显,NF-κB p65与PUMA显著正相关;SAP-ALI组肺组织bax mRNA和Caspase-3mRNA在6 h后增加,24 h增加最明显,bcl-2 mRNA在6 h后下降,24 h下降最明显,Caspase-3活性在24h增加最明显.PDTC组肺组织NF-κB p65和PUMA蛋白表达明显降低;bax mRNA和caspase-3 mRNA表达及Caspase-3活性明显降低,bcl-2 mRNA表达明显增加.假手术组肺组织各组蛋白的表达与PDTC组比无显著改变.PDTC组肺损伤病理组织学评分在术后各时间点较SAP-ALI组显著降低,PDTC组细胞凋亡指数较SAP-ALI组明显降低.SAP-ALI组24h市泡Ⅱ型上皮细胞微绒毛消失.结论 NF-κB活化激活PUMA与肺泡上皮细胞凋亡有关,PDTC通过抑制NF-κB活化,下调NF-κB活化后引起的PUMA表达,抑制肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡,减轻SAP-ALI.; 张克君宋彩霞焦学龙刘世松孙传东李春伟王培戈周长勇; 关键词：重症胰腺炎急性肺损伤核因子-ΚB

外源野生型p53正向细胞凋亡调控因子基因对人胰腺癌PC-3细胞生长的作用被引量：11: 2006年; p53正向细胞凋亡调控因子（p53 up—regulated modulator of apoptosis，PUMA）是新近发现的Bcl-2家族BH-3亚家族中的成员，是p53的靶基因，可被内外源性p53快速诱导，具有强大的促凋亡作用。研究发现，PUMA基因在许多肿瘤细胞系中低或不表达，转染外源性PUMA基因后，细胞凋亡被促进，动物移植瘤的生长明显受到抑制。在前期的工作中，我们检测了胰腺癌组织中PUMA表达情况发现，PUMA在肿瘤组织中的阳性表达明显低于瘤旁组织，并且肿瘤组织中细胞凋亡指数低于对照组，说明PUMA低表达引起的细胞凋亡抑制在胰腺癌的发生中起重要作用。本试验旨在观察PUMA基因转染抑制体外胰腺癌细胞的生长的效果。; 张克君李德春朱新国朱东明赵志泓; 关键词：野生型P53 细胞生长人胰腺癌靶基因 PC-3

重组腺病毒mIκBα基因的构建及体外抑制血管生成的作用被引量：3: 2006年; 目的应用同源重组法构建mIκBα基因的腺病毒真核表达载体,探讨其体外抑制血管形成的作用。方法通过Lipofectamine介导构建重组腺病毒pAdmIκBα,有限稀释法测定病毒滴度;以MOI为10、20、30、50感染HCC9204细胞,RT-PCR方法检测细胞NFκ-B(p65)的表达,ELISA法检测细胞上清液p65的含量;鸡胚绒毛尿囊膜检测(CAM)了解pAdmIκBα对血管形成的抑制。结果经PCR检测提示重组体腺病毒含有pAdmIκBα基因;pAdmIκBα的滴度是1.252×109pfu/ml;将pAdmIκBα转染HCC9204细胞,当MOI=10时,p65 mRNA表达和上清液p65蛋白含量开始下降,在MOI=50时降低到最低水平;pAdmIκBα对p65表达的抑制呈剂量依赖性;pAdmIκBα对血管新生有很强的抑制作用,而且随着剂量的增加作用越发明显。结论成功构建出含有mIκBα基因的具有感染能力的高滴度的重组腺病毒,并且该重组腺病毒具有体外抑制血管生成的作用。; 张克君李德春; 关键词：重组腺病毒血管生成

重组腺病毒介导野生型PUMA基因对胰腺癌细胞的放射增敏作用被引量：7: 2008年; 目的探讨野生型PUMA基因通过重组腺病毒转染至胰腺癌细胞后对放射治疗(放疗)的增敏作用。方法将含野生型PUMA基因的重组腺病毒50MOI转染Aspx-1胰腺癌细胞48h后,采用60Coγ射线对其进行照射6Gy。Western blot法检测细胞内PUMA蛋白表达。通过噻唑蓝比色法和细胞克隆形成试验检测细胞生长、末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记检测细胞凋亡水平。结果转染野生型PUMA基因的Aspx-1细胞生长受到了明显的抑制(P<0.05),凋亡率增加。转染野生型PUMA基因的Aspx-1细胞再经6Gyγ射线照射后,细胞生长抑制和细胞凋亡率增加更加明显。结论①野生型PUMA基因转染促进胰腺癌细胞凋亡并抑制其生长。②野生型PUMA基因转染可增加胰腺癌细胞对放射治疗的敏感性。; 张克君李德春朱东明宋彩霞; 关键词：基因 PUMA 胰腺癌辐射耐受性

靶向Slug基因的腺相关腺病毒载体的构建与鉴定: 2011年; 目的:构建并制备携带目的基因的rAAV-EGFP-Slug-siRNA病毒载体.方法:首先构建pDC316-EGFP-Slug-siRNA质粒,以PCR鉴定正确的pDC316-EGFP-Slug-siRNA克隆为模板扩增EGFP-Slug-siRNA片段,EcoRⅠ和SalⅠ双酶切回收的PCR产物;酶切pSNAV2.0-lacz-α载体质粒,并与上述产物进行连接;转化感受态大肠杆菌DH5α,得到重组质粒pSNAV2.0-EGFP-Slug-siRNA,酶切和测序对其进行鉴定.建立载体细胞株BHK/Slug-siRNA,大规模制备rAAV2-EGFP-Slug-siRAN并对其纯化、鉴定和滴度测定.结果:携带编码靶向Slug的小发夹状干扰RNA序列的腺相关病毒载体质粒pSNAV2.0-EGFP-Slug-siRNA,经PCR、酶切和测序鉴定,质粒构建正确.将构建成功的载体质粒与重组Ⅰ型单纯疱疹病毒HSV1-rc/?UL2共转染包装细胞BHK-2,成功复制和包装出重组腺相关病毒rAAV2-EGFP-Slug-siRNA,经检测目的片段插入成功,滴度为9.23×1010puf.结论:成功制备出高滴度的携带目的基因的rAAV-EGFP-Slug-siRNA病毒载体.; 严明总张克君王齐全欧树安; 关键词：SLUG基因小干扰RNA

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