李明刚
- 作品数：56 被引量：242H指数：9
- 供职机构：南开大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 一个新的葡萄糖淀粉酶基因在大肠杆菌中的分泌表达被引量：2
- 2007年
- 从天然的少根根霉的基因组中,克隆出一个新的葡萄糖淀粉酶基因。对其进行分子进化的研究,在大肠杆菌中表达,从而给实验带来很大方便。设计引物将其(Gene Bank登录号:DQ903853)克隆到pET-22b(+)载体上,转化大肠杆菌BL-21(DE3)表达。检测培养液的上清有较高的葡萄糖淀粉酶活性,在淀粉板上有明显的晕圈显现。
- 杨立泉马春晓戴晓军侯建华孙官日于晓菊丁东风李明刚
- 关键词：大肠杆菌分泌表达葡萄糖淀粉酶少根根霉
- Floral dip法在大豆遗传转化中的应用研究被引量：10
- 2010年
- 首次运用floral dip法将植酸酶基因转化大豆品种冀豆12,获得遗传转化率1.18%～2.22%,证明该方法亦可用于大豆的遗传转化;研究了表面活性剂silwet L-77的浓度、转化液中农杆菌的浓度、不同农杆菌菌株对floral dip法大豆遗传转化的影响,结果表明采用EHA105菌株、菌浓度为OD_(600)=2.0、silwet L-77的浓度为0.05%条件下转化率最高。floral dip法在大豆遗传转化上的成功应用为扩展该方法的应用领域、简便有效地提高大豆的遗传转化效率奠定了一定基础。
- 王翠艳丁东风于晓菊阎瑞香廖芳赵磊陈苗李伟东乔坤艳刘菁李明刚
- 关键词：FLORALDIP大豆植酸酶基因
- 一种高产促胰岛素激素的毕赤酵母工程菌及其构建方法
- 本发明公开了一种高产促胰岛素激素毕赤酵母(Pichia pastoris)工程菌及其构建方法。本发明运用分子生物学技术先构建毕赤酵母(P.pastoris)表达载体pPIC9GLP－1，然后将其线性化后转化进入毕赤酵母G...
- 李明刚侯建华方园园薄涛王翠艳杨少辉武志强闫瑞香
- 文献传递
- 植酸酶基因表达与调控机制研究(Ⅰ)——发芽过程中植酸酶动态与贮藏态磷动员被引量：1
- 1998年
- 分析了玉米和番茄种子发芽过程中植酸酶活性的动态变化与无机磷酸释放量的关系．结果表明，植酸酶活性变化与贮藏态磷释放量密切正相关，这种贮藏态营养的再动员对种子萌发和幼苗生长具有重要意义．
- 刘迅龚雪琴李明刚
- 关键词：植酸酶发芽
- 一种高产促胰岛素激素的毕赤酵母工程菌及其构建方法
- 本发明公开了一种高产促胰岛素激素毕赤酵母(Pichia pastoris)工程菌及其构建方法。本发明运用分子生物学技术先构建毕赤酵母(P.pastoris)表达载体pPIC9GLP-1，然后将其线性化后转化进入毕赤酵母G...
- 李明刚侯建华方园园薄涛王翠艳杨少辉武志强闫瑞香
- 文献传递
- 拟南芥黑芥子酶基因根特异性表达启动子的克隆被引量：12
- 2005年
- 黑芥子酶是一类催化芥子油苷水解的同工酶, pyk10 是一个在拟南芥根和下胚轴中特异表达的黑芥子酶基因。本研究用PCR方法从拟南芥Columbia生态型基因组中克隆了pyk10 基因启动子片段。序列分析表明:该片段全长1 454 bp,与已发表的pyk10 启动子序列(GenBank accession no. AJ292756)同源性达98%。该启动子片段中含有多种其他植物基因启动子中发现的通用启动子元件,并含有器官和组织特异性转录因子的结合位点ACGT-、CANNTG-、GATA-以及I盒等顺式元件。
- 李桂兰王文颇臧少先乔亚科杨少辉薄涛李明刚
- 关键词：拟南芥启动子
- 植酸酶基因表达与调控机制研究(Ⅱ)──番茄幼苗cDNA文库构建与植酸酶基因筛选被引量：9
- 1999年
- 采用异硫氰酸胍法从发芽３～４ｄ的番茄幼苗中提取出总ＲＮＡ，用Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）纤维素亲和层析分离纯化ｍＲＮＡ．以ｍＲＮＡ为模板，Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）为引物用逆转录法合成双链ｃＤＮＡ．将ｃＤＮＡ与ＥｃｏＲＩ接头连接后克隆到表达载体λｇｔ１１的单一ＥｃｏＲＩ位点，经体外包装后感染宿主菌Ｙ１０９０，成功地构建了完整的番茄幼苗ｃＤＮＡ文库．用颜色筛选法筛选重组子，然后用植酸酶抗体做探针进行免疫筛选，得到两个阳性克隆．挑取阳性克隆噬菌斑扩增后纯化ＤＮＡ，经琼脂糖凝胶电泳鉴定，显示确有外源ＤＮＡ存在．该插入片断序列测定正在进行．
- 李明刚刘迅张敏龚雪琴郝亚桓姬生健
- 关键词：番茄植酸酶CDNA文库幼苗
- 利用pfu聚合酶进行高效率DNA末端补平研究
- 2005年
- 李伟东杨少辉李欣薄涛侯建华于新春李明刚
- 关键词：DNA基因工程内切酶分子克隆
- 植酸酶分泌型酵母工程菌的构建(英文)被引量：4
- 2002年
- 通过逆转录 PCR从无花果曲霉总 RNA中扩增出 1 .4 -kb带信号肽的植酸酶基因 ,将其克隆到穿梭表达载体 p YES2 ,构建了含有目的基因的重组质粒 p YPA1 .用 p YPA1转化酿酒酵母 INVSc1菌株 ,成功地构建了能分泌活性植酸酶的工程菌株 .该菌株的成功构建为饲料和食品添加剂以及解磷工程菌肥的开发奠定了基础 .
- 祝建洪孙建陈珈李桂兰吴卓伟王隆飞陈功Marc G Fortin李明刚
- 关键词：工程菌植酸酶酿酒酵母基因克隆基因表达重组质粒
- 重组巴斯德毕赤酵母发酵生产几丁质酶的条件优化研究被引量：14
- 2007年
- 研究了利用重组巴斯德毕赤酵母诱导表达重组几丁质酶的条件。在摇瓶水平上研究了诱导时间、pH、甲醇流加量、油酸等因素对重组几丁质酶表达的影响。结果发现诱导108h蛋白表达量最高;偏酸性环境不利于蛋白表达,维持在pH5.5～6.0最佳;甲醇最佳诱导浓度为1%;添加0.05%的油酸有助于提高蛋白表达量。在此基础上通过正交试验设计优化了培养基配方,在优化条件下,蛋白表达量达171.99mg/L,酶活达49.58U/mL。
- 阎瑞香吴仲侯建华李明刚
- 关键词：毕赤酵母发酵
