王国栋
- 作品数：5 被引量：4H指数：2
- 供职机构：首都医科大学宣武医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- pEGFP-N1-heNOS重组质粒的构建与鉴定被引量：2
- 2007年
- 目的:构建pEGFP-N1-heNOS真核表达重组质粒。方法:应用基因重组手段,根据人内皮型一氧化氮合酶(human endothelial nitric oxide synthase,heNOS)基因序列和表达载体pEGFP-N1质粒上的多克隆位点设计了1对引物,对含有heNOS基因的质粒pBluescript Ⅱ SK-heNOS进行了PCR扩增,得到了约3.6kbp的目的片段。将其插入到载体启动子下游,与增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)报告基因融合,重组质粒经菌液PCR、限制性内切酶酶切和测序进行鉴定。结果:用PCR方法成功从质粒pBluescriptⅡSK-heNOS中扩增出heNOS基因片段,经菌液PCR、酶切及测序鉴定,heNOS基因成功插入到载体pEGFP-N1质粒中,插入目的基因的真核表达载体的酶切图谱与预期一致,并且heNOS基因与Genbank所提供的序列完全一致。结论:成功构建了pEGFP-N1-heNOS真核表达重组质粒。
- 王国栋郭连瑞谷涌泉李建新汪忠镐张建
- 关键词：绿色荧光蛋白真核表达质粒基因重组
- 组织工程血管研究进展(综述)
- 血管组织工程学是将体外培养扩增的血管壁细胞，种植干天然或入工合成的细胞1基质上，经体外培养后，再移植到体内，以替代病损的血管组织，它标志着组织工程由单一组织再生向复台组织的预制迈出了重大的一步，目前研究的主要内客集中在．...
- 王国栋陈兵张建
- 关键词：血管组织工程血管细胞培养
- 文献传递
- 内皮型一氧化氮合酶基因转染犬骨髓源内皮祖细胞的实验研究
- 2009年
- 目的:探讨人内皮型一氧化氮合酶(heNOS)基因转染犬内皮祖细胞(EPCs)的有效方法。方法:分别用5型腺病毒和pEGFP-N1质粒作为载体携带heNOS,对体外定向培养扩增的骨髓来源的犬EPCs进行体外转染,然后对转染heNOS基因后的EPCs进行鉴定及功能检测,观察heNOS基因的功能表达情况。结果:heNOS转染犬EPCs48h后,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测到5型腺病毒转染组EPCs的eNOS表达量(2091.67±172.49pg/ml)较pEGFP-N1质粒转染组(173.67±36.76pg/ml)和未转染组(158.00±30.91pg/ml)均显著增多(P<0.01);硝酸还原酶法测定5型腺病毒转染组细胞培养上清中的NO含量(49.5±5.2μmol/L)较质粒转染组(38.5±7.1μmol/L)和未转染组(39.7±7.2μmol/L)均显著增多(P<0.01)。结论:5型腺病毒载体介导的heNOS基因能够成功地转染犬EPCs,并能在EPCs中有效表达。
- 郭连瑞王国栋宋礼坡谷涌泉张淑文李建新汪忠镐张建
- 关键词：内皮祖细胞内皮一氧化氮合酶腺病毒转染
- Ad5-heNOS重组腺病毒和PEGFP-N1-heNOS重组质粒转染犬内皮祖细胞后的表达研究
- 本文构建了含有人内皮一氧化氮合酶(human endothelial nitric oxide synthase，heNOS)基因的重组5型腺病毒和真核表达重组质粒，分别转染体外扩增培养的犬骨髓来源的内皮祖细胞(endo...
- 郭连瑞王国栋谷涌泉吴英锋张淑文张建
- 关键词：内皮一氧化氮合酶真核表达内皮祖细胞
- 文献传递
- 内皮型一氧化氮合酶基因体外转染对犬内皮祖细胞功能的影响被引量：2
- 2011年
- 目的探讨人内皮型一氧化氮合酶基因(heNOS)转染对犬骨髓源内皮祖细胞(EPC)功能的影响。方法用携带heNOS基因的5型腺病毒作为载体(Ad5-heNOS),对体外定向培养扩增的骨髓源犬EPC进行转染,以未转染的犬EPC作为对照。用酶联免疫吸附试验(ELISA)和硝酸还原酶法检测转染后的EPC中heNOS蛋白的表达和NO的产量,并检测转染后EPC的增殖、黏附、迁移、抗衰老和成血管能力等功能。结果 Ad5-heNOS转染48 h后,转染组EPC的eNOS蛋白表达量和NO产量均明显高于未转染组[(2091.67±172.489)pg/mL vs.(158.00±30.914)pg/mL;(49.5±5.16)μmol/Lvs.(39.7±7.24)μmol/L](均P<0.01);转染组EPC的细胞增殖数、黏附数、迁移数均明显高于未转染组(0.52±0.03 vs.0.31±0.02;28.00±1.41 vs.11.83±1.45;109.67±6.95 vs.72.67±6.29)(均P<0.01),而衰老细胞百分数明显低于未转染组(0.22±0.02 vs.0.32±0.01)(P<0.01);转染heNOS基因的EPC在体外基质胶中培养可形成血管样结构。结论 heNOS基因转染能促进犬EPC的增殖并增强其功能。
- 郭连瑞张建宋礼坡王国栋谷涌泉张淑文李建新汪忠镐
- 关键词：内皮祖细胞内皮型一氧化氮合酶转染血管新生
