时莹
- 作品数：13 被引量：36H指数：4
- 供职机构：第四军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金陕西省社会发展科技攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 宿主蛋白LSm1-7复合体在登革病毒RNA复制中作用的初步研究
- 目的探讨LSm1-7复合体在登革病毒(DENV)RNA复制中的作用。方法 DENV感染HepG2细胞后,在不同时间点(2、24、36、48 h)收集细胞和提取总mRNA,实时定量PCR(RT-qPCR)分析LSm-1表达...
- 董阳超雷迎峰潘鹭翔时莹丁天兵徐志凯
- 关键词：登革病毒宿主蛋白
- 宿主蛋白LSm1-7复合体在登革病毒RNA复制中作用的初步研究
- 目的：探讨LSm1-7复合体在登革病毒(DENV) RNA复制中的作用。方法：DENV感染HepG2细胞后，在不同时间点(2hr、24hr、36hr、48hr)收集细胞和提取总mRNA，实时定量PCR (RT-qPCR)...
- 董阳超雷迎峰潘鹭翔时莹丁天兵徐志凯
- 关键词：登革病毒核糖核酸基因复制宿主蛋白
- 文献传递
- 宿主蛋白LSm1-7复合体在登革病毒RNA复制中的作用研究被引量：2
- 2013年
- 目的探讨LSm1-7复合体在登革病毒(DENV)RNA复制中的作用。方法 DENV感染HepG2细胞后,在不同时间点(2、24、36、48h)收集细胞和提取总mRNA,实时定量PCR(RT-qPCR)分析LSm1表达水平;将LSm1的siRNA和非特异对照siRNA两次转染HepG2细胞后感染DENV-2,24h后收集细胞,提取总mRNA,RT-qPCR分析LSm1表达水平与病毒RNA表达水平;利用LSm1抗体与dsRNA抗体对DENV感染细胞进行免疫荧光染色,激光共聚焦分析LSm1与dsRNA共定位情况。结果与2h比较,随着时间的推移,DENV-2 RNA和LSm1 RNA水平逐渐升高;与对照组siNC比较,siLSm1组LSm1 RNA水平明显降低,沉默效率达78.2%;与对照组siNC比较,siLSm1组DENV RNA含量降低35.6%;LSm1-7复合体在DENV感染HepG2细胞后募集到核周围,与DENV dsRNA共定位。结论 LSm1-7复合体可能作为DENV复制复合物的组成部分,正调控DENV RNA的复制。
- 董阳超雷迎峰丁天兵时莹潘鹭翔王晓霞张泽信徐志凯
- 关键词：登革病毒宿主蛋白RNA复制
- 乙型脑炎疫苗研究进展
- 2012年
- 日本脑炎（Japanese encephalitis,JE）在我国又称为流行性乙型脑炎（简称乙脑）,是由日本脑炎病毒（JEV）引起的急性中枢神经系统传染病,临床以高热、惊厥、意识障碍及脑膜刺激征为主,病死率可达10%,幸存者约15%有后遗症。2010年我国卫生部公布的甲乙类法定报告传染病发病数及死亡数排序中,乙脑分别位于第15位和第7位[1],严重威胁着人民生命健康。
- 时莹魏金花王媛刘梓谕徐志凯丁天兵
- 关键词：日本脑炎病毒疫苗
- Vero细胞膜上与日本脑炎病毒结合分子的初步筛选被引量：3
- 2010年
- 目的:寻找Vero细胞膜上可与JEV结合的分子。方法:采用免疫共沉淀(Co-IP)技术,分离出Vero细胞膜上可与日本脑炎病毒(JEV)结合的分子,做质谱(MS)分析针对特异结合分子进行检测。用流式细胞术(FCM)和免疫荧光实验(IFA)验证候选结合分子与JEV结合的情况。结果:Co-IP产物经SDS-PAGE分离出3条可以与JEV分子特异性结合的条带。其中,MS分析只鉴定出相对分子质量(Mr)约为90000的分子为热休克蛋白90β(HSP90β)。FCM及IFA实验结果表明抗HSP90β单克隆抗体(mAb)可以明显阻断JEV与Vero细胞结合。结论:Vero细胞膜上的HSP90β能与JEV结合。
- 李焱时莹丁天兵徐志凯
- 关键词：细胞膜蛋白VERO细胞
- HeLa细胞膜上日本脑炎病毒受体候选分子的初步鉴定被引量：1
- 2016年
- 目的寻找HeLa细胞膜上可与日本脑炎病毒(JEV)结合的分子。方法采用免疫共沉淀(Co-IP)技术,分离HeLa细胞膜上可与JEV特异结合的分子,对SDS-PAGE特异条带进行质谱分析,并经Western blotting和酶联免疫吸附试验(ELISA)验证其与JEV的特异结合。结果 Co-IP复合物经SDS-PAGE分离出多个条带,选择最明显的3条带进行了质谱分析,结果显示分别为真核细胞翻译延长因子2(eEF2)、热休克蛋白90β(HSP90β)和微管蛋白α6。利用兔抗人HSP90β单克隆抗体进行Western blotting和ELISA实验,证实了细胞膜中确有HSP90β且可与JEV特异性结合。结论 HSP90β是HeLa细胞膜JEV受体的候选分子。
- 王媛时莹寇甜甜雷迎峰丁天兵
- 关键词：日本脑炎病毒细胞膜蛋白
- 宿主蛋白LSm1-7复合体在登革病毒RNA复制中作用的初步研究
- 目的:探讨LSm1-7复合体在登革病毒(DENV)RNA复制中的作用。【方法】DENV感染HepG2细胞后,在不同时间点(2hr、24hr、36hr、48hr)收集细胞和提取总mRNA,实时定量PCR(RT-qPCR)分...
- 董阳超雷迎峰潘鹭翔时莹丁天兵徐志凯
- 文献传递
- 登革病毒E蛋白入胞机制研究现状被引量：4
- 2010年
- 登革病毒(dengue virus,DENV)属于黄病毒科黄病毒属,是具有包膜的单股正链RNA病毒。病毒可通过埃及伊蚊和白纹伊蚊传播,引起登革热和登革休克综合征,广泛流行于热带和亚热带地区,全球流行超过100个国家。登革病毒依赖包膜蛋白E蛋白构象的改变,从而发生病毒包膜和宿主细胞膜之间的融合将病毒核酸传递入细胞质中,但其感染入胞机理尚不十分清楚。本文就登革病毒相关E蛋白入胞机制的最新研究进展作一简要综述。
- 李焱时莹徐志凯丁天兵
- 关键词：登革病毒E蛋白
- 224例流行性乙型脑炎流行特征分析被引量：13
- 2012年
- 目的分析224例流行性乙型脑炎(简称乙脑)的流行特征,为进一步做好乙脑的预防控制措施提供科学依据。方法采用快速IgM抗体捕捉ELISA进行患者血清或脑脊液的乙脑抗体检测,结合临床表现予以诊断。对确诊病例利用Excel软件进行描述流行病学分析。结果 2001-2010年共收集疑似乙脑患者血清/脑脊液标本626份,阳性224例,检出率为35.78%,脑脊液的阳性检出率略高于血清。男女比例为1.24:1,好发年龄为10岁以下及50岁以上,发病者多数在农村。发病时间7-10月,发病高峰集中在8月。结论开展乙脑病例监测,在高发地区及农村进行重点控制,加强宣传教育和增强灭蚊、防蚊意识,加强中老年人的乙脑疫苗免疫接种,是降低乙脑发病率的必要措施。
- 时莹王媛刘梓谕丁天兵
- 关键词：流行性乙型脑炎ELISAIGM
- 天花粉蛋白突变体TCS_(FYY163-165CSA)的构建表达与纯化
- 2012年
- 目的:构建天花粉蛋白(TCS)突变体基因,并在原核系统进行表达及纯化。方法:应用计算机预测TCS分子上可能的抗原决定簇(FYY163-165),并进行定点突变。以栝楼基因组DNA为模扳,经PCR扩增突变基因,与pRSET-A表达载体连接,转化感受态E.coli DH5α,提取质粒进行酶切鉴定及测序。将阳性重组质粒转化感受态E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达后,对表达产物进行Western blot法鉴定和Ni-NTA层析纯化。结果:构建了带有TCS突变体基因(TCSFYY163-165CSA)的重组表达质粒,使目的蛋白在大肠杆菌中获得高效可溶性表达,表达产物经纯化后,得到均一的TCS突变体蛋白。结论:成功地构建了TCS突变体基因TCSFYY163-165CSA,并获得高效表达,为基因工程方法改造TCS提供了新的途径。
- 王媛李友红刘梓谕时莹徐志凯许晶黎志东
- 关键词：天花粉蛋白人类免疫缺陷病毒定点突变原核表达纯化
