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定点突变技术提高内切葡聚糖酶基因F-10酶活性被引量：4: 2014年; 利用高酶活F-10突变株内切葡聚糖酶基因进行定点突变,对91位(K91E)和369位(K369R)氨基酸进行突变,构建突变质粒(K91E);(K369R)和(K91E/K369R),转化大肠杆菌BL21,经筛选获得突变内切葡聚糖酶基因工程菌株K91E,K369R和K91E/K369R。经IPTG诱导后,分离纯化酶学性质分析。结果表明:蛋白质相对分子质量为53 000;突变前后最适pH值未发生变化,为pH 6.8;突变体K369R和K91E/K369R的最适温度为50℃,而突变体K91E最适温度发生了很大的变化,为40℃;酶的比活力分别为202、162.8、77.9 U/mg,分别是原始酶(66U/mg)的3.0倍,2.4倍和1.2倍;三个突变酶的热稳定性有较大提高,70℃处理1 h后,原始酶的活性急剧下降,剩余活力为12%,而K91E的剩余活力为36%,K369R剩余活力为30%,K91E/K369R剩余活力为41%。当经80℃处理1 h后,K91E残余活力仍有22%。本研究获得了酶活性提高的内切葡聚糖酶菌株,为进一步在分子水平研究内切葡聚糖酶的功能及应用打下了基础,也为高酶活酶分子在其他高表达系统的表达提供了基础材料。; 唐自钟刘默洋李雨霏孙蓉刘姗陈惠韩学易; 关键词：内切葡聚糖酶定点突变酶学性质

定点突变技术改变大肠杆菌f-10内切葡聚糖酶基因及其性质研究: 纤维素酶是一种复合酶,它主要包括β-葡萄糖苷酶、外切葡聚糖苷酶和内切葡聚糖苷酶,纤维素在这三种酶的协同作用下被水解成葡萄糖。目前纤维素酶在食品,饲料,环境,能源及洗涤剂工业中已得到广泛的应用,其中细菌纤维素酶制剂由于其良...; 李雨霏; 关键词：内切葡聚糖酶定点突变酶学性质; 文献传递

基于易错PCR技术提高内切葡聚糖酶的活性的方法: 本发明公开了基于易错PCR技术提高内切葡聚糖酶的活性的方法，包括以下步骤：A1，获得突变内切葡聚糖酶基因；A2，内切葡聚糖酶大肠杆菌突变体库的构建；A3，高酶活菌株的筛选；A4，高酶活菌株突变基因的分析；实现了对来源于枯...; 陈惠姚友旭廖燕吴琦李春梅李雨霏阮景军; 文献传递

基于易错PCR技术提高内切葡聚糖酶的活性的方法: 本发明公开了基于易错PCR技术提高内切葡聚糖酶的活性的方法，包括以下步骤：A1，获得突变内切葡聚糖酶基因；A2，内切葡聚糖酶大肠杆菌突变体库的构建；A3，高酶活菌株的筛选；A4，高酶活菌株突变基因的分析；实现了对来源于枯...; 陈惠姚友旭廖燕吴琦李春梅李雨霏阮景军

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李雨霏