王秀宏
- 作品数：28 被引量：60H指数：4
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- 发文基金：国家自然科学基金黑龙江省自然科学基金黑龙江省杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 大鼠肾胆绿素还原酶cDNA克隆、表达及鉴定被引量：1
- 2004年
- 目的克隆大鼠肾胆绿素还原酶(BVR)的cDNA序列后在大肠杆菌中表达、纯化并进行鉴定。方法采用RT-PCR方法利用设计合成的一对特异性引物从大鼠肾组织扩增BVR的cDNA序列,构建pMW172a-BVR重组质粒,转化扩增后进行序列测定,证实同GenBank[053850]公布的大鼠肾BVR的cD-NA序列相同后,阳性重组质粒转化到E.coli BL21(DE3)中表达并进行纯化。结果 SDS-PAGE鉴定其分子量为33 ku,分光光度仪检测具有催化胆绿素还原为胆红素的活性,证实为胆绿素还原酶。实验还测定了Km值,以NADH和NADPH分别作供氢体,测得Km值分别是380μmol/L、3.5μmol/L。结论 通过克隆表达获得了有活性的大鼠BVR酶蛋白,为进一步研究BVR的性质及功能奠定了基础,也为血红素加氧酶的研究提供了便利条件。
- 吕昌莲孙建平刘明王秀宏周虹
- 关键词：CDNA克隆基因表达大肠杆菌
- Cpx系统对细菌致死性应激的影响被引量：1
- 2017年
- 目的确定Cpx系统对细菌致死性应激的影响,探讨该系统在抗生素耐药中的作用。方法测定在不同杀菌机制抗生素处理后野生菌及其突变菌的最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC),确定抗生素对细菌存活率的影响。使用real-time PCR确定在奥索利酸(Oxolinic acid)作用大肠杆菌BW25113及其Cpx系统基因突变菌时,katG、katE、ahpC、sodA、sodB基因表达水平的改变以及使用酶标仪检测对活性氧族ROS生成的改变。结果在不同抗生素的处理下突变菌Δcpx A、Δcpx P、ΔcpxR的存活率有明显提高,与ROS生成有关的基因均有不同程度的上调,过氧化氢生成增加,羟自由基的生成减少。结论 Cpx系统介导的细菌的抗生素耐药与ROS相关。
- 宋玉刘远莉曲艺林郭君玉郑嘉东王秀宏
- 关键词：抗生素耐药大肠杆菌活性氧族抗生素
- 血红素加氧酶-1中第39位赖氨酸对电子传递功能的影响被引量：13
- 2000年
- 目的验证血红素加氧酶－１（ＨＯ－１）中的第３９位赖氨酸（Ｋ３９）对电子传递的影响。方法通过定点诱变将Ｋ３９置换为酸性氨基酸谷氨酸（Ｅ），并将得到的变异型酶基因克隆到高度表达的载体上表达，提纯变异型ＨＯ，测定其活性，比较变异型酶与野生型酶的活性区别，以了解高保守的碱性氨基酸Ｋ３９对电子传递的影响。结果 ＨＯ催化血红素的体外反应，由抗坏血酸提供电子时，变异型酶Ｋ３９Ｅ与野生型酶比较活性没有显著性差异；而ＨＯ催化血红素的模拟体内反应，由ＮＡＤＰＨ－细胞色素Ｐ４５０还原酶提供电子时，变异型酶Ｋ３９Ｅ与野生型酶相比活性有显著性差异。结论 ＨＯ的碱性氨基酸Ｋ３９在接受并传递ＮＡＤＰＨ－细胞色素Ｐ４５０所提供的电子时具有重要作用。
- 王秀宏高旭尹珅周虹邢淑贤
- 关键词：血红素加氧酶定点诱变碱性氨基酸电子传递
- 低氧条件下血红素加氧酶1过表达对人肝癌细胞的保护作用
- 2009年
- 目的探讨低氧条件下人肝癌细胞（HepG2）中血红素加氧酶1（HO-1）过表达对细胞的保护作用，及其与低氧诱导因子1α（HIF-1α）的关系。方法应用低氧气体（0．5％O2、94．5％N2、5％CO2）和化学模拟低氧（250μmol／LCoCl2）方法刺激HepG2细胞。采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）方法，从mRNA水平上检测低氧条件下HO-1和HIF-1α的表达。采用Western bolt方法，从蛋白水平上检测低氧条件下HO-1和HIF-1α的表达及其相关性。采用四甲基偶氮唑蓝（MTF）方法，分析低氧刺激后细胞的存活率，以及低氧刺激同时抑制HO-1蛋白表达后细胞的存活率。采用超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒，检测低氧刺激细胞后总SOD的活性，以及抑制HO-1蛋白表达后细胞中总SOD的活性。结果低氧诱导的HepG2细胞中，HO-1mRNA和蛋白过表达。用锌原卟啉IX（ZnPPIX）抑制低氧条件下HO-1蛋白过表达，可导致HepG2细胞在低氧应激条件下存活率明显降低（P〈0．01）。低氧条件下，HepG2细胞中总SOD的活性显著升高（P〈0．05）；而在抑制低氧条件下HO-1蛋白过表达后，HepG2细胞中总SOD活性明显降低（P〈0．01）。低氧条件下，HIF-1α蛋白表达显著升高，抑制HIF—1α蛋白表达后，HO-1蛋白表达明显降低；而抑制低氧条件下HO-1的过表达后，HIF-1α蛋白表达没有明显改变。结论低氧诱导HepG2细胞中HO-1蛋白的过表达依赖或部分依赖HIF—1α；HO-1的过表达对HepG2细胞抵抗低氧应激发挥保护作用；HO-1的过表达对处于低氧应激条件下细胞的保护作用可能源于SOD。
- 梁飞朱晓洁王秀宏
- 关键词：血红素加氧酶1低氧诱导因子1Α
- 铜诱导人体转铜伴侣蛋白Atox1构象变化的研究被引量：1
- 2001年
- 目的 探讨铜对Atox1蛋白构象变化的影响。方法 用圆二色性光谱分析了Atox1的构象变化。结果 结合铜以后 ,Atox1无论是二级结构 ,还是三级结构都发生了变化 ,铜诱导的构象变化对于Atox1在体内发挥其作用时可能起关键作用。
- 张雪峰贺雨虹尹珅周宏博王秀宏刘长振申峰周虹
- 关键词：圆二色性构象
- 血红素加氧酶中K39E和R198E功能的研究
- 血红素加氧酶(HO)是催化血红素分解为胆绿素、CO及Fe的关键酶.反应的各个阶段,无论在还原反应阶段还是分解反应阶段,都需要电子的供应,在该反应中由NADPH-细胞色素P450还原酶提供电子.HO作用的产物胆绿素及其在还...
- 王秀宏赵炜明于泓周虹
- 文献传递
- 重组血红素加氧酶-2在大肠杆菌中表达与纯化方法的研究
- 2004年
- 目的 确定重组血红素加氧酶 2在大肠杆菌中表达与纯化方法。方法 将已构建的血红素加氧酶 2(HO 2 )的重组质粒pMW1 72a HO 2转入大肠杆菌BL 2 1 ,分析不同温度及摇床转速对HO 2表达的影响 ,确定可溶性表达最佳条件。使用超声波、超速离心、分级盐析、分子筛层析等方法纯化HO 2。检测酶活性。结果 确定了HO 2可溶性表达最佳条件为 37℃ ,(85± 5 )r min ;确定了HO 2具体纯化路线。得到蛋白纯度为 95 .0 % ,纯化倍数为 2 .9倍 ,收得率为 4 0 .9%的活性HO 2蛋白。结论 获得了纯度高、具有活性的HO 2蛋白 ,为进一步进行HO
- 滕悦秋王秀宏赵炜明王志刚刘明周虹
- 关键词：大肠杆菌基因表达纯化
- 奈替米星与丁胺卡那治疗下呼吸道感染的药理观察与疗效评价被引量：6
- 2012年
- 目的研究奈替米星与丁胺卡那治疗下呼吸道感染的药理特点与临床疗效。方法选择下呼吸道感染患者,随机分为给予奈替米星200 mg静脉滴注的观察组和丁胺卡那600 mg静脉滴注的对照组,进行菌种鉴定、细菌敏感性实验、药代动力学分析以及疗效判定。结果观察组对细菌的敏感性均明显高于对照组(P<0.05);药物浓度峰值明显高于对照组、达到峰值的时间和半衰期均明显小于对照组(P<0.05);总有效率为94.29%,治疗效果明显好于对照组(P<0.05)。结论奈替米星吸收快,半衰期减短,敏感性高,适用于下呼吸道感染的治疗。
- 杨慧玲王秀宏
- 关键词：奈替米星丁胺卡那下呼吸道感染药代动力学
- 混合式教学模式在生物技术实验课程中应用价值分析
- 2024年
- 生物技术实验课程是基础医学实验教学中的重要内容,有助于医学类人才实践与科研能力的培养。虽然传统教学法有助于学生获得系统、扎实的基础知识,但是不利于其实践操作能力的提升,教学效果有限。近年来信息技术的发展以及进步促使生物技术实验课程的教学模式需要进行改革与优化。混合式教学模式一般是指传统教学与在线教学所结合的一种“线上”+“线下”的教学方法。本文对混合式教学模式的应用效果,旨在了解该教学模式应用在生物技术实验课程中所起到的作用,以更好地培养高素质的医学类人才。
- 王懿王秀宏谢辉
- 关键词：混合式教学
- 钴原卟啉对H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用被引量：16
- 2009年
- 目的研究钴原卟啉(COPP)预处理在H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用及分子机制。方法建立H9C2心肌细胞缺氧/复氧模型。在H9c2心肌细胞缺氧/复氧前用COPP预处理,并用锌原卟啉(Znpp),全反视黄酸(ATAR)分别抑制HO-1及Nrf2-ARE。检测细胞上清液中LDH、CK的水平变化;用RT-PCR法分析HO-1mRNA表达水平;Westernblot分析HO-1、Nrf2的蛋白表达水平。结果与缺氧/复氧组比,COPP预处理组中LDH和CK水平均明显降低,而HO-1mRNA水平,蛋白水平及细胞核的Nrf2蛋白水平均明显增加;Znpp的加入阻断了COPP预处理对心肌细胞的保护作用;ATAR的加入抑制了Nrf2在细胞核的聚集,进而抑制了COPP对HO-1的诱导。结论COPP预处理诱导H9c2心肌细胞HO-1过表达,具有抗心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用;其机制与Nrf2-ARE信号通路相关。
- 朱晓洁梁飞王秀宏赵炜明高旭
- 关键词：血红素加氧酶-1钴原卟啉
