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敖绪军: 作品数：31 被引量：116H指数：7; 供职机构：解放军第532医院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划重庆市自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

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双重免疫荧光染色法鉴定肺组织内CCA^+SP-C^+细胞被引量：4: 2008年; 目的:通过双重免疫荧光染色法鉴定不同肺组织内是否存在Clara细胞特异性抗原(Clara cell specific antigen,CCA)和肺泡表面活性蛋白C(surfactant protein C,SP-C)共表达的双阳性细胞(double positive cell,DPCs)CCA+SP-C+细胞,为后续开展肺干细胞的相关研究提供实验基础。方法:取成年鼠(小鼠、大鼠)和新生鼠(小鼠、大鼠)的正常肺组织,人的肺鳞癌、腺癌的癌组织和癌旁组织,冰冻切片,进行双重免疫荧光染色,通过激光扫描共聚焦显微镜观察肺组织内是否存在DPCs。每例标本观察时镜下随机选择4~6个视野,计数100~200个肺细胞,得出每百个细胞内DPCs百分率,采用SPSS 11.0统计软件包对数据进行分析。结果:在成年鼠和新生鼠的正常肺组织中均发现了DPCs的存在,在人的肺腺癌组织中也发现了DPCs,而在鳞癌组织中未见DPCs;在人的癌旁组织DPCs数量明显多于相对应的癌组织(P<0.05)。结论:本研究不仅证实了DPCs细胞存在的广泛性,而且在人的肺腺癌组织中发现了DPCs,同时发现癌旁组织内的DPCs明显多于癌组织,为后续进一步分离、纯化DPCs,研究正常肺干细胞和肺癌干细胞的生物学特性提供了实验基础。; 钱莘敖绪军安江洪陈正堂; 关键词：荧光抗体技术

微RNA与肺癌被引量：6: 2007年; 微RNA(miRNA)是一类约22nt的小分子非编码RNA,在转录后水平调控蛋白质的表达。大部分微RNA在基因组上定位于与肿瘤相关的脆性位点上,与肿瘤的发生、发展关系密切。在肺癌组织中,某些微RNA表达水平升高,而某些表达下降,它们充当"癌基因"或者"抑癌基因"的角色,可能在肺癌的诊断、治疗及预后监测中发挥重要作用。; 敖绪军陈正堂; 关键词：MIRNA 非编码RNA 肺癌

小鼠支气管肺泡干细胞miRNAs表达谱的鉴定被引量：1: 2011年; [目的]检测并验证正常成年小鼠肺内支气管肺泡干细胞(BASCs)的miRNAs表达情况。[方法]流式细胞仪分选小鼠BASCs和其对照细胞(CD45-CD31-Sca-1-CD34-细胞);将分选出的细胞常规提取RNA后,经YM-100(Millipore)微离心过滤柱抽提小于300核苷酸长度的小RNA;微阵列法检测BASCs和其对照细胞的miRNAs表达谱,筛选出差异miRNAs;构建miRNAs特异性TaqManMGB探针,qRT-PCR法验证所选差异miRNAs在两种细胞的表达。[结果]微阵列法检测显示BASCs和对照细胞有116个miRNAs的表达有显著性差异(P<0.01),其中有56个miRNAs在BASCs高表达,60个miRNAs在BASCs低表达。在这些差异miRNAs中选取了10个与细胞周期、干细胞分化、肿瘤发生相关的miRNAs,通过qRT-PCR法检测其在BASCs和对照细胞中的表达,qRT-PCR的检测结果与miRNAs芯片检测结果一致。[结论]研究通过微阵列法鉴定了小鼠BASCs的miRNAs表达谱,与对照细胞相比,发现116个miRNAs的表达具有显著性差异(56个高表达,60个低表达)。; 钱莘丁金勇敖绪军安江洪陈正堂; 关键词：干细胞微小RNA 肺肿瘤

RNA干扰抑制Snail表达对A549细胞上皮-间充质转分化及体外侵袭的影响被引量：7: 2008年; 目的:研究用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术抑制转录因子Snail表达后,对人肺腺癌A549细胞上皮-间充质转分化表型和体外侵袭能力的影响。方法:构建能表达针对Snail的小干扰RNA(Small interfering RNA,siRNA)的RNA干扰载体(Snail siRNA vector)和表达不针对任何已知mRNA的siRNA的阴性对照RNA干扰载体(control siRNA vector),分别转染A549细胞,新霉素抗性筛选得到Snail表达受抑制的A549-siSnail细胞和Snail表达未受影响的A549-siControl细胞。针对非转染(A549-nontransfection)、A549-siSnail、A549-siControl三组细胞,分别采用RT-PCR和Western blot技术检测Snail、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和E-钙粘素表达,用Boyden chamber模型检测细胞侵袭能力。结果:A549-nontransfection组:Snail和α-SMA表达强阳性,E-钙粘素表达弱阳性;A549-siSnail组:和A549-nontransfection组相比,Snail和α-SMA表达显著减弱(P<0.01),E-钙粘素表达显著增强(P<0.01),Boyden chamber穿膜细胞数显著减少(P<0.01);A549-siControl组:Snail、α-SMA和E-钙粘素表达,及Boyden chamber穿膜细胞数皆和A549-nontransfection组无显著差异(P>0.05)。结论:通过RNA干扰阻滞Snail表达能有效地抑制A549细胞上皮-间充质转分化及体外侵袭能力。Snail可能在肺腺癌上皮-间充质转分化及侵袭过程中扮演重要角色,抑制Snail表达可能成肺腺癌治疗的可行策略。; 卓文磊张云嵩王彦敖绪军陈正堂; 关键词：SNAIL RNA干扰上皮-间充质转分化 A549细胞

miR-223在CXCR4^+ Lewis肺癌细胞中的显著低表达及其靶基因预测被引量：2: 2009年; 目的分析miR-146a、miR-206、miR-223、let-7c-1等细胞分化相关miRNAs,在小鼠Lewis肺癌细胞株(theLewis lung cancer cell lines,LLC)CXCR4+与CXCR4-亚群间的差异表达。方法免疫磁珠分选CXCR4+和CXCR4-LLC细胞,Trizol法抽提细胞总RNA,实时荧光定量PCR(TaqMan探针)检测miRNAs表达,对表达差异最为显著的miRNAs进行潜在靶基因预测,应用免疫组化方法初步分析具有研究价值的关键分子在两个不同亚群小鼠种植瘤组织中的表达情况,并通过BLAST对其3′非翻译端(untranslated region,UTR)进行直向同源基因序列比对分析。结果CXCR4+与CXCR4-LLC比较,各检测mirna表达均较低,其中以miR-223差异最为显著(Fold Change=8.26),通过软件分析预测,miR-223与IGF1R、IGFBP5、Pik3cb、ELK-1和E2F1等基因均具有可能靶位点,免疫组化检测发现CXCR4+亚群种植瘤组织IGF1R表达显著高于CXCR4-亚群,IGF1R3′UTR的238～244nt和688～695nt两个结合位点具有高度的进化保守性。结论miR-223在CXCR4+LLC中显著低表达,可能与肺腺癌细胞IGF1R信号通路调控有关。; 辇伟奇陈芳琳敖绪军陈正堂; 关键词：CXCR4 LEWIS肺癌细胞

结缔组织生长因子反义寡核苷酸抑制TGFβ_1诱导人肾小管上皮细胞转分化被引量：10: 2005年; 目的探讨转化生长因子β-1(TGFβ1)诱导人肾小管上皮-肌成纤维细胞转分化(TEMT)过程中结缔组织生长因子(CTGF)的表达和作用。方法在用MTT比色、荧光分析证明阳离子脂质体(DOTAP)介导CTGF反义寡核苷酸(AS)转染HKC可行的基础上,将培养的HKC分为4组:正常对照组(C组);TGFβ1组(T组);TGFβ1加AS组(T+AS组);4、TGFβ1加CTGF错义寡核苷酸组(T+SC组)。分组处理96h后,分别采用免疫组化、Westernblot和RT-PCR技术检测各组CTGF、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,并分析CTGF和α-SMA表达量的相关性。结果C组:CTGF和α-SMA表达阴性;T组:CTGF和α-SMA表达阳性;T+AS组:CTGF和α-SMA表达阳性,但皆显著低于T组(P<0.01);T+SC组:CTGF和α-SMA表达皆和T组无显著差异(P>0.05)。相关分析:CTGF和α-SMA在表达量上皆呈较强的线性相关性。结论CTGF的AS能有效地抑制TGFβ1所诱导的TEMT,提示CTGF是TGFβ1诱导TEMT所必需的成份。; 张璟卓文磊王彦杨惠标敖绪军黄云剑; 关键词：结缔组织生长因子肾小管上皮细胞肌成纤维细胞

CXCR4阳性Lewis肺癌细胞的高致瘤性和高转移潜能被引量：1: 2010年; 目的从小鼠肺腺癌细胞株(lewis lung carcinoma,LLC)中分离并鉴定具有高转移潜能的肿瘤干细胞样细胞亚群。方法流式分析Sca1、CXCR4双阳性细胞比例,激光共聚焦检测小鼠肺癌组织中双阳性细胞表达情况;以CXCR4作为磁珠分选细胞的表面标志,检测分选前后细胞活性,观察分析CXCR4阳性亚群的恶性生物学行为。结果LLC细胞中Sca-1、CXCR4双阳性细胞比例为0.1%,CXCR4阳性细胞为0.18%,小鼠肺癌组织存在荧光双染色细胞;分选前细胞活性为(95.58±0.87)%,分选后活力为(94.96±0.76)%(P>0.05);CXCR4阳性亚群在无血清中呈球状生长,CXCR阴性亚群1×105即不可成瘤,CXCR4阳性亚群在7×103仍可成瘤;CXCR4阴性和阳性亚群分别以5×105、2×104密度各接种3只小鼠,前者无转移,而后者2只发生肺转移,1只发生耳转移。结论Lewis肺癌细胞中的CXCR4阳性亚群具有一定的自我更新和转移能力,具备癌转移性干细胞某些特性。; 辇伟奇敖绪军陈芳琳陈正堂; 关键词：肿瘤干细胞

RNAi抑制Layilin表达对肺腺癌A549细胞体外侵袭和荷瘤鼠体内淋巴转移的影响被引量：5: 2007年; 背景与目的:透明质酸参与了多种肿瘤细胞的侵袭行为,Layilin是一种新发现的特异性透明质酸受体。本研究在发现Layilin表达于人肺腺癌A549细胞株的前期工作基础上,观察用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术抑制Layilin表达后,对人肺腺癌A549细胞体外侵袭和体内淋巴道转移的影响。方法:构建能表达针对Layilin的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)的RNAi质粒(Layilin siRNA plasmid)和表达不针对任何已知mRNA的siRNA的阴性对照RNAi质粒(control siRNA plasmid),分别转染A549细胞,新霉素抗性筛选得到Layilin表达受抑制的A549-siLayilin细胞和Layilin表达未受影响的A549-siControl细胞。针对非转染(A549-nontransfec-tion)、A549-siLayilin、A549-siControl 3组细胞,分别采用RT-Real time PCR和Western blot技术检测Layilin表达,用Boyden小室实验检测细胞体外侵袭能力,用爪垫皮下种植淋巴结转移模型检测淋巴转移能力。结果:与A549-non-transfection组和A549-siControl组相比,A549-siLayilin组细胞Layilin表达减少,体外侵袭能力降低,体内淋巴转移率下降。结论:通过RNAi抑制Layilin表达后,能有效抑制透明质酸所诱导的A549细胞体外侵袭和裸鼠移植瘤淋巴转移。本研究为通过RNAi手段抑制Layilin表达,进而抑制肺腺癌淋巴转移提供了有益的思路。; 卓文磊王彦陈正堂敖绪军; 关键词：A549细胞淋巴道转移

Sca-1^+Lewis肺癌细胞耐药实验研究被引量：2: 2008年; 目的探讨小鼠Lewis肺癌(Lewis lung carcinoma,LLC)细胞株中Sca-1+LLC细胞的耐药特性及机制。方法将LLC细胞培养于含有不同浓度丝裂霉素、顺铂、健择、紫杉醇的培养液中,培养72h后分别检测各组Sca-1阳性细胞的比例。以Sca-1作为磁珠分选的表面标志,从LLC细胞中分选Sca-1+LLC细胞和Sca-1-LLC细胞,RT-PCR检测各组ABCG2mRNA表达水平。免疫荧光检测Sca-1+LLC细胞与SP细胞(Hoechst33342拒染)的关系。结果随着抗肿瘤药物浓度的升高,Sca-1阳性细胞的比例随之升高。RT-PCR检测表明Sca-1+LLC细胞表达更高水平的ABCG2mRNA,免疫荧光发现SP细胞只存在于Sca-1+LLC细胞。结论Sca-1+LLC细胞的耐药性较Sca-1-LLC细胞强,与Sca-1+LLC细胞高表达ABCG2有关。; 敖绪军安江宏钱莘卓文磊孙建国陈正堂; 关键词：LEWIS肺癌肿瘤干细胞耐药性

透明质酸诱导人肺腺癌A549细胞表达血管内皮生长因子-C被引量：2: 2007年; 目的:研究透明质酸(HA)对体外培养的人肺腺癌A549细胞表达血管内皮生长因子-C(VEGF-C)的影响。方法:体外培养的A549细胞被随机分为三组,对照组:无血清培养基(FSM)培养;HA 10μg/ml组和HA 20μg/ml组:分别用HA 10μg/ml和20μg/ml的FSM培养,48h后,分别用RT-PCR、Western blot和免疫荧光方法检测A549细胞VEGF-C mRNA和蛋白表达。结果:对照组VEGF-C mRNA和蛋白表达为弱阳性;HA 10μg/ml和HA 20μg/m组lVEGF-C mRNA和蛋白表达皆呈强阳性。HA 20μg/ml组与HA 10μg/ml组相比,VEGF-C mRNA和蛋白表达皆显著增加(P<0.01)。结论:HA能呈剂量依赖性地诱导A549细胞表达VEGF-C。; 卓文磊王彦陈正堂敖绪军; 关键词：透明质酸肺腺癌血管内皮生长因子-C A549细胞

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