李宗海
- 作品数：66 被引量：95H指数：5
- 供职机构：上海交通大学医学院附属仁济医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程理学更多>>
- Tie2介导的基因导入系统转导p53基因对肺癌的抑制作用被引量：3
- 2007年
- 目的:探讨Tie2介导的基因导入系统体内靶向转导p53基因治疗肺癌的效果。方法:应用双功能交联剂SMCC将Tie2配体寡肽GA3与PEI连接构建靶向Tie2的基因载体。体外试验将GA3-PEI/luciferase导入Tie2表达阳性的SPC-A1肺癌细胞与Tie2表达阴性的SMMC7721肝癌细胞中,24 h后检测luciferase活性。体内导入试验将GA3-PEI/β-gal复合物注射SPC-A1细胞裸鼠种植瘤周围皮下,同时设立PEI/β-gal组为对照;24 h后牺牲裸鼠,检测心、肝、脾、肺、肾和瘤体的β-gal表达。另外将另一批四周龄SPC-A1肺癌种植瘤裸鼠随机分为5组:(1)NS;(2)GA3;(3)p53;(4)PEI/p53;(5)GA3-PEI/p53;每组6只;皮下注射GA3-PEI/p53基因复合物,隔2天1次,并测量肿瘤长短径,计算瘤体积及抑瘤率。结果:GA3-PEI/luciferase组的luciferase活性在SPC-A1细胞中明显高于SMMC7721细胞(P<0.05)。在种植瘤中可见较多蓝染细胞,心、肝、脾、肾组织中几乎不见篮染,肺支气管黏膜除外。与对照组比较,GA3-PEI/p53治疗组对肿瘤生长有明显抑制作用(P<0.05),其抑瘤率为61.29%。结论:GA3基因导入系统靶向转导p53基因,显著抑制肿瘤生长。
- 吴向华李宗海王华茂李锦军姚明陈宪莲曲淑敏徐宇虹顾健人
- 关键词：基因疗法基因P53TIE-2
- 分泌型簇集素蛋白在肺癌细胞株中生物学行为的研究被引量：1
- 2013年
- 背景与目的:簇集素蛋白(clusterin,CLU)在肺癌的发生、发展中发挥重要作用。本研究用分泌型CLU体外处理肺癌细胞株,旨在探讨分泌型CLU对肺癌细胞株的影响。方法:用真核表达纯化的分泌型CLU处理非小细胞肺癌细胞株H460、A549,采用Boyden小室试验检测细胞的迁移能力,用CCK8检测细胞的增殖能力,利用芯片技术分析CLU处理H460细胞的microRNA表达谱,然后采用实时荧光定量PCR检测分泌型CLU处理H460细胞中microRNA的表达,初步分析分泌型CLU执行肿瘤生物学功能的microRNA相关分子机制。结果:分泌型CLU处理组H460迁移的细胞是BSA处理组的3.10倍(P<0.000 1);分泌型CLU处理组A549迁移的细胞是BSA处理组的3.40倍(P<0.000 1);分泌型CLU抑制了肺癌细胞株H460/A549的生长(P<0.000 1);利用芯片技术发现microRNA-302b-3p、microRNA-23a-5p和microRNA-101-5p高表达。结论:在非小细胞肺癌细胞株H460/A549中,真核表达的分泌型CLU促进了细胞迁移、抑制了细胞生长,并且能引起microRNA表达谱的改变,本研究为探索分泌型CLU在非小细胞肺癌中的作用提供了重要的实验依据。
- 马晓罗晓莹李宗海李鹤成
- 关键词：细胞迁移
- 用于检测肿瘤的量子点试剂盒
- 本发明提供一种用于检测肿瘤细胞或肿瘤组织的量子点试剂盒。试剂盒中的主要成分包括多种表面修饰的量子点和量子点纳米球，能特异性识别表皮生长因子受体中EGFRvIII型突变体或过量表达的表皮生长因子受体的单克隆抗体12H23，...
- 储茂泉李宗海石必枝
- 文献传递
- PI3Kδ抑制剂促进CD8^+T细胞在乳腺癌移植瘤中浸润被引量：1
- 2018年
- 目的:探讨磷脂酰肌醇3-激酶δ亚型(phosphatidylinositol 3-kinase delta,PI3Kδ)抑制剂PI-3065对免疫健全小鼠体内乳腺癌生长的抑制作用及其可能的分子机制,并初步了解其不良反应。方法:对免疫健全的乳腺癌移植瘤小鼠给予大剂量PI-3065(75 mg/kg)治疗,观察小鼠内脏变化。调整剂量并随机分为低剂量组(18.75 mg/kg)、高剂量组(37.5 mg/kg)和溶剂处理对照组,每日灌胃给药,每周测量肿瘤体积2次。HE染色法检测小鼠体内各实质脏器和肿瘤组织的病理学变化。免疫组织化学法检测肿瘤组织中CD8^+T细胞的含量。CellTrace.Violet细胞增殖试剂盒和FCM法分别检测CD8^+T细胞增殖活性和细胞表型的变化。结果:75 mg/kg PI-3065可造成小鼠肝脏肿大(P<0.01)。调整PI-3065剂量后,37.5 mg/kg剂量组小鼠体内肿瘤生长受到明显抑制(P<0.05),而小鼠饮食、精神、活动、排泄和体质量(P>0.05)无明显变化,各脏器组织均未发现明显病变,而肿瘤组织中CD8^+T细胞浸润水平明显上调(P<0.01)。PI-3065不影响CD8^+T细胞增殖(P>0.05),但可以下调细胞中程序性死亡分子1(programmed death-1,PD-1)、T细胞免疫球蛋白黏蛋白3(T cell immunoglobulin and mucin-3,TIM-3)和淋巴细胞活化基因3(lymphocyte-activation gene-3,LAG-3)的表达(P值均<0.05),抑制CD8^+T细胞衰竭。结论:大剂量PI-3065会造成肝脏肿大,而适当剂量的PI-3065处理可抑制小鼠体内乳腺癌移植瘤的生长;其机制与抑制CD8^+T细胞衰竭并上调肿瘤中CD8^+T细胞浸润水平有关。
- 李华王益石必枝李宗海
- 关键词：肿瘤浸润
- 抗EGFRvⅢ/EGFR单抗9B9的制备和鉴定
- 2009年
- 目的:制备抗EGFRvⅢ/EGFR单克隆抗体,并探讨其对人肝癌细胞株Huh7-EGFRvⅢ和表皮癌细胞系A431裸鼠移植瘤生长的抑制作用。方法:将稳转细胞株3T3-EGFRvⅢ免疫BALB/c小鼠,免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,ELISA法筛选出EGFRvⅢ阳性的克隆株并命名为9B9。Western blotting和免疫荧光鉴定9B9抗体与EGFRvⅢ/EGFR抗原结合的特性。建立裸鼠人肝细胞癌和表皮细胞癌移植瘤模型,分别腹腔注射PBS、西妥昔单抗和9B9抗体,比较它们对各移植瘤模型的抑瘤效果。结果:通过杂交瘤制备单克隆抗体技术筛选获得一株单抗9B9,Western blotting和免疫荧光结果显示其既能识别EGFRvⅢ又能识别EGFR。9B9抗体和西妥昔单抗对人肝癌细胞Huh7-EGFRvⅢ移植瘤的抑瘤率分别46%和42%,对人表皮细胞癌移植瘤的抑瘤率分别为86%和85%。结论:制备获得的单克隆抗体9B9可显著抑制裸鼠人肝细胞癌以及表皮细胞癌移植瘤的生长,具有与西妥昔单抗相似的抑瘤效果。
- 高慧萍蒋华王华茂李宗海
- 关键词：表皮生长因子受体单克隆抗体肝肿瘤表皮肿瘤
- 改性凝集素包裹的磁性大分子脂质体微球、制备方法及应用
- 本发明公开了一种改性凝集素包裹的磁性大分子脂质体纳米微球、制备方法及应用。所述凝集素包裹的磁性大分子脂质体纳米微球是由改性凝集素与脂质形成脂质膜后，共同包裹磁性纳米颗粒组成具有双层膜结构的大分子脂质体。与传统的在磁性纳米...
- 梁晓飞陈复华李宗海胡晶莹石必枝
- 文献传递
- Hpd3cell、制备方法及其用于构建丝状噬菌体单链抗体库的用途
- 本发明提供了一种Hpd3cell细胞、制备方法和用途。Hpd3cell为含有缺乏基因III的辅助噬菌体基因组的F因子阳性细菌，菌种保藏编号为CGMCC2057。将编码scFv－pIII融合蛋白的噬菌粒转化Hpd3cell...
- 李宗海顾健人杨胜利石必枝王华茂蒋华
- 文献传递
- 靶向肽位置影响融合蛋白与细胞结合活性被引量：2
- 2012年
- 目的:探讨靶向多肽与标签蛋白(绿色荧光蛋白)的位置关系是否会影响融合蛋白与细胞之间的结合能力。方法:将获得的GE11和LyP1两种靶向多肽分别与增强型绿色荧光蛋白在不同位置融合表达,通过原核系统表达纯化,将纯化的蛋白加入血清饥饿的SMMC-7721肝癌细胞株培养液中,处理3h,通过荧光显微镜观察细胞中绿色荧光蛋白的情况检查融合多肽与细胞的结合情况。结果:绿色荧光蛋白的羧基端和GE11、LyP1多肽分别融合表达,处理细胞后,融合蛋白显示与细胞有很强的结合能力;当GE11、LyP1在绿色荧光蛋白氨基端融合时,融合蛋白几乎不能与细胞结合。在此基础上,检测了多种靶向肽对多种细胞的靶向效应。结论:不合适的融合策略会降低,甚至消除靶向多肽的结合能力;融合大分子量蛋白也会改变靶向肽的靶向效应。因此,当使用靶向多肽携带基因进行研究时,其在融合蛋白中的位置应该非常谨慎。
- 王海石必枝杨胜利李宗海罗晓莹
- 阳离子大分子蛋白脂质基因药物载体、制备方法及应用
- 本发明公开了阳离子大分子蛋白脂质基因药物载体、制备方法及应用。其中阳离子大分子蛋白脂质基因药物载体为由转铁蛋白-长链烷基季铵盐和脂质成分按质量比为0.05~20：1制备的大分子转铁蛋白脂质体。基因转染实验的结果表明大分子...
- 梁晓飞李宗海石必枝
- 文献传递
- 靶向EGFR隐蔽表位的免疫毒素的制备及其对肿瘤细胞的特异性杀伤被引量：2
- 2013年
- 目的:制备靶向表皮生长因子受体(epithelial growth factor receptor,EGFR)隐蔽表位(287-302)的免疫毒素,并鉴定其生物学功能。方法:通过基因工程方法将抗EGFR(287-302)的806单链抗体(806 single-chain antibody fragment,806scFv)基因经柔性肽与铜绿假单胞菌外毒素A(Pseudomonas exotoxin A,PEA)的截短形式PE38KDEL连接,构建原核表达载体pET-22b-806scFv-PE38KDEL并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,经纯化获得该免疫毒素融合蛋白806scFv-PE38KDEL,ELISA和流式细胞术检测其与EGFR的结合活性,间接免疫荧光检测重组免疫毒素的内化作用,CCK-8法检测806scFv-PE38KDEL对人脑胶质瘤细胞U87MG和U87MG-EGFRvⅢ、表皮癌细胞A431、乳腺癌细胞MDA-MB-468、舌癌细胞CAL-27的细胞毒性。结果:成功构建重组免疫毒素806scFv-PE38KDEL,诱导表达的蛋白806scFv-PE38KDEL以包涵体形式存在,经纯化后的纯度>95%,经SDS-PAGE和Western blotting鉴定为目的蛋白。806scFv-PE38KDEL能EGFRvⅢ胞外段蛋白结合,还能与外源性表达EGFRvⅢ的肿瘤细胞和高表达EGFR的肿瘤细胞相结合,而与表达低水平EGFR的肿瘤细胞不结合。806scFv介导了重组免疫毒素的内化。806scFv-PE38KDEL对靶细胞有明显的杀伤作用,对过表达EGFRvⅢ的U87MG-EGFRvⅢ细胞IC50值为(5.85±0.03)ng/ml,对EGFR高表达细胞MDA-MB-468、A431、CAL-27的IC50值分别为(162.80±0.06)、(75.72±0.04)、(123.70±0.03)ng/ml。在1μg/ml的质量浓度下,相比PBS对照组,806scFv-PE38KDEL对U87MG-EGFRvⅢ、MDA-MB-468、A431和CAL-27细胞增殖的抑制率均显著增高[(98.67±0.07)%vs(2.45±2.85)%、(86.26±1.01)%vs(0.48±1.76)%、(96.72±0.16)%vs(1.33±1.31)%、(96.29±0.30)%vs(2.00±0.60)%,均P<0.01],而对U87MG细胞几乎没有抑制作用[(3.59±2.09)%vs(0.19±0.95),P>0.05]。结论:本研究所制备的靶向EGFR(287-302)表位的重组免疫毒素806scFv-PE38KDEL能特异地结合并杀伤EGFRvⅢ或EGFR高表达的肿瘤细胞。
- 李雅婷石必枝孔娟李宗海
- 关键词：表皮生长因子受体免疫毒素单链抗体
