王一帆
- 作品数：16 被引量：17H指数：2
- 供职机构：宁夏医科大学总医院更多>>
- 发文基金：宁夏回族自治区自然科学基金国家自然科学基金宁夏医科大学校级科研项目更多>>
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- 泛素连接酶MuRF2通过抑制线粒体自噬减轻心肌细胞缺氧损伤
- 2024年
- 目的 探讨泛素连接酶肌肉环指状蛋白2(muscle ring finger protein 2,MuRF2)对缺氧心肌细胞活力和自噬的调控作用。方法 构建大鼠源MuRF2基因过表达和敲减慢病毒载体,分别感染大鼠心肌细胞H9C2。将H9C2细胞分为阴性对照组(NC)、阳性对照组[MuRF2过表达空载体组(LV-Vector)、MuRF2敲减空载体组(LV-RNAi-Vector)]、Mu RF2过表达组(LV-MuRF2)和MuRF2敲减组(LV-RNAi-MuRF2),缺氧培养(5%CO2、1%O2、94%N2)后,采用CCK-8法和ELISA法检测心肌细胞损伤水平,利用透射电子显微镜检测心肌细胞超微结构和自噬水平变化,采用Western blot测定自噬相关蛋白LC3-Ⅱ和P62的表达水平。结果 与对照组相比,缺氧组心肌细胞间隙增大、细胞皱缩、多见漂浮的死亡细胞和细胞碎片,心肌细胞活力下降、肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)含量增加(P均<0.05);电子显微镜下可观察到部分线粒体发生肿胀,并存在嵴断裂、嵴溶解现象,自噬小体散在胞质内;缺氧组LC3-Ⅱ蛋白表达水平升高,P62蛋白表达水平降低(P均<0.05)。缺氧培养后,与NC组和LV-Vector组相比,LV-MuRF2组细胞活力增加,偶见自噬小体,LC3-Ⅱ蛋白表达水平降低、P62蛋白表达水平增高(P均<0.05);与NC组和LV-RNAi-Vector组相比,LV-RNAi-MuRF2组细胞活力降低,可见大量自噬小体,LC3-Ⅱ蛋白表达水平升高、P62蛋白表达水平降低(P均<0.05)。结论 泛素连接酶MuRF2可减轻缺氧所致的心肌细胞损伤,其机制可能与抑制心肌细胞线粒体自噬有关。
- 孙美琪张瑜徐方晶方克宝王一帆朱力何军
- 关键词：泛素连接酶心肌细胞缺氧
- NDUFS6蛋白生物信息学分析及过表达质粒的构建与鉴定
- 2024年
- 目的 应用生物信息学方法分析线粒体呼吸链复合体Ⅰ结构亚基烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶(泛素)铁硫蛋白6(NDUFS6)的理化性质,构建pCV702-NDUFS6过表达质粒并进行鉴定,为进一步研究NDUFS6蛋白功能奠定基础。方法 利用Expasy、UniProtKB、NCBI、SOPMA等生物信息学工具分析NDUFS6蛋白的理化性质、二级结构等;根据NDUFS6 cDNA序列构建携带NDUFS6基因的过表达质粒pCV702-NDUFS6,转染大鼠心肌细胞H9C2,并设置阴性对照(NC)组和相应空载体CON520作为阳性对照(PC)组,经嘌呤霉素筛选后,采用RT-qPCR和Western blot检测NDUFS6 mRNA和蛋白表达水平。结果 NDUFS6蛋白由116个氨基酸组成,理论等电点pI为9.37。蛋白二级结构以无规则卷曲(占50%)为主。酶切鉴定和基因测序结果显示,pCV702-NDUFS6表达质粒构建成功。RT-qPCR和Western blot结果显示,相较于NC组和PC组,过表达组NDUFS6表达水平均上调(P均<0.05)。结论 成功构建了能在心肌细胞H9C2中有效过表达NDUFS6基因的过表达质粒。
- 张瑜孙美琪徐方晶王洁方克宝王一帆何军
- 关键词：生物信息学分析质粒构建
- 心脏磁共振四维血流成像评价肥厚型心肌病患者左心室舒张功能的可行性研究被引量：2
- 2022年
- 目的采用心脏磁共振四维血流(cardiac magnetic resonance four-dimensional flow,CMR 4D Flow)序列对舒张功能障碍的肥厚型心肌病(hypertrophic cardiomyopathy,HCM)患者左心室血流进行测量,探究采用左心室血流动力学特点评价舒张功能的可行性。材料与方法前瞻性纳入45例HCM患者和31例健康对照者,两组人群均进行了3.0 T磁共振稳态自由进动序列及CMR 4D Flow序列扫描。采用CVI42后处理软件测量两组人群左心室基本功能参数及左心室流入流出道层面舒张早期(左心室抽吸)及晚期(左心房主动收缩)的二尖瓣水平平均血流速度(cm/s)。采用独立样本t检验或Mann-Whitney U检验对两组受试者临床资料及影像学参数进行比较;并对舒张早期平均血流速度(E)与左心室质量(left ventricular mass,LV_(mass))、舒张期整体室壁峰值厚度(global peak wall thickness,GPWT)进行Spearman相关性分析。结果HCM组LV_(mass)及GPWT相较健康对照组明显增大[LV_(mass):(163.70±52.18)vs.(87.27±21.01),单位:g;GPWT:(19.64±3.85)vs.(9.99±2.00),单位:mm;HCM组vs.健康对照组,P<0.001];对于二尖瓣水平舒张期平均血流速度:HCM组舒张早期平均血流速度峰值(E峰)小于健康对照组[29.70(17.90)vs.50.50(16.90),单位:cm/s;HCM组vs.健康对照组,P<0.001];HCM组舒张晚期平均血流速度峰值(A峰)与健康对照组差异无统计学意义;HCM组E/A值较健康对照组明显减低[(1.26±0.70)vs.(1.80±0.85),P=0.003]。结论采用CMR 4D Flow序列能够对左心室内血流进行可视化,能够准确区分心脏在舒张早期及晚期心室内血流运动轨迹,并且二尖瓣水平舒张早期平均血流速度峰值(E峰)及E/A值降低有助于定量评价HCM患者左心室舒张功能障碍,为患者制订个体化治疗方案提供参考依据。
- 刘宇豪李薇梁文瑛欧阳丽娜孙潇王一帆朱力
- 关键词：肥厚型心肌病舒张功能左心室心脏磁共振
- PLL-USPION-PMSCs分子探针靶向探测结直肠癌的MRI在体示踪研究被引量：1
- 2022年
- 目的探讨使用多聚赖氨酸-超微、超顺磁氧化纳米铁颗粒蛋白复合物-人胎盘间充质干细胞(PLL-USPION-PMSCs)分子探针靶向结直肠癌小鼠模型,观察活体行分子成像的可行性及PMSCs对结直肠癌的影响。材料与方法培养PMSCs,以PLL进行转染,用USPION对PMSCs-PLL进行磁性标记。将PLL-USPION-PMSCs分子探针通过鼠尾静脉移植入实验组(10只)结直肠癌动物模型内,以同样方法在荷瘤小鼠瘤内注入不含细胞的PBS作为空白对照(对照组,10只)。采用T2WI、T2mapping、T2*mapping序列采集注射后1、3、7、10和14 d两组荷瘤小鼠的MRI图像,观察两组移植瘤内信号分布、变化特征,测量肿瘤的大小、T2值、T2*值,绘制生长曲线。肿瘤标本称瘤重,计算抑瘤率,行普鲁士蓝染色、HE染色及免疫组化病理检测,进行统计学分析。结果实验组移植瘤内可检测到PMSCs低信号,且PMSCs信号和肿瘤信号及T2、T2*值随时间推移发生动态变化。两组移植瘤T2、T2*值差异有统计学意义(F=24.472、8.963,P=0.00、0.01)。两组移植瘤生长曲线相似且体积变化差异有统计学意义(F=4.32,P<0.05),抑瘤率为正值。实验组普鲁士蓝染色后红色肿瘤组织边缘区域可见PMSCs蓝染颗粒,HE染色示两组移植瘤新生血管丰富,免疫组化示两组移植瘤血管内皮标志物CD31、CD34均(+),按照Weidner的判断标准计数,血管数量差异均无统计学意义(t=0.245、0.270,P>0.05)。结论3.0T MRI可安全、有效地实现对PMSCs活体示踪,PMSCs对结直肠癌有定向趋化作用,可以聚集至肿瘤内,通过不同时期的促进和抑制肿瘤生长相互交叉作用最终抑制肿瘤生长。
- 何花王芳王一帆郭玉林
- 关键词：人胎盘间充质干细胞结直肠癌
- 儿童新型冠状病毒感染合并肾损伤的临床特征
- 2023年
- 目的 探讨儿童新型冠状病毒感染合并肾损伤的临床特征。方法 对2022年12月至2023年1月宁夏医科大学总医院儿科重症监护室(PICU)确诊的新型冠状病毒感染患儿临床资料进行回顾性研究。结果 确诊新型冠状病毒感染的41例患儿中,5例(12.2%)肾损伤,10例(24.4%)尿液分析异常[镜下血尿和(或)蛋白尿]。入院时血清尿素、肌酐升高,钠、钾降低及尿液分析异常的患儿,出院时恢复正常。5例肾损伤患儿中4例病情危重死亡,1例完全康复出院。多因素logistic回归分析提示,女性和发热是肾损伤的危险因素[比值比(OR)=1.87,95%可信区间1.02~3.50,P=0.035;OR=2.21,95%CI 1.18~4.30,P=0.012]。结论 儿童新型冠状病毒感染发生肾损伤风险高,应采取有效措施预防,从而降低该类患儿的死亡率。
- 刘静翟青徐京梁丽俊王一帆马金海
- 关键词：肾损伤儿童
- 磁性标记胎盘间充质干细胞的最佳浓度筛选被引量：1
- 2020年
- 目的探讨超微超顺磁性氧化铁(USPIO)标记人胎盘间充质干细胞(hPMSCs)的最佳浓度区间,为实现其磁共振(MR)体内动态成像和临床应用提供基础研究资料。方法分离培养hPMSCs,以多聚赖氨酸(PLL)为转染剂,与不同浓度USPIO形成PLL-USPIO复合物,分别标记hPMSCs并考察其标记效率,检测标记后h PMSCs的存活率、增殖能力和凋亡率等生物学特性。结果普鲁士蓝染色均显示细胞质内大量铁颗粒存在,当标记浓度≥10μg·mL^-1时标记率均>95%;当磁性标记浓度为15、20和25μg·mL^-1时hPMSCs存活率均低于对照组(P均<0.01);标记浓度在25μg·mL^-1内时增殖能力与对照组比较在第1天、3天、5天差异均无统计学意义(P均>0.05),培养至第7天标记浓度为25μg·mL^-1组的OD值低于对照组(P=0.047);各标记细胞与未标记细胞晚期凋亡率差异均无统计学意义(P均>0.05),早期凋亡率随标记浓度增加呈递增趋势,标记浓度≥15μg·mL^-1时早期凋亡率高于对照组(P<0.05),在标记浓度为20、25μg·mL^-1总凋亡率高于对照组(P<0.05)。结论USPIO浓度区间为5~15μg·mL^-1时可以对hPMSCs进行有效标记且对其活性、增殖能力和凋亡率等生物学特性无明显影响。
- 王芳熊瑶何花王一帆郭玉林
- 关键词：胎盘间充质干细胞
- 心脏磁共振组织特征追踪技术对射血分数保留的肥厚型心肌病患者左心功能的初步研究被引量：8
- 2022年
- 目的探讨心脏磁共振组织特征追踪(cardiovascular magnetic resonance feature tracking,CMR-FT)技术对射血分数保留的肥厚型心肌病患者(hypertrophic cardiomyopathy preserved ejection fraction,HCMpEF)左心室功能的价值。材料与方法对70例HCMpEF患者及42例健康对照组行3.0 T心脏磁共振稳态自由进动序列扫描后,将图像导入CVI42后处理软件,测量左心基本功能参数及左室整体3D应变参数,包括:径向(radial)、周向(circumferential)及纵向(longitudinal)的峰值应变(peak strain,PS)、收缩期峰值应变率(peak systolic strain rate,PSSR)及舒张期峰值应变率(peak diastolic strain rate,PDSR),采用SPSS 26.0软件对两组参数进行统计学分析。结果HCMpEF组的各个方向的PS均低于健康对照组[径向:26.00(14.63)vs.32.39(10.55),周向:(-17.30±4.55)vs.(-19.67±3.73),纵向:(-8.14±3.25)vs.(-10.74±3.26),HCMpEF组vs.健康对照组,单位:%],差异具有统计学意义(P<0.005);HCMpEF组的各个方向的PSSR及PDSR均低于健康对照组[PSSR径向:1.55(0.94)vs.1.85(0.61),周向:-0.99(0.39)vs.-1.13(0.29),纵向:-0.49(0.38)vs.-0.67(0.28),单位:s-1,P<0.05;PDSR径向:-1.37(-0.86)vs.-2.17(1.35),周向:0.87(2.44)vs.1.16(0.53),纵向:0.46(0.24)vs.0.68(0.33),单位:s-1],差异具有统计学意义(P<0.001)。结论HCMpEF患者尽管射血分数保留,但是心脏收缩及舒张功能已经受损,CMR-FT定量分析技术可以为评价心脏功能提供新的依据。
- 刘宇豪李薇欧阳丽娜杨琴王一帆孙潇朱力
- 关键词：心脏磁共振心功能肥厚型心肌病射血分数
- 腺病毒介导转铁蛋白受体报告基因在结直肠癌细胞MRI中的初步观察被引量：1
- 2018年
- 目的探讨腺病毒载体介导转铁蛋白受体报告基因(TFRC)转染人结直肠癌Lovo细胞的最佳感染复数(MOI)、目标基因表达情况及体外MR成像情况。方法采用介导转铁蛋白受体报告基因的腺病毒(Ad-TFRC)载体以5、10、50、100的MOI转染Lovo细胞,以实时定量PCR检测相应mRNA表达。以浓度不一的转铁蛋白(Tf)-超微超顺磁性氧化铁(USPIO)探针转染细胞后,经普鲁士蓝染色确定最佳浓度,并以台盼蓝染色评价细胞活力。采用7.0T MR以T2、T2map及T2~*map序列对目标细胞成像,分析信号强度差异。结果 Ad-TFRC成功转染Lovo细胞,最佳MOI值为50,感染效率>90%;实时定量PCR检测显示Ad-TFRC转染Lovo细胞中TFRC蛋白表达量较空白对照Lovo细胞增多(P<0.01);普鲁士蓝染色结果示探针铁浓度为1.5μg/ml时最佳,Lovo细胞内可见大量蓝染铁颗粒;探针标记的Lovo细胞及空白对照Lovo细胞盼蓝染色拒染率分别为(93.80±1.60)%和(95.10±2.30)%,差异无统计学意义(P>0.05);体外MR T2W、T2map及T2~*map成像显示,与空白对照Lovo细胞比较,探针标记的Lovo细胞信号强度减弱(P<0.05)。结论腺病毒载体可在Lovo细胞中高效表达转铁蛋白受体报告基因,磁化标记后可成功实现Lovo细胞的体外7.0T MR显像。
- 续梦玲王一帆何花郜发宝郭玉林
- 关键词：直肠肿瘤报告基因
- 心力衰竭伴高血压患者应用磁共振成像评估左心室形态变化的临床价值分析被引量：1
- 2022年
- 目的:探究心力衰竭伴高血压患者应用磁共振成像评估左心室形态变化的临床价值。方法:选取2019年10月—2021年10月宁夏医科大学总医院收治的82例心力衰竭伴发高血压患者为实验组,另取同期于我院确诊的41例单纯心力衰竭未并发高血压者为对照组,均进行磁共振成像检测,分析两组磁共振相关指标差异。结果:两组患者左心室扩张指标左心室舒张末期容积、左心室收缩末期容积、左心室舒张末期内径、射血分数差异均无统计学意义(P>0.05);实验组患者的左心室质量显著高于对照组(P<0.01);实验组患者左心室各室壁厚度均大于对照组,其中前间隔和后间隔最大室壁厚度差异显著(P<0.01);实验组患者的右心室运动异常占比显著高于对照组(P<0.01),但二尖瓣反流和纤维化占比与对照组差异不显著(P>0.05)。结论:与不伴发高血压的心力衰竭患者相比,并发高血压心力衰竭患者磁共振成像存在一定相似,但伴发高血压心力衰竭患者的左心室壁厚度明显升高,应加强对此类患者的监测。
- 牛媛媛王一帆任翔丁莉
- 关键词：心力衰竭高血压左心室形态
- 腺病毒介导荧光素酶报告基因感染间充质干细胞的研究被引量：2
- 2013年
- 目的 构建携带萤火虫荧光素酶(Luc)报告基因的腺病毒载体(Ad-Luc),研究其感染大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)后的体内外生物发光成像.方法 从psiCHECK-2质粒中用PCR扩增Luc基因,克隆入腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV后行Nhe Ⅰ/Xba Ⅰ双酶切和测序鉴定.重组腺病毒穿梭载体与骨架载体pAdeno同源重组并包装纯化后,测定其病毒滴度.用重组Ad-Luc感染BMSC,行体外生物发光成像确定最佳感染复数(MOI),并采用曲线拟合回归分析生物发光强度与MOI的关系.以锥虫蓝染色法评价细胞活力变化,计算细胞存活率.将转染后BMSC(1×106个)植入SD大鼠前肢肌肉内,行体内生物发光成像.细胞存活率组间比较采用两因素重复测量资料方差分析.结果 经酶切和测序鉴定证明,Ad-Luc构建成功,病毒滴度为1×1010空斑形成单位(PFU)/ml.体外生物发光检测结果显示最佳MOI值为50,Ad-Luc可高效感染BMSC,使其表达Luc,且拟合曲线示细胞生物发光强度随MOI增加而增强(R2 =0.98).转染组和未转染组细胞培养1、3、5、7d时,细胞存活率分别为(92.5±2.3)％与(94.1±1.8)％、(91.4±0.9)％与(92.7±2.0)％、(92.1±1.6)％与(93.3±2.4)％、(91.9±1.5)％与(93.0±3.1)％,2组间细胞活力的差异无统计学意义(F=4.38,P＞0.05).体内生物发光成像结果示BMSC移植1、3、7d后仍有存活,但随时间延长,生物发光信号逐渐减弱.结论 Luc报告基因通过腺病毒载体成功转入BMSC,实现了光学报告基因成像对移植干细胞的示踪.
- 王一帆夏睿郭玉林郜发宝
- 关键词：骨髓干细胞荧光素酶生物发光成像
