李侠
- 作品数：5 被引量：12H指数：1
- 供职机构：中南大学湘雅医学院生殖与干细胞工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 用抗细胞表面分子单链抗体筛选和鉴别其相互作用肽
- 2005年
- 展示于噬茵体表面的肽库适于用抗体筛选其特异性结合表达肽。scFv-C193是一个抗KGla细胞表面分子的单链抗体,其抗原仍不清楚,为了筛选并鉴定其识别分子,用8cFv-C193筛选了1个展示于T7噬茵体表面的人胎肝cDNA片段库。经4轮生物吸附后分离单个阳性噬斑,并对其表达产物做电泳分析及斑点杂交。结果鉴别出1个scFv-C193结合肽,scFv-C193+克隆噬菌体DNA插入片段的PCR扩增和序列分析结果表明它是1个43bpDNA片段表达产物。BLAST分析EST人类基因数据库,发现它97%相同于CD34+造血干/祖细胞mRNA的1-43bp,提示scFv-C193识别片段存在于人类造血干/祖细胞基因中,单克隆单链抗体scFv-C193可能用于研究这些人类基因的性质。
- 许静李侠刘俊霞何一心韩忠朝宋增璇
- 关键词：抗体筛选表面分子相互作用CDNA片段CD34^+人胎肝
- B_3HM细胞内活性物质对小鼠造血的作用
- 2002年
- 目的 观察B3HM细胞条件培养液 (B3HM CM )和细胞匀浆组分对小鼠造血细胞的作用。寻找其中可能存在的诱导造血细胞发生恶性转化的活性物质。方法 将B3HM CM加到小鼠骨髓长期培养体系中 ,定期计数细胞生长情况 ;用B3HM CM或经差速离心法分离的B3HM细胞匀浆组分注射经照射处理的小鼠 ,观察小鼠存活情况和造血细胞的变化。结果 B3HM CM在骨髓培养体系中促巨核细胞增殖 ,在小鼠体内促造血细胞增多。B3HM细胞匀浆第 3组分可诱发小鼠白血病。
- 姜学英张丽艳李侠蔡辉国宋增璇
- 关键词：条件培养液骨髓细胞造血细胞动物实验
- 噬菌体展示抗体微型文库的构建被引量：1
- 2006年
- 用噬菌体展示技术构建抗神经钙粘连素(N-cadherin,N-cad)分子胞外结构域、CD34分子胞外结构域及AC133分子的噬菌体展示单链抗体库。将3种分子分别表达于噬菌体表面,再以此噬菌体免疫BALB/c小鼠,提取脾总RNA,RT-PCR扩增抗体重、轻链基因cDNA并插入噬菌体表达载体,构建分别抗N-cad分子胞外结构域、CD34分子胞外结构域及AC133分子的噬菌体表达文库。然后对文库的库容量、多样性、滴度及表达能力进行鉴定。结果显示,用噬菌体展示的3种分子免疫小鼠获得成功,所构建抗体文库的库容量、多样性、滴度及表达能力均能满足进一步筛选目的抗体基因的需要,为制备相应的特异性抗体奠定了基础。
- 黄跃龙李侠许静刘俊霞宋增璇卢光琇
- 关键词：CD34单链抗体
- 单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白的制备被引量：11
- 2003年
- 目的 :制备单链抗体 碱性磷酸酶融合蛋白。方法 :把碱性磷酸酶编码区插入pSTE2 8E5质粒DNA ,用scFvC6 6的重链和轻链可变区DNA取代scFv 8E5的重链和轻链可变区DNA ,构成表达载体pSTE2 C6 6 Ap在大肠杆菌中表达 ,用聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹法分析产物活性。结果 :获得一个分子量为 75kD的scFvC6 6 Ap融合蛋白 ,可结合来自KG1a细胞裂解物中的一个分子量约 6 0kD的蛋白质带 ,其结合功能可通过其碱性磷酸酶活性直接测定。结论 :建立了一个用大肠杆菌制备单链抗体 碱性磷酸酶融合蛋白的方法 ,它可能取代常规的碱性磷酸酶标记方法而用于免疫检测。
- 许静刘俊霞李侠宋增璇
- 关键词：单链抗体碱性磷酸酶融合蛋白
- 神经钙粘连素胞外结构域的分离和表达
- 2006年
- 目的:分离和表达神经钙粘连素(N-cadherin,N-cad)胞外结构域cDNA并观察其表达蛋白质的免疫原性。方法:从胚胎肝脏和骨髓中分离出CD34+细胞,提取总RNA,RT-PCR扩增N-cad胞外结构域cDNA,插入表达载体pOPE101-215,重组载体pOPE-N-cad,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,以所表达蛋白免疫小鼠。结果:分离片段符合预期大小,DNA测序正确。重组质粒转化宿主菌XL1-Blue后,经IPTG诱导表达出了约70kD目的蛋白。免疫5次后,小鼠血清中可检出抗N-cad抗体。结论:CD34+细胞表达N-cad基因,其胞外结构域cDNA表达产物具有较好的免疫原性。
- 黄跃龙许静李侠刘俊霞卢光琇宋增璇
- 关键词：钙粘着糖蛋白类基因表达
