樊云霞
- 作品数：5 被引量：5H指数：2
- 供职机构：广东海洋大学信息学院更多>>
- 发文基金：广东省科技厅国际合作项目国家自然科学基金国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学文化科学更多>>
- 红笛鲷T淋巴细胞酪氨酸激酶的原核表达及多克隆抗体制备被引量：2
- 2013年
- 为研究红笛鲷(Lutjanus sanguineus)T淋巴细胞酪氨酸激酶(Lymphocyte cell kinase,LCK)蛋白在机体中的组织分布情况,克隆出红笛鲷lck(LS-lck)基因序列,经酶切、连接等步骤,构建重组质粒pET-28a-LS-LCK,再将其转入大肠杆菌BL21(DE3)菌株后进行IPTG诱导表达。通过表达条件的优化,重组蛋白在37℃、0.03 mmol/L IPTG条件下诱导4 h后获得最大表达量,且主要以包涵体形式存在。Western blot检测重组蛋白可与鼠抗His-tag单克隆抗体发生特异性结合,表明为目的蛋白。利用纯化后的rLS-LCK重组蛋白免疫小鼠,获得了1∶40 000高效价的抗血清,Western blot分析显示,融合蛋白能被小鼠的阳性血清识别,说明rLS-LCK融合蛋白具有较好的免疫反应性和免疫原性。
- 黄瑜张雪利蔡佳简纪常吴灶和鲁义善樊云霞
- 关键词：红笛鲷原核表达BLOT分析抗原性分析
- 红笛鲷CD40基因克隆、表达及功能分析
- 红笛鲷（Lutjanus sanguineus）是我国及东南亚重要的海水经济鱼类，食用价值和经济价值极高。近年来，随着养殖密度的增加及养殖水体的恶化，导致多种病原菌的爆发，对红笛鲷养殖业造成了巨大的经济损失。CD40分子...
- 樊云霞
- 关键词：红笛鲷RACE技术RT-PCR技术
- 文献传递
- 红笛鲷CD40和去除信号肽CD40的原核表达被引量：2
- 2013年
- 根据红笛鲷(Lutjanus sanguineus)CD40基因cDNA全长序列设计2对特异性引物,利用RT-PCR技术从红笛鲷头肾组织中扩增出CD40 ORF序列和去信号肽序列,分别与原核表达载体pET-32a(+)相连,构建原核重组表达质粒,命名为pET32-CD40和pET32-△CD40,并分别转化至大肠杆菌Rosetta,经IPTG诱导后,分别于54 ku和53 ku处有清晰的目的蛋白条带。融合蛋白的表达效率最佳的表达条件,pET32-CD40是诱导温度37℃,起始D(600nm)为0.4,IPTG浓度为0.08 mmol/L,诱导5 h;pET32-△CD40是诱导温度37℃,起始D(600nm)为0.6,IPTG浓度为0.10 mmol/L,诱导6 h。在各自优化的表达条件下,pET32-△CD40融合蛋白表达量较pET32-CD40融合蛋白高。RNAstructure软件分析发现,CD40的mRNA 5′端序列形成复杂且较为稳定的二级结构,不利于翻译的起始,表明信号肽序列的存在可能对CD40基因在原核细胞中的表达有一定的影响。
- 樊云霞简纪常鲁义善吴灶和
- 关键词：红笛鲷原核表达
- 融合蛋白IL6-OmpW的质粒构建及表达纯化被引量：1
- 2013年
- 以重组质粒pMD18-T/IL6和pMD18-T/OmpW为模板,分别扩增红笛鲷IL-6基因和哈维氏弧菌外膜蛋白OmpW基因,运用PCR重叠延伸剪切技术,将IL-6和OmpW基因融合,将融合基因定向克隆到原核表达载体pET-32a(+),转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导融合蛋白高效表达,融合蛋白分子质量约为66.6 ku。优化后表达条件为温度37℃,IPTG浓度0.2 mmol·L-1,诱导时间5 h。用HisTrap HP亲和柱纯化重组蛋白,最佳咪唑洗脱浓度为400 mmol·L-1,纯化蛋白的质量浓度为480μg·mL-1。Western-blot分析显示,该融合蛋白可与鼠抗His-tag单克隆抗体发生特异反应,表明目的蛋白得以正确表达。
- 黄浦江黄郁葱简纪常吴灶和鲁义善黄瑜樊云霞
- 关键词：基因融合
