张海芹
- 作品数：7 被引量：8H指数：2
- 供职机构：吉林大学公共卫生学院卫生部放射生物学重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- miR-9对神经纤毛蛋白-1的靶向调控及其在辐射效应中的作用被引量：1
- 2014年
- 目的 构建has-miR-9表达质粒和NRP1-3 ＇UTR荧光素酶报告质粒,探讨miR-9对NRP1的靶向调控作用及其在A549细胞中的辐射效应.方法 利用生物信息学方法预测has-miR-9与NRP1-3＇UTR的结合位点;将miR-9序列插入载体pcDNA-DEST47中构建真核表达质粒,同时构建NRP1-3 ＇UTR的野生型和突变型荧光素酶报告质粒,并与pcDNA-DEST-miR-9质粒共转染至A549细胞,分析miR-9对其调控作用;miR-29b作为阴性对照,观察miR-9对NRP1的靶向作用.采用Western blot方法,验证miR-9对NRP1蛋白表达的抑制作用及照射后A549细胞NRP1蛋白表达变化;采用实时定量PCR方法检测10 Gy电离辐射照射后A549细胞miR-9表达量.结果 荧光素酶活性实验结果显示,miR-9可以显著下调野生型NRP1-3 ＇UTR质粒的荧光素酶活性（t=3.906,P＜0.05）,而不影响突变型质粒的荧光素酶活性,同时证实miR-9以外的miRNA（miR-29b）不能抑制野生型NRP1-3 ＇UTR质粒的荧光素酶活性.转染miR-9 mimic后,在A549细胞中,靶基因NRP1蛋白的表达受抑制.10 Gy照射后,A549细胞中miR-9表达量下调（t=37.319,P＜0.05）,而NRP1蛋白表达升高.结论 在A549辐射效应中miR-9通过靶向结合NRP1基因3＇UTR,特异性调控NRP1蛋白表达.
- 张海芹董娟聪高辉左斯尧金霖霖刘丽波金顺子
- 关键词：MIR-9NRP1A549靶向调控电离辐射
- pcDNA-DEST47-miR-29b重组质粒的构建及其对VEGF表达的靶向调控作用被引量：1
- 2014年
- 目的构建has-miR-29b重组表达载体,并探讨其对VEGF表达的靶向调控作用。方法利用生物信息学方法预测has-miR-29b与VEGF-3'UTR的结合位点;将PCR扩增的miR-29b前体序列和pcDNA-DEST47载体经酶切后连接,构建pcDNA-DEST47-miR-29b表达载体;采用荧光素酶检测法和Western blot法证实miR-29b对VEGF蛋白表达的抑制作用。结果 psiCHECK2-VEGF荧光素酶报告质粒和pcDNA-DEST47-miR-29b两种质粒共转染组的荧光素酶活性明显低于单独转染的空载体组和Lu-VEGF组(P<0.01),同时发现其他种类miRNA(Let-7g)不能抑制VEGF荧光素酶活性,而miR-29b明显抑制VEGF荧光素酶活性;转染pcDNADEST47-miR-29b质粒后在Jurkat细胞中VEGF蛋白的表达明显受抑制。结论本研究成功构建pcDNADEST47-miR-29b重组质粒;miR-29b与VEGF具有靶向关系,且miR-29b参与其调控作用。
- 单鸿阁高辉张海芹董娟聪金顺子
- 关键词：VEGF肿瘤
- 神经纤毛蛋白1对非小细胞肺癌放射敏感性的影响被引量：2
- 2014年
- 目的 探讨神经纤毛蛋白1（neuropilin 1,NRP1）在不同种类非小细胞肺癌（NSCLC）细胞系的表达情况及其与肿瘤放射敏感性的关系,方法 通过Western blot技术检测不同来源的5种人NSCLC细胞系（H358、H460、H1299、A549、SK-MES-1） NRP1的基础表达水平,MTT方法检测经不同剂量X射线照射后肺癌细胞的存活情况,初步筛选5种细胞中辐射敏感和辐射抵抗的2种细胞;采用克隆形成实验及流式细胞术分别检测细胞存活分数及凋亡率的变化,分析2种肺癌细胞的放射敏感性,采用Western blot检测2种细胞受X射线作用后NRP1的表达变化,通过克隆形成实验检测靶向抑制NRP1对A549细胞放射敏感性的影响,结果 5种肿瘤细胞NRP1表达量由高到低依次为：A549＞ SK-MES-1＞ H358＞ H460＞ H1299;X射线对肿瘤细胞的抑制能力呈剂量依赖性增强,其抑制率由高到低依次为：H460＞ H1299＞H358＞ SK-MES-1＞A549,因此选取A549细胞和H460细胞做后续研究.克隆形成实验显示,A549在2 Gy照射下的存活分数（SF2）是0.887,而H460细胞为0.313。A549细胞受照后的凋亡率为对照组的122.54％,明显低于H460细胞的238.88％,辐射可以诱导A549细胞NRP1的表达上调达40％,同时靶向抑制NRP1则可以增强A549细胞的放射敏感性,结论 在NSCLC细胞中A549细胞具有较强的辐射抗性,且辐射抗性的形成与其NRP1表达上调有关。
- 董娟聪张海芹高辉韩海玲金霖霖邵立虹魏巍金顺子
- 关键词：非小细胞肺癌A549细胞辐射抗性NEUROPILIN
- 辐射对肿瘤微环境中Treg细胞及其相关因子的影响
- 2015年
- 目的 检测照射后与肺腺癌A549细胞共培养的淋巴细胞中调节性T细胞（Treg细胞）及其相关细胞因子和共刺激分子表达的变化,探讨辐射对肿瘤微环境中免疫耐受机制的影响.方法 分离人外周血淋巴细胞单独培养或与肺腺癌A549细胞进行共培养一段时间后,以6GyX射线进行照射,继续共培养一段时间后,以流式细胞术检测淋巴细胞中CD4＋ CD25＋、CD4＋ CD25＋FoxP3^＋、CD4＋ CD25＋ NrP1^＋不同亚组的百分数、共刺激分子ICOS和CTLA-4的表达情况;ELISA法检测培养体系上清中IL-10、TGF-β、IL-17的分泌量.结果 与照射前后单独培养组相比,相应条件下共培养组中CD4＋ CD25＋、CD4＋ CD25＋ FoxP3^＋、CD4＋ CD25＋ NrP1^＋、ICOS、CTLA-4、IL-10和TGF-β比例均增加（t=2.78 ～40.61,P＜0.05）.而与照射前相比,照射后单独培养组和共培养组的CD4＋ CD25＋和CTLA-4比例增加（t=2.96、2.94、4.47、2.77,P＜0.05）.细胞因子IL-17的表达量在肺腺癌A549细胞和X射线分别作用下无明显变化,但共同作用后会明显增加（t=4.00、4.71,P ＜0.05）.结论 辐射刺激肺癌细胞肿瘤微环境中的CD4＋ CD25＋Treg细胞亚组及其相关CTLA-4和IL-17的表达,诱导肿瘤微环境中的免疫耐受作用.
- 邵立虹金霖霖左斯尧魏巍董卓张海芹韩海玲高辉金顺子
- 关键词：电离辐射A549细胞系肿瘤微环境TREG细胞免疫耐受
- 不同剂量辐射诱导小鼠胸腺Th1-Th2-Th3型细胞相关基因的功能分析被引量：2
- 2015年
- 目的 应用功能分类基因芯片技术,分析高、低剂量全身照射对小鼠胸腺细胞中Th1、Th2及Th3/Tr1各亚型功能相关基因的差异表达,探讨辐射免疫效应的分子机制.方法 健康ICR小鼠按随机数字表法分为低剂量组（0.075 Gy）、高剂量组（2.0 Gy）和假照组,于照射后16 h处死小鼠取胸腺组织,应用细胞因子与炎症反应PCR芯片技术进行Th1-Th2-Th3功能分类芯片分析.结果 低剂量（0.075 Gy）X射线全身照射后小鼠胸腺细胞中有8个基因表达上调,5个基因表达下调;高剂量（2.0 Gy）X射线全身照射后小鼠胸腺细胞中有54个基因表达上调,3个基因表达下调.具体有Th型细胞相关基因、Th2型细胞相关基因、Th3/Tr1型细胞相关基因、Th1/Th2型免疫应答基因以及转录因子相关基因.其中,低剂量辐射诱导胸腺中的Th1型细胞相关基因Stat4和Socs1的表达上调,而对Th2型和Th3/Tr型细胞相关基因IL-4ra、Cebpb、Gata3及Tgfb3下调,最终导致Th1型免疫应答基因Sftpd上调.高剂量辐射均可诱导Th1、Th2和Th3/Tr型细胞相关基因的上调,但Th1型免疫应答基因表达无变化,而Th2型免疫应答相关基因Cd86、IL-18、IL-10以及Irf4上调.结论 低剂量辐射诱导Th1型免疫应答,而高剂量辐射诱导Th2型免疫应答.
- 高辉左斯尧黄政基韩海玲董娟聪张海芹金顺子
- 关键词：辅助性T细胞免疫应答
- Toll样受体4与肿瘤及其放射敏感性的研究进展
- 2013年
- Toll样受体4（TLR4）是一类重要的模式识别受体，不但广泛表达于免疫细胞，也表达于各种肿瘤细胞。TLR4通过不同的信号转导机制促进肿瘤的发生、发展、免疫逃逸、凋亡抵抗、转移和侵袭。激活的TLR4在肿瘤微环境中起着重要作用，且高表达的TLR4影响着肿瘤细胞的放射敏感性，进而严重影响肿瘤放疗的效果，对这些机制的研究可以进一步明确放疗的作用靶点，为恶性肿瘤的治疗提供新的手段。
- 戚瑞祥董娟聪卢良杰张海芹金顺子
- 关键词：TOLL样受体4肿瘤辐射耐受性免疫逃逸
- 电离辐射对小鼠脾脏ICOS／ICOSL及相关信号通路的影响被引量：3
- 2014年
- 目的观察不同剂量X射线照射后小鼠脾细胞可诱导共刺激分子及其配体（ICOS／ICOSL）与核因子NF—KB、细胞因子IL-10表达量的变化。方法健康ICR小鼠按随机数字表法分为低剂量照射组（0．05、0．075和0．2Gy）、高剂量照射组（1、2、4和6Gy）和假照组。假照组于假照后16h处死，高、低剂量照射组分别于照后0、4、8、16、24、48、72h处死小鼠，分离小鼠脾脏制成单细胞悬液，提取脾组织总蛋白，采用流式细胞术检测ICOS／ICOSL，Westernblot法检测NF—KB蛋白水平，采用ELISA法检测IL-10分泌量的变化。结果在0．05、0．075Gy低剂量照射后，ICOS／ICOSL双阳性细胞百分比显著低于假照组（t=4．743、4．120，P〈0．01）；在4、6Gy高剂量照射后，则上调其表达（t=-4．950、-7．310，P〈0．01）。核因子NF-KB变化趋势与ICOS／ICOSL表达变化相似。IL-10在0．075、0．2Gy低剂量照射后明显低于假照组（t=5．277、2．854，P〈0．05），但在6Gy照射后明显高于假照组（t=7．196，P〈0．01）。结论低剂量电离辐射抑制ICOS／ICOSL、NF—KB和IL-10的表达，而高剂量辐射上调ICOS／ICOSL表达，并激活核因子NF-KB，进而导致IL-10分泌量升高。
- 史涛董娟聪张婉泽武宁邵明龙卢良杰张聪张海芹单玉兴金顺子
- 关键词：电离辐射ICOSNF-KBIL-10信号通路
