曲宁宁
- 作品数：5 被引量：13H指数：2
- 供职机构：吉林农业大学食品科学与工程学院更多>>
- 发文基金：吉林省科技厅科研基金吉林省自然科学基金更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程生物学化学工程自动化与计算机技术更多>>
- 灵芝lz-8基因乳酸菌表达载体的构建与表达及免疫特性被引量：4
- 2013年
- 克隆灵芝lz-8基因并进行原核表达,通过动物试验检测其生理活性。根据GenBank公布的lz-8基因的DNA序列设计引物,从灵芝菌丝中提取灵芝总DNA,PCR扩增lz-8基因并连接到乳酸菌食品级表达载体pNZ8149,转化乳酸乳球菌NZ3900,于30℃Nisin诱导3 h,SDS-PAGE进行蛋白表达分析。将工程菌菌悬液给小鼠灌胃,对其碳廓清试验等免疫指标进行检测。结果表明:扩增到的lz-8基因序列全长330 bp,构建了原核表达载体pNZ8149-lz-8,LZ-8蛋白在NZ3900中得到表达。NZ3900/pNZ8149-lz-8菌悬液对小鼠各项免疫指标有明显的调节作用。
- 曲宁宁陈萍孙鑫泽张雪刘琼
- 关键词：灵芝乳酸乳球菌免疫特性
- 鳕鱼骨中可溶性钙提取工艺的优化被引量：6
- 2012年
- 以鳕鱼骨为原料,用原子吸收分光光度法测定鳕鱼骨中可溶性钙的含量。采用酸法提取鳕鱼骨中的钙,应用响应面分析法对HCl的浓度、提取温度、反应时间及料液比进行优化。结果表明,鳕鱼骨中可溶性钙提取的最佳工艺条件为HCl浓度3mol/L、提取温度108℃、反应时间60min、料液比1:4(m:V)。该条件下鳕鱼骨中可溶性钙提取率可达22.36%。
- 高倩倩刘学军曲宁宁
- 关键词：可溶性钙
- 栖热袍菌α-葡糖苷酶的基因克隆表达及酶学性质被引量：1
- 2013年
- 用分子克隆手段获得栖热袍菌(Thermotoga neapolitana DSM 4359)中的α-葡糖苷酶基因,构建该基因的原核表达载体,并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达。以Thermotoga neapolitana DSM 4359的α-葡糖苷酶基因DNA为模板,通过PCR扩增目的基因,并连接至表达载体中,构建重组质粒pET-28a-glu,然后转化到大肠杆菌中,加IPTG诱导获得重组蛋白。提取粗酶,用葡萄糖测定试剂盒测酶活。序列分析结果表明,该基因的读码框碱基长度为2166bp,编码722个氨基酸;SDS-PAGE电泳结果表明,α-葡糖苷酶基因在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达,蛋白分子量约为62KDa;酶的最适反应温度为70℃,最适pH为5.0。
- 刘琼李大军陈丽丽曲宁宁张雪毕云枫
- 关键词：Α-葡糖苷酶克隆
- 木糖氧化产碱菌中亚硝酸盐还原酶基因的克隆与表达被引量：2
- 2013年
- 目的:对木糖氧化产碱菌中亚硝酸盐还原酶基因(nir)进行克隆并表达,并测定酶的活力,探讨亚硝酸盐还原酶(NiR)对亚硝酸盐的降解特性。方法:提取木糖氧化产碱菌DNA,根据GenBank公布的nir基因序列设计引物,利用PCR技术扩增nir基因,克隆至表达载体pET-28a中,构建重组质粒pET-28a-nir,通过双酶切和测序鉴定后,将阳性重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达,获得重组蛋白。将细胞发酵液超声破碎,提取粗酶,测定酶活力。结果:经PCR扩增及测序鉴定得到长度为1 083bp的目的片段;经终浓度0.6mmol.L-1IPTG、30℃诱导表达5h,获得相对分子质量为37 000的重组蛋白;在pH6.5、反应温度35℃时,测得酶活力为51.74U.mL-1。结论:成功克隆nir基因,在大肠杆菌BL21(DE3)中获得表达,且表达产物有酶活。
- 张雪陈萍毕云枫曲宁宁刘琼孙鑫泽
- 关键词：克隆基因表达
