赵强
- 作品数：8 被引量：8H指数：2
- 供职机构：河北农业大学更多>>
- 发文基金：国家现代农业产业技术体系建设项目更多>>
- 相关领域：农业科学经济管理更多>>
- 新农村建设中农民自办文化的研究——以河北太行山区为中心
- 农民自办文化的发展是当前农村文化建设的一个热点问题,不仅是新农村文化建设的重要组成部分,也是实现乡风文明的关键点和落脚点,关系到农村精神文明建设,关系到新型农民的培养,更关系到农村社会的和谐、稳定和发展,值得高度关注。在...
- 赵强
- 关键词：新农村建设农民自办文化乡风文明
- 文献传递
- 猪圆环病毒2型病毒样颗粒的制备及免疫原性评价被引量：4
- 2022年
- 旨在利用原核表达系统在大肠杆菌中制备出猪圆环病毒2型(PCV2)病毒样颗粒(VLP),用改良的镍亲和层析法纯化并在小鼠体内评价其免疫原性。通过PCR方法从发病猪中扩增出PCV2的ORF2序列,对其全长进行密码子优化并交由公司合成重组质粒pET-32a-yCap;以BL21(DE3)为表达菌株,经IPTG诱导表达,利用SDS-PAGE与Western blot对Cap蛋白的表达方式及抗原特异性进行鉴定;利用改良的镍亲和层析法纯化带有His-Tag标签的重组蛋白;利用透射电镜观察所纯化的载体融合蛋白能否形成VLP;用自制的VLP疫苗与PCV2灭活疫苗(ZJ/C株)分别免疫小鼠,利用商业化PCV2 IgG抗体ELISA检测试剂盒评价其免疫原性。结果显示,成功得到PCV2 ORF2序列和重组质粒pET-32a-yCap,重组质粒在大肠杆菌中主要以可溶性蛋白形式表达,蛋白大小为47 kDa;经镍亲和层析法纯化可得到单一的目的蛋白;重组Cap蛋白能与PCV2多克隆抗体及HRP标记的6*His,His-Tag小鼠单克隆抗体发生特异性结合;经过磷钨酸负染色的蛋白悬液在透射电镜下可观察到大量规则的、直径在17~20 nm的VLP;2种疫苗均能诱导刺激小鼠产生抗体应答反应,VLP组诱导产生的水平更高。综上所述,本研究实现了PCV2 Cap蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达,经改良的镍亲和层析法可得到单一的目的蛋白,能够在体外自发的组装成病毒样颗粒,免疫小鼠后可刺激抗体应答反应,可用于制备亚单位疫苗及相关生物制品。
- 赵强赵云环郭禹翟刚张帅张帅范京惠范京惠
- 关键词：猪圆环病毒2型CAP蛋白可溶性表达病毒样颗粒
- 科技进步促进河北省太行山区土地资源可持续发展途径研究
- 孙贵珍王栓军王卫东张瑞芳李亚青赵兰香李正楠周大迈王荣花赵强王丽娜杨式耘王红
- 该项研究利用科技进步促进山区土地资源持续发展的战略和对策问题，通过分析影响太行山区土地资源持续发展的障碍因素和太行山区土地资源利用潜力的探讨，提出依靠科技进步促进太行山区土地资源持续发展的战略措施和技术措施。基于科学技术...
- 关键词：
- 关键词：土地资源可持续发展农业可持续发展
- 河北省马铃薯晚疫病和早疫病化学药剂减施防控技术研究
- 马铃薯被认为是解决21世纪粮食安全问题的重要作物，2015年中国启动马铃薯主粮化战略，马铃薯在中国现代农业经济发展道路上的作用愈显突出。其保证产量的关键在于防治好马铃薯病害，马铃薯晚疫病和早疫病是危害最严重的两大病害。目...
- 赵强
- 关键词：马铃薯晚疫病马铃薯早疫病化学药剂抗性鉴定
- 河北部分地区猪圆环病毒2型分离鉴定及遗传变异分析被引量：3
- 2022年
- 为了解河北省猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)基因型感染及遗传变异情况,对采自河北省6个不同地区的32份疑似PCV2感染的组织通过PCR进行初步鉴定,并将鉴定为阳性的组织通过接种PK-15细胞分离病毒,通过PCR、间接免疫荧光、透射电镜对分离的病毒进行鉴定,利用特异性引物对PCV2进行PCR全基因序列扩增,测序后进行全基因及ORF2基因核苷酸序列分析。结果显示,32份疑似样品中有13份PCV2阳性组织,阳性率为40.65%。对其中1份仅感染PCV2的样品进行病毒的细胞分离及后续鉴定,得到1株可稳定感染和增殖的PCV2毒株。将初步筛选的阳性组织进行PCV2全基因扩增并测序,得到8株PCV2全基因序列,基因组全长均为1768 bp;8株PCV2全基因同源性比对结果为95%~99.8%,ORF2同源性比对结果为94%~100%;遗传进化分析显示,8个分离株归属于3个基因亚型(PCV2a、PCV2b和PCV2d),同源性氨基酸序列分析显示主要变异区在47~63 aa抗原表位区。本试验结果为进一步研究该地区PCV2分子流行病学及相关疾病的免疫防控奠定了基础。
- 赵云环赵强刘莹张帅郭禹左玉柱范京惠
- 关键词：猪圆环病毒2型遗传进化分析
- 利用E.coli表达PCV2 Cap蛋白病毒样颗粒的不同策略及免疫原性评价被引量：1
- 2022年
- 为得出在大肠杆菌(E.coli)中制备PCV2 VLPs的最佳策略,通过PCR方法,从临床样本中扩增出野生型nCap基因,并对其进行密码子优化合成yCap。以pET-32a为表达载体,构建重组质粒pET-32a-nCap和pET-32a-yCap,以BL21和含有稀有密码子tRNA的Rosetta-gamiB感受态细胞作为表达菌株,以相同体系培养并经IPTG诱导表达,称重比较收获的湿菌体量,通过SDS-PAGE与Western blot对Cap蛋白的表达方式及免疫反应性进行鉴定,使用镍亲和层析法进行纯化并通过SDS-PAGE分析纯化效率,并利用透射电镜观察能否形成VLP,将形成VLP的蛋白以弗氏佐剂为佐剂制备疫苗免疫小鼠,使用ELISA试剂盒测定特异性抗体IgG及细胞因子。结果显示,未经密码子优化的Cap蛋白只能在Rosetta-gamiB中表达,命名为VLP-B,经密码子优化的Cap蛋白在BL21和Rosetta-gamiB中均能表达,分别命名为VLP-A及VLP-C,3种蛋白均主要以可溶性形式表达且VLP-A的产量高于VLP-B、VLP-C;经镍亲和层析法纯化后皆可在透射电镜下观察到大量直径在20 nm左右的VLPs,但VLP-C纯化效率极低,VLP-A效果最佳,VLP-B次之;50μg/只重组VLPs免疫小鼠后(dpi)抗体水平迅速升高,14 d时均已达到阳性临界值,并维持在一个较高的水平直至42 d,同时也诱导产生了细胞因子反应,VLP-C免疫原性最佳,VLP-B次之,VLP-A相对较差。由此可知,将Cap基因密码子优化并提供大肠杆菌所缺少的稀有密码子的tRNA的促进VLPs组装效果要优于提供tRNA,更优于密码子优化,但蛋白表达量低,无法使用镍亲和层析得到理想效果,仍需进一步探索纯化方式。此外,仅将Cap基因密码子优化,产量相对较高,可经镍亲和层析法纯化,但免疫原性相对较弱。结果表明,本研究为PCV2 VLPs疫苗的进一步研究和生产提供了参考依据,对于降低疫苗成本和研制相关生物制品具有重大意义。
- 赵强刘莹刘莹翟刚张帅张帅范京惠范京惠
- 关键词：CAP蛋白密码子优化稀有密码子病毒样颗粒免疫原性
- 利用E.coli表达猪圆环病毒2型病毒样颗粒的不同策略比较
- 猪圆环病毒 2 型(Porcine circovirus type 2,PCV2)是圆环病毒科(Circoviridae)的一员,在形态结构上为20面体对称,无包膜,直径在17～20 nm,是猪圆环病毒病(Porcine...
- 赵强
- 关键词：猪圆环病毒2型密码子优化可溶性表达病毒样颗粒免疫原性
