李敬达
- 作品数：13 被引量：17H指数：2
- 供职机构：大连大学生命科学与技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 一种具有预防治疗动脉粥样硬化作用的蛋白功能多肽的酵母重组表达、纯化及应用
- 本发明属于生物工程领域，具体涉及oxLDL结合蛋白人血清β<Sub>2</Sub>‑糖蛋白I第五功能域的酵母重组表达、纯化及其在诊断预防和治疗动脉粥样硬化方面的应用。通过设计一对引物在β<Sub>2</Sub>‑GPⅠ基...
- 刘庆平李敬达迟彦王仁军
- 文献传递
- 人β_2-glycoprotein Ⅰ及其第Ⅴ结构域蛋白的原核表达、纯化和活性鉴定被引量：2
- 2011年
- 目的:旨在重组表达人源β2-GPI及其第V结构域基因,探讨后者在抗自身免疫性动脉粥样硬化实验中的干预作用。方法:以实验室保存的CTA727-1重组质粒为模板克隆β2-GPI及其第V结构域基因,构建pET32-β2-GPI和pET32-DV重组表达载体,分别转化至大肠杆菌Rosetta-gami。经IPTG诱导表达,镍离子亲和层析柱纯化重组蛋白,并采用Western blot、HPTLC和ELISA方法验证了重组蛋白的活性与功能。结果:β2-GPI及其第V结构域目的基因被分别克隆至原核表达载体pET-32a-c(+),诱导出具备CL和oxLig-1结合活性的β2-GPI及第V结构域融合蛋白,ELISA实验显示第V结构域融合蛋白可抑制oxLig-1/(r)β2-GPI/Antibody免疫复合物的形成。结论:成功构建了pET32-β2-GPI及pET32-DV表达载体,获得高水平表达且具备活性的β2-GPI和第V结构域重组蛋白,为研究治疗动脉粥样硬化等疾病的多肽药物奠定了基础。
- 王贺迟彦王仁军李文哲马艳华李敬达刘庆平
- 关键词：原核表达
- 一种重组蛋白功能结构域抑制巨噬细胞组织因子表达及其用途
- 本发明涉及生物医药领域，具体涉及到一种重组蛋白功能结构域抑制巨噬细胞组织因子表达及其用途。本发明明确了oxLDL能够上调TF表达，其是在LOX-1介导下启动的信号调控，重组β2-GPIDV能够抑制oxLDL诱导的TF和L...
- 刘庆平迟彦于田田李敬达王仁军
- 文献传递
- 重组蛋白下游连续纯化技术的研究进展
- 2018年
- 重组蛋白质的纯化一直是限制其生产的瓶颈环节,传统纯化工艺以批次模式为主,普遍存在成本高,处理效率及回收率低等问题。近年来,随着连续离心,过滤,层析技术的开发和应用,传统工艺的缺陷得到有效的克服。主要以下游纯化工艺为主线,对工业大规模纯化过程中所涉及的连续技术的特点及应用进行了归纳分析。对纯化工艺中的核心技术-层析,以及未来重组蛋白质的纯化技术进行了展望,旨在为重组蛋白质生产工艺的优化提供新的理论依据和指导思想。
- 赵伟李敬达刘庆平
- 关键词：蛋白纯化层析
- 原核表达Lunasin的抗炎生物学活性鉴定及其对J774A.1细胞组织因子表达的影响被引量：1
- 2017年
- 目的检测原核表达Lunasin(露那辛)的抗炎生物学活性,为Lunasin今后在生物医药领域的开发奠定基础。方法利用基因工程技术将PCR扩增得到的Lunasin DNA片段定向克隆至表达载体p ET28,酶切及测序鉴定后对其诱导表达,利用镍离子亲和层析法对其进行纯化;Griess法和ELISA法检测小鼠J774A.1细胞培养液中Lunasin对一氧化氮和肿瘤坏死因子α、白细胞介素6等炎症因子含量的影响;Western blot检测Lunasin对核因子κB(NF-κB)p65磷酸化以及组织因子(TF)表达的影响。结果成功构建了Lunasin的原核表达载体,获得纯度达90%的Lunasin多肽。Lunasin能通过抑制脂多糖(LPS)诱导小鼠J774A.1细胞NF-κB的活化而抑制一氧化氮合成以及下游基因肿瘤坏死因子α、白细胞介素6的表达。Lunasin对LPS诱导的J774A.1细胞TF的表达也具有显著抑制作用。结论原核表达的Lunasin表现出显著的抗炎生物学活性,明显抑制LPS诱导的J774A.1细胞TF表达,其机制可能是通过抑制NF-κB的活化而实现的。
- 陈玉华付常振李明英李敬达迟彦
- 关键词：核因子ΚB脂多糖
- 脂肪酸移位酶FAT/CD36转运长链脂肪酸研究进展被引量：4
- 2017年
- 机体对长链脂肪酸(LCFAs)的摄取是细胞利用和调节脂肪酸代谢的重要环节,其中绝大多数LCFAs通过一系列膜转运蛋白介导的摄取作用进入细胞内进行代谢。脂肪酸移位酶(FAT/CD36)是一种分布在细胞膜上的二次跨膜糖蛋白,对长链脂肪酸的转运具有重要作用。论文对FAT/CD36的结构、转运长链脂肪酸的机制以及其表达调控进行综述,有助于更好的了解LCFAs作为重要营养物质的跨膜转运,以及代谢综合症时LCFAs经由FAT/CD36引发的发病机制。
- 薄俊霞李敬达刘庆平
- 关键词：跨膜转运代谢综合症
- 人血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1双顺反子表达载体的构建及其在293T细胞中的表达被引量：1
- 2017年
- 目的尝试构建人血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1(LOX-1)基因双顺反子表达载体并检测其在293T细胞中的表达情况和生物学活性,为深入探讨LOX-1在动脉粥样硬化中的作用和以LOX-1为靶点建立干预机制治疗动脉粥样硬化奠定基础。方法首先根据Primer5.0软件设计引物,采用聚合酶链反应法以LOX-1 c DNA片段为模板扩增LOX-1基因完整编码区,克隆至T载体,经测序成功后亚克隆到双顺反子真核表达载体p IRES2-Ac GFP1-Nuc。利用脂质体转染法将双顺反子重组表达质粒转染至293T细胞,倒置荧光显微镜检测质粒转染情况。采用逆转录聚合酶链反应和免疫印迹法鉴定LOX-1基因在核酸和蛋白水平的表达,采用激光共聚焦检测LOX-1基因在293T细胞膜上的表达,激光共聚焦和流式细胞术检测表达在293T细胞膜上的LOX-1结合氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)的生物学活性。结果成功构建p IRES2-LOX-1双顺反子重组表达载体,将其转染293T细胞后,观察到绿色荧光蛋白基因的表达,初步表明LOX-1基因转染至293T细胞。进一步分子水平鉴定结果表明LOX-1基因在293T细胞核酸和蛋白水平均得到表达,激光共聚焦结果证明LOX-1基因在293T细胞膜上表达。最后激光共聚焦和流式细胞术结果证实表达在293T细胞膜上的人LOX-1基因可以结合氧化型低密度脂蛋白。结论成功构建人LOX-1基因双顺反子表达载体,在此基础上证明其在293T细胞膜上得到表达,并且具有结合ox-LDL的生物学活性,为后续体外研究其在动脉粥样硬化中的作用以及以此为靶点建立干预机制奠定了基础。
- 于田田李敬达刘庆平王仁军乔辉陈玉华李明英于柯楠迟彦
- 关键词：血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1氧化型低密度脂蛋白动脉粥样硬化
- β_2-糖蛋白I/ox-LDL免疫复合物与抗磷脂综合征血管疾病关系的研究进展被引量：4
- 2017年
- β_2-糖蛋白I(β_2-GPI)是抗磷脂综合征(APS)患者体内的主要自身抗原,其可以同氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)等阴性物质结合形成稳定的β_2-GPI免疫复合物。β_2-GPI免疫复合物以及抗β_2-GPI免疫复合物抗体的免疫机制显著促进抗磷脂综合征患者动脉粥样硬化斑块损伤和血栓形成。本文从β_2-GPI/ox-LDL免疫复合物及其抗β_2-GPI/ox-LDL免疫复合物抗体的形成和病理作用进行综述,并重点介绍β_2-GPI-DⅤ阻断β_2-GPI/ox-LDL复合物形成的机制,为β_2-GPI/ox-LDL免疫复合物引起的动脉粥样硬化等心血管疾病提供可能的药物靶点和治疗思路。
- 余承洁李敬达刘庆平
- 关键词：Β2-糖蛋白I氧化型低密度脂蛋白抗磷脂综合征
- 一种具有预防治疗动脉粥样硬化作用的蛋白功能多肽的酵母重组表达、纯化及应用
- 本发明属于生物工程领域，具体涉及oxLDL结合蛋白人血清β<Sub>2</Sub>-糖蛋白I第五功能域的酵母重组表达、纯化及其在诊断预防和治疗动脉粥样硬化方面的应用。通过设计一对引物在β<Sub>2</Sub>-GPⅠ基...
- 刘庆平李敬达迟彦王仁军
- 文献传递
- 脂肪酸移位酶FAT/CD36与长链脂肪酸的结合机制被引量：2
- 2018年
- 目的 探讨脂肪酸移位酶FAT/CD36与长链脂肪酸的结合机制。 方法 ELISA分析重组蛋白FAT/CD36与不同种类长链脂肪酸结合强弱机制,分子模拟对接进一步验证其结合机制并分析其可能作用位点。 结果ELISA证明重组蛋白FAT/CD36与不同种类长链脂肪酸均显示特异性结合,结合值大小为油酸＞棕榈酸＞棕榈油酸＞肉豆蔻酸＞硬脂酸。分子模拟对接进一步验证FAT/CD36受体蛋白主要与其中的油酸、棕榈酸及棕榈油酸结合,且结合位点位于FAT/CD36受体蛋白胞外结构的Arg183-Lys-Gly-Lys-Arg-Asn-Leu-Ser-Tyr238区域组成的活性口袋。 结论 FAT/CD36作为细胞长链脂肪酸转运的主要受体,其可能主要转运油酸、棕榈酸和棕榈油酸这三种脂肪酸。
- 薄俊霞李敬达刘庆平
