- 大鼠骨髓间充质干细胞分化的内皮样细胞促进血管新生及Rho激酶的作用
- 2011年
- 本文研究大鼠骨髓间充质干细胞分化生成的内皮样细胞(rat bone marrow mesenchymal stem cells-differentiated endothelial like cells,rBMSC-ECs)在血管新生中的作用及Rho激酶(Rho kinase,ROCK)活性抑制的影响。实验建立rBMSC-ECs与主动脉环体外共培养实验模型,设单纯血管环组、血管环与细胞共培养组和HA-1077低、中、高浓度组,HA-1077组在共培养的基础上分别在培养液中加不同浓度(10、30、60mmol/L)的ROCK特异抑制剂HA-1077。结果显示,培养第3天,血管环与细胞共培养组新生微血管数是单纯血管环组的1.3倍(P<0.05);HA-107710、30和60mmol/L组较共培养组分别减少57.70%、64.13%和48.23%(均P<0.01)。第6天,共培养组及HA-1077组rBMSC-ECs数量明显增加,并迁移至血管环周边,新生微血管生长缓慢;HA-1077组新生微血管数较共培养组明显减少。第9天,共培养组新生微血管部分增粗、增厚、延长,部分退化;一些rBMSC-ECs出芽,形成毛细血管样外观;而HA-1077组新生微血管几乎完全退化。Western blot检测血管环ROCKⅠ和ROCKⅡ的蛋白表达,与单纯血管环组比较,血管环与细胞共培养组表达稍增强,HA-1077各浓度组的表达稍降低。罗丹明-鬼笔毒环肽染色,激光共聚焦显微镜下观察显示,血管环新生微血管分布大量的肌动蛋白(F-actin),细胞内呈现大量粗大的应力纤维,细胞前沿向前方伸出富含F-actin的丝状伪足。另一种ROCK特异抑制剂Y-27632(10μmol/L)抑制新生微血管细胞应力纤维形成,F-actin分布于细胞周边,细胞前沿丝状伪足消失。结果提示,rBMSC-ECs自身可分化为新生微血管,与动脉环体外共培养促进血管新生,ROCK抑制剂抑制其促血管新生作用,其机制涉及F-actin细胞骨架蛋白重组。
- 郑惠珍赵静
- 关键词：RHO激酶血管新生间充质干细胞主动脉环内皮分化
- Rho激酶抑制减少体外培养大鼠主动脉环的血管新生被引量：1
- 2009年
- 背景:目前在血管新生的研究方法中,体外器官水平主要采用鸡胚绒毛尿囊膜实验模型,此方法的应用有其局限性。研究查明,Rho激酶参与血管新生,但尚缺少体外器官水平的深入观察。目的:建立大鼠主动脉环体外培养血管新生实验模型,以Rho激酶抑制剂HA-1077为干预因素,观察Rho激酶活性抑制对血管新生的影响,以及新生血管的生长特征和规律。设计、时间及地点:以血管环为对象,观察测量对比实验,于2008-10-21/2009-01-28在广东医学院生理学研究室进行。材料:2月龄SPF级SD大鼠,雌雄不限;HA-1077(Cat:371970)为Calbiochem公司产品。方法:无菌条件下取大鼠一段胸主动脉,剪为长约1mm的血管环,随机分为对照组、HA-1077低、中、高浓度组,对照组用HG-DMEM+体积分数15%胎牛血清的培养液培养,HA-1077组分别在培养液中加入10,30,60mmol/LHA-1077,第5天终止实验。主要观察指标:拍摄微血管生长图像,计数体外培养的主动脉环新生微血管分支数;WesternBlot检测ROCKⅠ及ROCKⅡ的表达。结果:与对照组比较,HA-1077低浓度组新生微血管数明显增加(P<0.01);中、高浓度组新生微血管数较对照组明显减少(P<0.01)。对照组和HA-1077低浓度组都有ROCKⅠ和ROCKⅡ表达,组间比较差异无显著性意义;HA-1077中、高浓度组则基本未见ROCKⅠ或ROCKⅡ表达。结论:30,60mmol/LHA-1077可以抑制血管新生,并抑制Rho激酶表达。提示Rho激酶抑制可以减少体外培养大鼠主动脉环的血管新生。
- 赵静郑惠珍
- 关键词：RHO激酶血管新生
