金蕊
- 作品数：14 被引量：5H指数：2
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- MDM2与端粒保护蛋白1的相互作用及其功能
- 2014年
- 目的:探究鼠双微体2同源体(MDM2)与端粒保护蛋白1(POT1)在细胞水平是否有相互作用,及其是否发挥E3泛素化连接酶的功能。方法:首先,用蛋白酶体抑制剂MG132处理稳定表达Flag-POT1的HeLa细胞,Western印迹检测Flag-POT1的表达情况;其次,在HeLa细胞中转入外源的Myc-MDM2和Flag-POT1质粒,48 h后收集细胞,通过免疫共沉淀方法验证Myc-MDM2和Flag-POT1是否具有相互作用;再次,在稳定表达Flag-POT1的HeLa细胞中转入Myc-MDM2或MDM2 siRNA,48 h后收集细胞,Western印迹检测Flag-POT1的表达水平。结果:MG132处理后,Flag-POT1的表达量明显升高且有拖尾现象,免疫共沉淀显示Myc-MDM2和Flag-POT1具有相互作用,但无论转入Myc-MDM2还是MDM2 siRNA,Flag-POT1的表达水平没有明显变化。结论:POT1通过泛素化途径降解,MDM2与POT1具有相互作用,但MDM2不是POT1主要的E3泛素化连接酶。
- 王亚楠金蕊马世良黄君健
- 关键词：HELA细胞免疫共沉淀
- Pot1通过泛素化修饰影响自身的稳定性
- 2015年
- 目的：研究Pot1蛋白的稳定性。方法：利用慢病毒表达载体构建表达外源Flag-Pot1的HeLa细胞稳定克隆，在该克隆中加入CHX抑制新蛋白的合成，检测外源Pot1的半衰期，确定Pot1的稳定性；将Pot1质粒与Ub质粒共转293T细胞后，加入MG132阻止蛋白酶体途径，确定Pot1的稳定性是否受泛素化修饰的影响；构建点突变和截短突变的Pot1质粒，与Ub质粒共转293T细胞后，加入MG132阻止蛋白酶体途径，确定影响Pot1稳定性的区域。结果与结论：Pot1通过泛素化修饰影响自身稳定性；点突变和截断突变实验证实Pot1存在多个泛素化位点，且主要发生在C端400-634位氨基酸残基。
- 杨丹丹金蕊张金丁王亚楠黄君健魏道智
- 关键词：稳定性泛素化
- 具有肿瘤细胞杀伤活性的端粒蛋白多肽片段及其应用
- 本发明公开了具有肿瘤细胞杀伤活性的端粒蛋白多肽片段及其应用。本发明所提供的多肽是如下（a）或（b）：（a）由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的多肽；（b）将序列1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/...
- 黄君健金蕊白云秀马航航徐晓玲
- 文献传递
- 雌激素信号通路在肿瘤中的调控机制
- 叶棋浓黄君健丁丽华张浩金蕊
- 该项目属于基础医学研究领域。肿瘤是危害人类健康的重大疾病，它的发生发展与癌基因的激活和抑癌基因的失活密切相关。美国两位科学家因癌基因的发现而获得1989年诺贝尔生理学或医学奖。一些肿瘤的发生具有性别差异，如乳腺癌和肝癌，...
- 关键词：
- 关键词：肿瘤疾病
- 端粒单链结合蛋白hPOT1核定位结构域的鉴定
- 2004年
- 目的 :鉴定端粒单链结合蛋白hPOT1核定位结构域。方法 :通过hPOT1的不同长度缺失突变体与EGFP绿色荧光蛋白融合 ,转染细胞后用荧光显微镜观察融合蛋白在细胞内的定位。结果 :确定了hPOT1进核序列是定位于第 35 5～ 375位氨基酸之间的富含碱性氨基酸序列 ,其中R3 72 ,R3 73 影响hPOT1的细胞核内定位。结论 :鉴定出hPOT1的核定位结构域 ,该结构域影响了hPOT1不同形式剪接体蛋白的细胞内分布。为进一步研究hPOT1在端粒末端调控中的作用提供了线索。
- 林坚陈皓白云秀金蕊张彬黄翠芬黄君健
- 关键词：HPOT1端粒DNA结合蛋白质类
- 核磷蛋白NPM1的RNA干扰慢病毒载体的构建及鉴定
- 2014年
- 目的:构建高效抑制核磷蛋白NPM1基因的短发夹RNA(shRNA)干扰载体。方法:以人NPM1基因为靶序列,设计并合成shRNA序列,将其连入RNA干扰慢病毒载体pll3.7;酶切鉴定插入shRNA序列片段的质粒,经测序正确后转染293T细胞;Western印迹检测得到抑制效果好的载体pll-shRNA,将其与慢病毒载体共转染293T细胞,进行病毒的包装,将得到的病毒感染HT1080细胞,通过RT-PCR、Western印迹等方法验证其抑制效果。结果:酶切证实构建的载体pll-shRNA中已插入外源基因片段,转染293T细胞后都有抑制效果,其中pll-shRNA2的抑制效果最好;用pll-shRNA2病毒感染HT1080细胞,RT-PCR和Western印迹检测分别在RNA和蛋白质水平证实NPM1的表达显著降低。结论:构建的RNA干扰载体pll-shRNA2能有效抑制NPM1的表达,为NPM1功能的研究提供了有力工具。
- 王亚楠金蕊张宪马世良黄君健
- 关键词：RNA干扰慢病毒载体
- 端粒酶调控机制的研究进展被引量：2
- 2005年
- 端粒酶在细胞中的主要生物学功能是通过其逆转录酶活性复制和延长端粒DNA来稳定染色体端粒DNA的长度。近年有关端粒酶与肿瘤关系的研究进展表明,在肿瘤细胞中端粒酶还参与了对肿瘤细胞的凋亡和基因组稳定的调控过程。与端粒酶的多重生物学活性相对应,肿瘤细胞中也存在复杂的端粒酶调控网络。通过蛋白质-蛋白质相互作用在翻译后水平对端粒酶活性及功能进行调控,则是目前研究端粒酶调控机制的热点之一。
- 金蕊黄君健
- 关键词：端粒酶蛋白质相互作用
- 端粒酶催化亚基核仁定位的调控机制及其生物学意义研究
- 端粒酶逆转录酶hTERT是端粒酶复合物的核心成分之一。hTERT基因异常表达是人类细胞癌变的一个关键步骤,是造成肿瘤细胞端粒酶重新活化、端粒长度稳定性和永生化的原因。近年的研究揭示,细胞癌变不仅造成hTERT基因的异常表...
- 金蕊
- 关键词：端粒酶端粒酶活性细胞永生化
- 核糖核酸酶A在端粒免疫荧光原位杂交实验中的应用被引量：1
- 2017年
- 目的:在端粒免疫荧光原位杂交实验中,降低核仁着色对端粒图像清晰度的影响。方法:分别将0.1、0.2、0.4 mg/m L的核糖核酸酶(RNase)A与待检标本于37℃消化过夜,然后进行端粒原位杂交实验。结果:0.4 mg/m L RNase A可以消除Hep G2细胞端粒原位杂交时的非特异结合,使用He La、293T和U2OS细胞也有同样效果。结论:在进行端粒原位杂交实验时,用0.4 mg/m L RNase A消化核仁可减少探针的非特异结合,提高端粒图像的清晰度。
- 于芳金蕊黄君健
- 关键词：核糖核酸酶A端粒
- TPP1基因慢病毒干扰载体的构建及鉴定
- 2014年
- 目的:构建抑制TPP1基因的短发夹RNA(sh RNA)干扰载体。方法:以人的TPP1基因为靶序列,设计并合成sh RNA序列TPP1-si1和TPP1-si2,分别与RNA干扰慢病毒载体pll3.7连接,双酶切鉴定质粒得到阳性克隆pll-TPP1-si1和pll-TPP1-si2,经测序正确后将其与慢病毒包装载体(RRE、REV、VSVG)共转染293T细胞,进行病毒的包装,将得到的病毒感染稳定高表达外源TPP1蛋白的HT1080细胞,通过Western印迹检测其对TPP1蛋白表达的抑制效果,并进行比较;将抑制效果好的病毒感染高表达外源Pot1蛋白的Hep G2细胞,检测Pot1蛋白在内源TPP1被敲低的情况下能否在端粒定位。结果:经双酶切验证,外源片段成功插入载体pll-TPP1-si1和pll-TPP1-si2中;pll-TPP1-si1和pll-TPP1-si2均能明显抑制TPP1的表达,其中pll-TPP1-si1的抑制效果最好;pll-TPP1-si1病毒感染高表达外源Pot1蛋白的Hep G2细胞,经免疫荧光鉴定能够有效抑制内源TPP1的表达,使Pot1不再端粒定位。结论:构建的抑制TPP1基因的sh RNA干扰载体能有效抑制TPP1的表达,为端粒蛋白TPP1功能的研究奠定了实验基础。
- 张金丁金蕊杨丹丹王亚楠黄君健苏金为
- 关键词：SHRNA干扰WESTERN印迹免疫荧光
