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一株丁草胺降解菌的分离鉴定及其降解特性的研究被引量：13: 2009年; 利用富集培养技术从长期施用丁草胺的稻田土壤中分离得到能够降解丁草胺的细菌1株,标记为LYC-1。经形态特征、生理生化特征和16SrRNA序列分析,将该菌株鉴定为不动杆菌属(Acinetobacter sp.),菌株LYC-1的最适生长温度为30°C,最适pH值为7.5。当接种量为5%时,该菌株在含100mg/L的丁草胺无机盐基础培养液中培养7d后,可使丁草胺降解达80%以上。; 李艳春熊明华肖晶李春艳; 关键词：丁草胺不动杆菌属生物降解降解特性

一株丁草胺降解菌的分离鉴定及培养条件优化被引量：10: 2010年; 利用富集培养技术从长期施用丁草胺的稻田土壤中分离得到1株能够降解丁草胺的细菌,标记为LYC-2.经形态特征、生理生化特征和16SrDNA序列分析,将该菌株鉴定为钩杆菌属(Ancylobacter sp.).同时,为探索菌株LYC-2的生长特性和最佳培养条件,利用正交试验设计法考察了接种量、温度、pH值3个因素对菌株LYC-2生长的影响.结果表明,菌株LYC-2的最适生长温度为35℃,最适pH值为7.5.当接种量为6%(体积分数,下同)时,该菌株在含100mg.L-1的丁草胺无机盐基础培养液中培养5d后,可使丁草胺降解率达90.85%以上.; 李春艳李艳春成小松肖晶熊明华潘俊波; 关键词：丁草胺正交试验

黑龙江省政策性农业保险影响因素及对策研究: 农业保险是WTO“绿箱”政策支持的现代农业发展手段。基于农业自身的产业属性，发展政策性农业保险，有利于降低农业风险损失，提高农业抵御灾害事故的能力，规避农业风险，实现农民增收，从而推进现代农业发展。黑龙江省是农业大省，也...; 肖晶; 关键词：政策性农业保险风险规避; 文献传递

PRRSV高致病性毒株和经典毒株SYBR GreenⅠ实时荧光PCR鉴别方法的建立被引量：11: 2009年; 根据猪生殖与呼吸综合征病毒高致病性毒株、经典毒株Nsp2基因序列的差异,应用Oligo软件设计了2对特异引物,建立了鉴别PRRSV高致病性毒株和经典毒株的SYBR GreenⅠ实时荧光PCR方法。用该方法检测JEV、CSFV、FMDV和PRCV均呈阴性,表明该方法特异性良好;敏感性试验结果表明,该方法的最低检出量为1 TCID50/0.1 mL;批内、批间重复性试验显示,其变异系数均低于0.3%,具有良好的重复性。应用该方法对人工感染动物进行检测,自感染后第3、5、7、10、142、1 d分别采集全血,检测结果均为阳性。证实,本试验所建立的SYBR GreenⅠ实时荧光PCR方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,可以快速、准确地鉴别PRRSV高致病性毒株和经典毒株。; 柴政李曦王小武符芳张永欣肖晶蔡雪辉周艳君宋淑萍; 关键词：猪生殖与呼吸综合征病毒 SYBR

新城疫病毒HN基因真核细胞定位表达的重组质粒的构建被引量：2: 2009年; 目的构建定位表达于细胞不同部位的新城疫病毒HN（hemagglutinin—neuraminidase）基因。方法应用反转录聚合酶链反应（RT—PCR）技术，以新城疫病毒D90株RNA为模板，分别扩增出含有HN基因全长和不含终止子的HN基因片段，将克隆的HN基因片段经双酶切后定向插入真核表达质粒pcDNA3．1（＋）中，经过定向插入组织凝血酶原激活物（tPA）的前导序列和／或A型流感病毒血凝素（HA）基因跨膜区（TM）片段进行修饰分别构建胞浆型、跨模型和分泌型DNA质粒。结果所有重组质粒经酶切和测序鉴定插入正确。经过体外转染真核细胞，间接免疫荧光和SDS．PAGE蛋白质电泳检测，证明构建的新城疫病毒HN基因定位表达于真核细胞的胞浆、胞膜和细胞外。结论成功构建了定位表达于细胞不同部位的HN蛋白的DNA质粒即胞浆型、跨模型和分泌型。; 隋红李曦张永欣肖晶符芳李乐静白玉贤; 关键词：新城疫病毒细胞定位质粒构建

微载体规模化培养MDCK细胞增殖H9N2亚型禽流感病毒的研究被引量：25: 2009年; 目的探索H9N2亚型禽流感病毒株(A/Chiken/NX/9/99)在微载体大规模培养的MDCK细胞中的增殖规律,确定最佳增殖条件。方法将H9N2亚型禽流感病毒株接种到生长在24孔培养板上的MDCK细胞中进行增殖试验,检测接种不同感染剂量病毒、添加不同浓度TPCK-胰酶、在不同pH值的培养液中培养,接毒后不同时间的病毒血凝素滴度(HA)。根据最佳增殖条件将病毒接种至生长在微载体上的MDCK细胞中,利用250 mL和5L转瓶逐级进行大规模增殖。结果最佳病毒增殖条件为TPCK-胰酶终浓度为10μg/mL,接毒剂量为MOI=0.025,培养液pH值为7.4,在此条件下,H9N2亚型禽流感病毒株(A/Chiken/NX/9/99)适应在250 mL和5L转瓶中微载体培养的MDCK细胞内大量增殖,病毒的最高血凝价均可达到9log2(1∶512)。结论本研究为以哺乳动物细胞为基质规模化生产禽流感疫苗奠定了基础。; 李春艳肖晶李曦刘娣; 关键词：H9N2亚型禽流感病毒 MDCK细胞

高致病性猪生殖与呼吸综合征病毒感染猪外周血单核细胞cDNA文库的构建: 2009年; 为应用CloneminerTMcDNA Library Construction Kit构建高致病性猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染猪的外周血单核细胞cDNA文库,以1×105TCID50PRRSV肌肉接种健康猪,攻毒后第3、5、7、9、14、21及28 d分别采集感染猪外周血,分离单核细胞,提取总RNA、mRNA,以mRNA为模板,通过引物Biotin-attB2-Oligo(dT)、SuperScript.ⅡRT合成5′末端具有attB1接头的cDNA。用柱层析方法纯化cDNA,纯化后的cDNA与pDONRTM222载体进行BP重组,于大肠杆菌DH10B转化,进行文库容量测定。结果表明,构建的高致病性PRRSV感染猪外周血单核细胞cDNA文库的库容量为1.36×107CFU,平均插入片段长度大于1 200 bp,重组率为94.3%,为进一步从文库中筛选未知细胞因子及相关基因提供了有效的工具。; 肖晶符芳李海忠张永欣柴政蔡雪辉宋淑萍李曦; 关键词：猪生殖与呼吸综合征病毒外周血单核细胞 CDNA文库

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肖晶