公共文化服务平台

共 7 条记录，以下是 1-7

全选清除导出

排序方式：

GST-hVinexin融合蛋白表达载体的构建及其在原核细胞中的表达: 2012年; 目的构建GST-hVinexin融合蛋白表达载体,并在大肠埃希菌(E.coli)中诱导表达。方法从COS-7细胞中提取mRNA,反转录为cDNA。用PCR方法扩增出hVinexin基因全长,通过BamHI和SalI酶切位点将其定向插入pGEX-4T-2载体中,构建原核表达质粒pGEX-4T-2-hVinexin,并转化E.coli DH5α,通过限制性内切酶酶切电泳和DNA测序鉴定正确后,转入E.coli BL21中,经异丙基硫代β-D半乳糖苷大量诱导表达,SDS-PAGE电泳和Western blot鉴定。结果电泳后酶切结果证实hVinexin大小为990bp,测序证明成功构建了原核表达质粒GST-hVinexin,并诱导表达GST-hVinexin融合蛋白,进一步用Western blot方法验证了其融合蛋白的表达。结论成功构建了GST-hVinexin原核表达载体,并在原核细胞大肠埃希菌表达,为进一步纯化Vinexin及研究其结构与功能提供了前提基础。; 沈涛史立伟杨礼庆巴根梁爽付勤; 关键词：原核表达融合蛋白

0～6岁儿童血清尿素氮参考值的初步研究被引量：3: 2011年; 目的:调查0～6岁儿童血清尿素氮的参考值范围。方法:检测1 330例0～6岁来我院健康体检儿童血清尿素氮水平,分组分析得到0～6岁不同年龄段儿童血清尿素氮的参考值范围。结果:建立0～6岁儿童血清尿素氮的参考值范围,1岁以下为1.27～4.17 mmol/L,1～3岁为1.65～4.91 mmol/L,4～6岁为2.13～4.79 mmol/L。结论:0～6岁儿童血清尿素氮含量明显低于成年人,应按年龄段建立自己的参考值范围,为临床诊断提供依据。; 王艳华李妍廖新闫薪如梁爽; 关键词：尿素氮儿童参考值

GST-hPlk2融合蛋白表达载体的构建及其在原核细胞中的表达: 2012年; 目的构建GST-hPlk2融合蛋白表达载体,并在原核细胞大肠埃希菌(E.coli)中诱导表达。方法从人HEK293细胞中提取mRNA,反转录为cDNA。用PCR方法扩增出hPlk2基因全长,通过BamHⅠ和XhoⅠ酶切位点将其定向插入pGEX-4T-2载体中,构建原核表达质粒pGEX-4T-2-hPlk2,并转化E.coli DH5α,筛选阳性重组子,通过限制性内切酶酶切电泳鉴定和DNA序列测定正确后,转入E.coli BL21中,经异丙基硫代β-D半乳糖苷大量诱导表达,SDS-PAGE电泳和Western blot鉴定。结果酶切电泳及测序结果证明,成功构建了原核表达质粒GST-hPlk2,并用Western blot方法证实了GST-hPlk2融合蛋白的表达。结论成功构建了GST-hPlk2原核表达载体,并证实了其在原核细胞E.coli中的表达,为进一步纯化Plk2及研究其结构与功能提供了前提基础。; 沈涛杨礼庆李妍梁峰梁爽付勤; 关键词：原核细胞融合蛋白

hPlk2基因真核表达载体的构建及蛋白的表达和定位被引量：2: 2012年; 目的:构建人Polo样激酶2(hPlk2)真核表达载体并证实该融合蛋白在细胞内的表达及定位。方法:提取工具细胞Hela的mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增hPlk2基因cDNA全长,并将其亚克隆至pEGFP-C1表达载体中。然后将构建的重组质粒进行酶切和测序鉴定,并转染到工具细胞COS-7中,提取细胞蛋白进行Western blot检测。最后利用激光扫描共聚焦显微镜观察pEGFP-hPlk2在COS-7细胞内的定位。结果:hPlk2基因cDNA全长克隆到了真核表达载体pEGFP-C1中,酶切鉴定片段大小为2 058 bp,并测序成功。Western blot检测到了pEGFP-hPlk2融合蛋白表达,分子量约为105 kDa。pEGFP-hPlk2在COS-7细胞中主要定位于细胞质和核周。结论:成功构建了hPlk2基因cDNA全长的真核表达载体,pEGFP-hPlk2蛋白在COS-7细胞中主要定位于细胞质和核周。; 沈涛杨礼庆李妍许晓军梁爽巴根付勤; 关键词：WESTERN BLOT 绿色荧光蛋白质粒构建

骨肉瘤MG-63细胞中Polo样激酶2的表达和定位被引量：1: 2012年; 目的:构建真核表达载体*3 Flag-hPlk2并检测其在骨肉瘤细胞内的表达及定位。方法:以GST-hPlk2为模板,利用PCR扩增hPlk2基因cDNA全长,并将其克隆至含有*3 Flag标签的真核表达载体中。将构建的重组质粒进行酶切和测序鉴定,并转染到骨肉瘤细胞MG-63中,提取细胞蛋白进行Western blot检测。利用共聚焦激光扫描显微镜观察*3 Flag-hPlk2在MG-63细胞中的定位,免疫沉淀法纯化hPlk2蛋白。结果:hPlk2基因cDNA全长成功构建到真核表达载体*3 Flag中,Western blot检测到*3 Flag-hPlk2融合蛋白表达,分子量约为80kDa。*3 Flag-hPlk2在骨肉瘤MG-63细胞中主要定位于细胞质和核周,并成功纯化hPlk2蛋白。结论:成功构建了*3 Flag-hPlk2真核表达质粒,同时鉴定了*3 Flag-hPlk2融合蛋白的表达,并纯化hPlk2蛋白。*3 Flag-hPlk2蛋白主要定位在细胞质和核周。; 沈涛傅永慧李妍梁爽梁峰巴根付勤; 关键词：WESTERN BLOT 免疫沉淀

骨肉瘤细胞中ArgBP2的表达和定位: 2012年; 目的:构建真核表达载体GFP-hArgBP2并检测在骨肉瘤细胞内的表达及定位。方法:以pcDNA3.1-hArgBP2为模板,利用PCR扩增hArgBP2基因cDNA全长,并将其克隆至真核表达载体pEGFP-C1中。进一步将构建的重组质粒进行酶切和测序鉴定,并转染到骨肉瘤细胞MG-63中,提取细胞蛋白进行Western blot检测。同时利用共聚焦激光扫描显微镜观察GFP-hArgBP2在MG-63细胞中的定位,免疫沉淀的方法纯化hArgBP2蛋白。结果:hArgBP2基因cDNA全长成功构建到真核表达载体pEGFP-C1中,Western blot检测到了GFP-hArgBP2融合蛋白表达,相对分子质量(Mr)约为97 000。GFP-hArgBP2在骨肉瘤细胞MG-63中主要定位于细胞质和核周,并成功纯化hArgBP2蛋白。结论:成功地构建了GFP-hArgBP2真核表达质粒,同时鉴定了GFP-hArgBP2融合蛋白的表达,并纯化hArgBP2蛋白。GFP-hArgBP2蛋白主要定位在细胞质和核周。; 沈涛李妍杨礼庆梁爽巴根付勤; 关键词：WESTERN BLOT 免疫沉淀

GST-hCAP融合蛋白表达载体的构建及其在原核细胞中的表达被引量：2: 2012年; 目的:构建GST标签的人c-Cbl相关蛋白(GST-hCAP)融合蛋白表达载体,并在大肠埃希菌(E.coli)中诱导其表达。方法:从COS-1细胞中提取mRNA,反转录为cDNA。用PCR方法扩增出hCAP基因全长,通过EcoRⅠ和XhoⅠ酶切位点将其定向插入pGEX-5X-1载体中,构建原核表达质粒pGEX-5X-1-hCAP,并转化E.coli DH5α,通过限制性内切酶酶切电泳和DNA测序鉴定正确后,转入E.coli BL21中,经异丙基硫代β-D半乳糖苷大量诱导表达,SDS-PAGE电泳和Western blot鉴定。结果:酶切电泳及测序结果证明,原核表达质粒GST-hCAP构建成功,用Western blot方法也证实了GST-hCAP融合蛋白的表达。结论:成功地构建了GST-hCAP原核表达载体,证实了其在原核细胞大肠埃希菌中的表达,为进一步纯化CAP及研究其结构与功能提供了前提基础。; 沈涛许晓军李妍梁爽薛峰付勤; 关键词：原核表达融合蛋白

全选清除导出

共1页<1>

梁爽