林春娇
- 作品数：10 被引量：7H指数：2
- 供职机构：浙江大学更多>>
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- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- S-2-氯丙酸脱卤酶的定向进化及其应用被引量：4
- 2012年
- 为提高S-2-氯丙酸脱卤酶的活力,通过易错PCR的方法将源于假单胞菌(Pseudomonas sp.CGMCC 3267)的脱卤酶(DehII)进行定向进化,进化酶DehII-B2的比活提高3.9倍。同源模建两者的三维结构,并与底物进行分子对接。结果表明,突变位点为A7I,进化酶DehII-B2的结合能比原始酶降低了1.4kcal/mol,活性中心Asp10与底物α碳原子的距离缩短了0.321 6nm,因而加快了酶反应速率、提高了酶比活。目前,该酶的比活高于实验室已得酶。与原始酶相比,其最适温度和热稳定性略有增加,最适pH和pH稳定性没有明显变化。对该酶的应用做了初步的探索,结果表明在40℃,60mmol/L底物浓度下反应10h,转化率达到49.6%,ees>99.9%,因此该酶有一定的应用价值。
- 刘鹏林春娇杨立荣徐刚吴坚平
- 关键词：2-氯丙酸脱卤酶定向进化分子对接
- β-脱卤酶的基因克隆表达及其酶学性质
- 2011年
- 根据GenBank中的序列设计引物,克隆芽孢杆菌中的β-脱卤酶基因(命名为bhd)。以pET30a(+)为载体、Escherichia coli BL21(DE3)-CondonPlus为宿主菌,实现了bhd的高效表达。使用HisTrapTMFF亲和层析柱纯化重组β-脱卤酶,分子量约为23.1 kD。酶学性质研究表明,纯化的重组β-脱卤酶水解3-氯丙酸制备3-羟基丙酸的最适反应体系为30°C,100 mmol/L,pH 7.0的磷酸钠缓冲液。在最适反应条件下,重组β-脱卤酶的比活为16.2 U/mg,Km和Vmax分别为3.26μmol/L和17.86 mmol/(min.g protein)。在最适反应条件下,以10 mmol/L 3-氯丙酸为底物,反应36 h的转化率在93%以上。
- 常晓婷林春娇吴坚平杨立荣
- 关键词：芽孢杆菌3-羟基丙酸
- 一种β-脱卤酶的基因及制备3-羟基丙酸的方法
- 本发明公开一种β-脱卤酶的基因及制备3-羟基丙酸的方法。其β-脱卤酶的基因具有如SEQ No.1所示序列；保藏号为CGMCC No.4196的芽孢杆菌含具有如SEQ No.1所示序列的基因；其β-脱卤酶由具有如SEQ N...
- 吴坚平常晓婷林春娇徐刚杨立荣
- 一种β-脱卤酶的基因及制备3-羟基丙酸的方法
- 本发明公开一种β-脱卤酶的基因及制备3-羟基丙酸的方法。其β-脱卤酶的基因具有如SEQ No.1所示序列；保藏号为CGMCC No.4196的芽孢杆菌含具有如SEQ No.1所示序列的基因；其β-脱卤酶由具有如SEQ N...
- 吴坚平常晓婷林春娇徐刚杨立荣
- 文献传递
- C2//C3卤代酸脱卤酶的筛选及克隆表达
- 脱卤酶是催化碳卤键断裂的一类酶,可用于合成制备医药、农药中间体,如D-乳酸、S-2-氯丙酸、D-2,3-二氯丙酸等。因此选择具有代表性的S-2-氯丙酸、羟基乙酸和3-羟基丙酸为模型化合物,研究卤代酸脱卤酶的催化特性和规律...
- 林春娇
- 关键词：2-氯丙酸羟基乙酸3-羟基丙酸
- 文献传递
- R-2-卤代酸脱卤酶的同源模建及底物对映体选择性研究被引量：2
- 2011年
- 对来自假单胞菌ZJU26中的R-2-卤代酸脱卤酶(DehI-R)进行同源模建,分析其与底物的相互作用,为解析酶的底物对映体选择性提供理论依据。采用Sybyl中的APM模块首次构建并优化了R-2-卤代酸脱卤酶的三维结构,并用Procheck验证结构模型的合理性。使用Surflex-Docking模块将结构模型与底物分别进行对接,分析相互之间的作用。序列比对结果显示,R-2-卤代酸脱卤酶与恶臭假单胞菌PP3中DehI的相似性达23.71%。Deh-R模建后的结构与模板很好的吻合。模型比对分析DehI-R中参与催化的残基,除Asn203外大部分都比较保守。分子对接结果表明,R-2-氯丙酸和S-2-氯丙酸都可以结合到活性位点上,决定其选择性的是位点Asn203,在RS-2-卤代酸脱卤酶所对应位点的残基为Ala,相比之下,Asn具备较大的空间位阻,从而阻止了S-2-氯丙酸的反应。利用Sybyl中的Biopolymer模块对R-2-卤代酸脱卤酶中的Asn203突变成具有不同空间位阻的Ala、Gly和Gln。突变酶与底物对接结果进一步证实了Asn203位点对R-2-卤代酸脱卤酶的底物对映体选择性作用。
- 林春娇杨立荣徐刚吴坚平
- 关键词：同源模建分子对接对映体选择性
- 一种恶臭假单胞菌株及其在制备羟基乙酸中的应用
- 本发明公开了一种恶臭假单胞菌株及其在制备羟基乙酸中的应用，该菌株命名为恶臭假单胞菌株CA15，可用于制备羟基乙酸。本发明使用恶臭假单胞菌株CA15制备羟基乙酸的方法主要包括如下步骤：添加诱导剂对恶臭假单胞菌CA15进行诱...
- 林春娇杨立荣吴坚平徐刚
- 产氯乙酸脱卤酶菌种的诱变育种
- 本文基于该显色法利用96孔板建立了高通量筛选方法。在对从自然界中筛选获得的具有产卤乙酸脱卤酶能力的假单胞菌进行了紫外和微波诱变，利用高通量筛选方法获得了一株高产菌株，其产酶能力为400U/L，相比于出发菌株，产酶能力提高...
- 林春娇吴坚平杨立荣
- 关键词：假单胞菌诱变育种菌株筛选
- 一种恶臭假单胞菌株及其在制备羟基乙酸中的应用
- 本发明公开了一种恶臭假单胞菌株及其在制备羟基乙酸中的应用，该菌株命名为恶臭假单胞菌株CA15，可用于制备羟基乙酸。本发明使用恶臭假单胞菌株CA15制备羟基乙酸的方法主要包括如下步骤：添加诱导剂对恶臭假单胞菌CA15进行诱...
- 林春娇杨立荣吴坚平徐刚
- 文献传递
- 产氯乙酸脱卤酶菌种的诱变育种
- 羟基乙酸是一种重要的医药、化工中间体,传统的生产羟基乙酸的方法是采用化学合成法。利用脱卤酶对氯乙酸脱卤生成羟基乙酸,反应条件温和,产品纯度较好。但现有的脱卤酶对氯乙酸的耐受性不强且菌种产酶能力低。脱卤产物氯离子能够与硫氰...
- 林春娇吴坚平杨立荣
- 关键词：诱变育种脱卤酶高通量筛选羟基乙酸化学合成法假单胞菌
- 文献传递
