郁朝锋
- 作品数：19 被引量：151H指数：7
- 供职机构：上海交通大学医学院附属第九人民医院更多>>
- 发文基金：上海市科学技术发展基金国家自然科学基金上海市科学技术委员会资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人骨形态发生蛋白-2基因转染脂肪源性间充质干细胞的成骨研究被引量：2
- 2006年
- 目的探讨人骨形态发生蛋白-2(hBMP-2)基因修饰的人脂肪源性间充质干细胞(ADSCs)的成骨能力及基因转染对ADSCs成骨分化的生物学调控。方法流式细胞技术鉴定从人脂肪组织中提取的细胞为间充质来源的干细胞。将ADSCs转染hBMP-2基因,免疫沉淀+ Western blotting法和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测hBMP-2表达,确定hBMP-2表达量及表达稳定性,碱性磷酸酶(ALP)染色、ALP定量测定、钙结节染色及RT-PCR分析hBMP-2基因转染对ADSCs向成骨细胞转化的调控,并将转基因细胞注入裸鼠股部肌内,通过X线及组织学检查观察体内成骨情况。结果流式细胞术证实从脂肪中提取的细胞为间充质来源的干细胞。转基因后免疫沉淀+Western blotting法和ELISA法显示转染hBMP-2的ADSCs具有较高且稳定的hBMP-2的表达,转染21 d后表达量无明显降低。ALP染色、ALP定量测定、钙结节染色及RT- PCR发现转基因ADSCs向成骨细胞方向发生分化。裸鼠肌内注射转基因细胞后2周即显示有异位骨形成,4周明显增多,对照组无骨组织形成。结论转染hBMP-2基因的ADSCs在持续稳定高表达目的蛋白的同时,自身向成骨细胞发生分化,并在裸鼠体内形成异位骨。因此,ADSCs有望作为新的基因工程种子细胞。
- 李慧武戴尅戎汤亭亭严孟宁郁朝锋张晓玲岳冰楼觉人
- 关键词：脂肪组织干细胞骨形态发生蛋白质类转染
- 压缩冲击对骨形成蛋白2基因修饰的组织工程骨的影响
- 2006年
- 目的观察直接压缩冲击对骨形成蛋白2(bonemorphogeneticprotein2,BMP-2)基因修饰的组织工程骨细胞存活和成骨的影响,以探讨组织工程骨压缩植骨的可行性。方法体外培养扩增犬骨髓基质干细胞(marrowstromalstemcells,MSCs)转染腺病毒介导的人BMP-2(adenovirusmediatedhumanBMP-2,Adv-hBMP-2)基因,与颗粒状的犬异体冻干松质骨复合。复合后4d进行模拟压缩实验,分别于复合后24h、4d,压缩后即刻、1、4d以扫描电镜观察细胞形态及数量。将单纯冻干骨、未经压缩的Adv-hBMP-2基因修饰的组织工程骨和压缩后4d的Adv-hBMP-2基因修饰的组织工程骨植入裸鼠背部皮下,于术后6周行组织学观察新骨形成及冻干骨吸收情况。结果复合24h冻干骨表面细胞展开,部分孔隙可见单层细胞生长;4d后冻干骨表面细胞复层生长,胶原量多;压缩后即刻,冻干骨与冲击器接触的外表面基本无细胞存在,剖开面可见细胞片状掀起,碎片多;压缩后1d,冻干骨表面细胞大部分脱落掀起,形成较多的细胞碎片;4d后细胞数量明显减少,胶原分泌量增多。植入裸鼠背部皮下后,单纯冻干骨新骨形成极少,孔隙内主要为纤维组织,未经压缩的Adv-hBMP-2基因的组织工程骨组可见大量新骨形成,材料中心与周围新骨分布均匀,压缩后的Adv-hBMP-2基因的组织工程骨组新骨量明显减少,且主要在外周。结论体外模拟压缩植骨可明显减少基因修饰的组织工程骨中的细胞存活及体内成骨,但存活细胞的功能仍存在,可适用于压缩植骨重建假体周围骨缺损。
- 严孟宁汤亭亭戴戎周新社岳冰郁朝锋楼觉人
- 关键词：组织工程骨腺病毒骨形成蛋白2骨形成
- 骨形态发生蛋白-2基因治疗对假体-骨界面影响的实验研究被引量：11
- 2005年
- 目的观察假体周围骨缺损重建中,骨形态发生蛋白(BMP)2基因治疗对假体骨界面骨整合的影响。方法14条成年Beagle犬,于双侧股骨外髁造成横向骨缺损,植入光滑面钛合金假体后保持假体周围3mm骨缺损。共28侧分成4组:空白对照组(2侧),缺损区未行处理;其余分3组为无细胞组(8侧)、细胞组(8侧)和基因组(10侧),采用压缩植骨技术重建股骨髁假体周围骨缺损,分别植入犬异体冻干骨、复合自体骨髓基质干细胞的冻干骨以及复合转BMP2基因自体骨髓基质干细胞的冻干骨。通过组织学、组织形态计量学及生物力学评估假体骨界面的愈合和整合。结果术后6周,基因组假体表面明显较多的新骨沉积,可见散在的假体与新骨间点状接触,假体骨接触率(BIC)达10%左右,而空白对照组、无细胞组和细胞组界面为厚薄不一的软组织,BIC为0;12周时,空白对照组界面仍是较厚的软组织,无细胞组和细胞组的界面主要为结缔组织纤维膜,少量点状骨接触,BIC均未超过10%,基因组的假体骨界面主要为骨组织,假体骨界面可见连续性骨接触,部分BIC达50%,远高于前两组(39.2±7.5比8.4±1.3、7.2±1.5,均P<0.01)。各组的界面推出强度随时间增加,基因组的强度在各个时间段均远高于前两组(1.40±0.22比0.09±0.04、0.08±0.04,均P<0.01)。结论BMP2基因治疗可明显提高假体骨界面的骨整合。
- 严孟宁汤亭亭朱振安周新社贾庆卫郁朝锋楼觉人戴尅戎
- 关键词：骨形态发生蛋白-2基因治疗骨界面自体骨髓基质干细胞组织形态计量学周围骨缺损
- 骨形态发生蛋白2基因转染的骨髓间充质干细胞修复羊胫骨干骨缺损被引量：9
- 2004年
- 目的评价腺病毒介导的人骨形态发生蛋白2(Adv-hBMP-2)基因转染的羊骨髓间充质干细胞(BMSCs)对长骨干骨缺损的修复效果。方法22只羊,体重18.1～29.5kg。制造羊胫骨干骨缺损(2.1cm),分为4组Ⅰ组,Adv-hBMP-2转染BMSCs组(8只);Ⅱ组,腺病毒介导的β半乳糖苷酶(Adv-βgal)转染BMSCs组(6只);Ⅲ组,未转染BMSCs组(6只);Ⅳ组,未治疗组(2只)。细胞自身分泌的细胞外基质作为细胞载体。分期行X线、计量组织学检查和生物力学测定。结果X线检查示Ⅰ组的羊胫骨干骨缺损内有明显骨痂形成;24周,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组的愈合率分别为6/7、1/5、2/5及0/1,X线疗效评分显示Ⅰ组与Ⅱ、Ⅲ组的评分比较,差异有显著性意义。组织学检查显示,与其它组相比,Ⅰ组的新生骨量最多,并有皮质骨形成。生物力学测试示Ⅰ组的力学强度最大。结论Adv-hBMP-2基因转染的BMSCs在缺乏骨传导性支架的条件下可修复长骨干骨缺损。
- 徐小良汤亭亭戴尅戎朱振安郁朝锋徐旻朱六龙楼觉人
- 关键词：骨形态发生蛋白2基因转染骨髓间充质干细胞
- BMP-2基因修饰的MSCs/TCP修复羊股骨头无菌性坏死的实验研究
- 研究目的:评价Adv-hBMP-2基因转染的BMSCs与TCP(磷酸三钙)复合的组织工程化骨对羊股骨头无菌性坏死的修复效果.
材料与方法:1.抽取羊骨髓行BMSCs培养,取第2代BMSCs与TCP(磷酸三钙)材...
- 汤亭亭陆斌岳冰郁朝锋楼觉人戴尅戎
- 关键词：磷酸三钙组织工程骨股骨头无菌性坏死骨修复
- 文献传递
- 骨形成蛋白2基因修饰的老年大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化能力的研究被引量：8
- 2006年
- 目的观察年龄因素对骨髓间充质干细胞(marrowmesenchymalstemcells,MSCs)成骨分化能力的影响;了解基因治疗对老年大鼠MSCs成骨分化能力的影响。方法1月龄(幼年组)、9月龄(成年组)及24月龄(老年组)雄性Wistar大鼠各6只,取MSCs经体外分离、培养及携带骨形成蛋白2(bonemorphogeneticprotein2,BMP-2)基因的腺病毒载体(Ad-BMP-2)转染后,定量检测BMP-2、碱性磷酸酶(alkalinephosphate,ALP)表达,以及成骨细胞标志性蛋白:型胶原、骨涎蛋白(bonesialoprotein,BSP)和骨桥素(osteopontin,OPN)的表达。将转染的各组MSCs分别与磷酸三钙(tricalciumphosphate,TCP)复合后植入裸鼠体内,3周后取材,比较各组诱导异位成骨能力。结果ELISA检测表明BMP-2基因修饰的MSCs可以有效表达BMP-2,且表达量在各年龄组间差异无统计学意义(P>0.05);各组ALP于诱导后第9天达高峰,但组间差异均无统计学意义(P>0.05);诱导后第7天,RT-PCR半定量检测示各组均有成骨细胞特征性蛋白,即:型胶原、OPN及BSP的明显表达,表达量在各组间差异无统计学意义(P>0.05);BMP-2基因转染的MSCs与TCP复合后可诱导裸鼠体内异位成骨,各组成骨量差异无统计学意义(P>0.05)。结论BMP-2基因修饰的老年大鼠MSCs可以恢复成骨分化能力,基因治疗可能为老年性骨骼疾病提供一种新的治疗途径。
- 岳冰陈燕飞汤亭亭陆斌郁朝锋楼觉人戴戎
- 关键词：老年骨髓间充质干细胞骨形成蛋白2基因治疗
- 他克莫司促进基因修饰的同种异体间充质干细胞修复骨缺损被引量：7
- 2004年
- 目的 探讨他克莫司 (FK 5 0 6)在腺病毒介导的转骨形态发生蛋白 2 (BMP 2 )基因的同种异体间充质干细胞 (MSCs)修复节段性骨缺损中的作用。方法 大鼠股骨节段性骨缺损模型 ,分别植入不同的基因修饰的MSCs与胶原复合物 ,于术后 2、4、6、8周行放射学检查 ,术后 8周的标本行组织学检查及组织形态计量学分析。结果 术后 8周 ,放射学评分Adv hBMP 2转染的同系MSCs组 (A组 )、Adv hBMP 2转染的同种异体MSCs应用FK5 0 6组 (C组 )均高于Adv hBMP 2转染的同种异体MSCs未用FK5 0 6组 (D组 ) ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。组织学检查显示 ,术后 8周A、C组以板层骨为主 ,D组以编织骨和类骨质为主 ,内有炎症细胞浸润 ;组织形态计量学分析显示 ,术后 8周A、C组新骨形成的量多于D组 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论 短期小剂量应用FK 5 0 6可抑制Adv hBMP 2基因转染的同种异体大鼠MSCs移植诱发的免疫排斥反应 ,促进长骨干节段性骨缺损的修复。
- 朱六龙汤亭亭戴戎郁朝锋徐小良楼觉人
- 关键词：他克莫司基因修饰骨缺损
- 人骨形态发生蛋白-2基因转染人脂肪源性基质细胞的异位成骨作用被引量：7
- 2005年
- 目的探讨腺病毒介导的人骨形态发生蛋白-2(Adv-hBMP-2)基因转染人脂肪源性基质细胞(ADSCs)的可行性及其成骨作用。方法从人脂肪组织中提取间充质细胞,分别转染β-半乳糖苷酶(β-gal)基因和hBMP-2基因,通过X-gal染色明确转染效率,免疫沉淀+Westernblot法和ELISA法检测BMP-2表达,确定BMP-2表达量、表达时间及其相互关系,流式细胞仪观察基因转染对细胞凋亡的影响,并将转基因细胞注入裸鼠股部肌内行X线及组织学检查。结果X-gal染色显示转染效率达91%。免疫沉淀+Westernblot法和ELISA法显示转染hBMP-2的ADSC具有较高且稳定的BMP-2的表达,20d内表达量无明显减退。流式细胞表明腺病毒转染后细胞凋亡率上升,但上升幅度不大。裸鼠肌内注射转基因细胞后2周即显示有异位骨形成,4周明显增多,对照组无骨组织形成。结论ADSC是较好的基因治疗载体细胞,转染hBMP-2后可以诱导裸鼠体内骨形成。
- 李慧武戴尅戎汤亭亭郁朝锋严孟宁李旭楼觉人
- 关键词：人骨形态发生蛋白-2基因转染HBMP-2BMP-2基因BLOT法细胞凋亡率
- 骨形成蛋白-2基因转染人骨髓间质干细胞诱导异位成骨的实验研究被引量：31
- 2003年
- 目的 评价腺病毒介导的人骨形成蛋白 - 2基因 (Adv- h BMP- 2 )转染人骨髓间质干细胞 (MSCs)的诱导成骨能力。方法 从人骨髓中分离培养获取 MSCs,分为三组 :1Adv- h BMP- 2转染细胞组 ;2 Adv- βgal转染细胞组 ;3未转染细胞组。分别于体外行 Western immunoblot试验、碱性磷酸酶 (AL P)和 Von Kossa染色、AL P定量测定 ,以及裸鼠肌内诱导成骨试验。共 9只裸鼠 ,双侧股后肌群内注射 ,每组 6侧。结果 Adv- h BMP- 2组 MSCs可分泌 BMP- 2蛋白 ;转染后第 9天 AL P染色多数细胞为阳性 ,其它两组 AL P染色阳性细胞少见 ;AL P活性第 3天开始升高 ,12天达高峰为 14 .76单位 ,与其它两组比较有统计学意义 (P<0 .0 5 ) ;于第 2 1天后出现钙结节 ,而其它两组未见。裸鼠肌内注射后 4周 Adv- h BMP- 2组 X线片均有异位成骨 ,Adv- βgal转染细胞组未见明显成骨 ,未转染细胞组仅有少量骨形成。组织学检查发现 :Adv- h BMP- 2组也可见典型的板层骨和骨髓腔形成 ,Adv- βgal组主要为纤维组织 ,未转染组也可见散在骨小梁形成。结论 Adv- h BMP- 2基因转染可诱导人骨髓间质干细胞成骨。
- 朱六龙戴克戎汤亭亭郁朝锋徐旻徐小良楼觉人
- 关键词：骨形成蛋白-2骨髓间质干细胞骨生成
- 骨形态发生蛋白-2基因修饰的组织工程化骨修复羊胫骨干骨缺损被引量：33
- 2003年
- 目的 评价腺病毒介导的人骨形态发生蛋白 2 (Adv hBMP 2 )基因转染的组织工程化人工骨对大动物长骨干骨缺损的修复效果。方法 建立羊胫骨干骨缺损模型 (2 .6cm) ,单侧 (右 )植入体外构建的组织工程化骨 ,2 6只羊分为 5组 :(1)Adv hBMP 2转染的骨髓间充质干细胞 (BMSC)加煅烧骨 (CB)组 (9侧 ) ;(2 )腺病毒介导的 β 半乳糖苷酶 (Adv βgal)基因转染的BMSC加CB组 (6侧 ) ;(3)未转染的BMSC加CB组 (6侧 ) ;(4)单纯CB组 (3侧 ) ;(5 )未治疗组 (2侧 )。分期行X线、计量组织学检查和生物力学测定。结果 X线 :4～ 8周 ,Adv hBMP 2转染组的羊胫骨干骨缺损内有明显骨痂形成 ;2 6周 ,(1)、(2 )、(3)、(4)和 (5 )组的完全愈合率 ,分别为 5 / 8、1/ 5、0 / 5、0 / 2、0 / 1。计量组织学示 ,与其他组相比 ,1组的新生骨量最多 ,并有皮质骨形成 ;第 1组移植骨的压缩载荷和弹性模量明显大于其他各组。结论 hBMP 2基因修饰的组织工程化人工骨可以修复大动物 (羊 )负重骨 (胫骨 )的节段性缺损。
- 戴克戎徐小良汤亭亭朱振安郁朝锋徐旻朱六龙郝永强楼觉人
- 关键词：骨形态发生蛋白-2基因修饰组织工程化骨骨代用品骨再生
