陈雅君
- 作品数：15 被引量：55H指数：4
- 供职机构：河南农业大学牧医工程学院更多>>
- 发文基金：河南省重大公益性科研项目国家科技支撑计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 猪传染性胃肠炎病毒HN-2012分离株M基因遗传变异分析及其真核表达研究被引量：1
- 2015年
- 以猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）HN-2012株的M基因为模板,设计了1对特异性引物,扩增了M基因,经克隆测序后,将该基因序列与NCBI中TGEV毒株的相应序列进行同源性分析,构建系统进化树并进行遗传变异分析。将M基因亚克隆至真核表达载体p CAGGS-M-flag中,转染293T细胞,利用flag标签抗体进行Western blot检测分析。结果表明,TGEV HN-2012株的M基因与其他毒株间核苷酸的同源性分别为94.8%~99.0%,与中国其他毒株关系较远。Western blot结果可见大小约为29.5 k D的目的条带,表明M基因成功的在293T细胞中表达。
- 陈雅君曹贝贝徐卫松程慧芳胡慧
- 关键词：M基因293T细胞
- 河南省动物源性大肠杆菌O157:H7流行病学调查及其致病机制的研究
- 肠出血性大肠埃希菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli,EHEC)是能引起人的出血性腹泻和肠炎的一群大肠埃希氏菌,O157∶H7是肠出血性大肠埃希菌的一个最常见的血清型。自1982年美国...
- 陈雅君
- 关键词：多重PCR流行病学调查致病机制
- 文献传递
- 大肠杆菌O157:H7特异基因的实时荧光定量PCR检测被引量：28
- 2011年
- 为建立快速、特异的检测大肠杆菌O157:H7的实时荧光定量聚合酶链式反应(real time polymerase chainreaction,RT-PCR)方法,针对大肠杆菌O157:H7的特异基因rfbE设计一对特异引物,建立SYBR GreenⅠ实时定量PCR检测方法,并进行灵敏度、重复性和特异性实验,同时与常规PCR方法进行比较。结果显示所建立的SYBRGreenⅠ实时定量PCR方法可以快速、特异地检测出大肠杆菌O157:H7,细菌纯培养物中其灵敏度可达2×101CFU/mL,临床模拟污染肉样中能最低能检测到1×102CFU/mL的大肠杆菌O157:H7。与常规PCR方法相比,SYBR GreenⅠ实时定量PCR方法对临床样品中大肠杆菌O157:H7的检出率大大提高。本研究建立的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR技术能快速准确、特异、敏感地检测大肠杆菌O157:H7。
- 胡慧陈雅君段志刚孟振北彭新然张龙现崔保安王亚宾
- 关键词：大肠杆菌O157:H7SYBR实时PCR
- 动物源大肠杆菌O157:H7多重PCR检测方法的初步研究被引量：4
- 2011年
- 为建立快速、特异的分离鉴定大肠杆菌O157∶H7的多重PCR方法,根据GenBank上已发表的大肠杆菌O157∶H7菌体抗原和鞭毛抗原的基因序列(rfbE和fliC基因)设计2对特异引物,分别建立针对rfbE、fliC基因的单一PCR方法;通过优化扩增条件,进一步建立可用于动物粪便检测的大肠杆菌多重PCR方法,并进行特异性和灵敏性试验,同时还初步应用到临床样品的检测中。结果表明:所建立的多重PCR方法能同时扩增出rfbE基因(327 bp)和fliC基因(247 bp)的特异性片段,特异性结果显示其他非大肠杆菌O157∶H7的扩增结果均为阴性,表明该方法有较高的特异性;灵敏度试验结果显示细菌纯培养物的检测灵敏度为102cfu/mL。通过试验初步建立了快速、灵敏、特异的检测大肠杆菌O157∶H7的多重PCR方法,为从动物粪便中分离鉴定大肠杆菌O157∶H7提供了一种简单、灵敏的试验方法,可用于临床动物携带大肠杆菌O157∶H7的分子流行病学调查。
- 陈雅君胡慧段志刚崔保安张龙现孟振北彭新然陈丽颖王亚宾
- 关键词：多重PCR
- 动物源大肠埃希菌O157∶H7多重PCR检测方法的初步研究被引量：1
- 2011年
- 【目的】建立一种快速检测动物源大肠埃希菌O157∶H7及其毒力基因的多重PCR方法。【方法】以编码大肠埃希菌O157抗原的rfbE基因、编码H7抗原的fliC基因以及编码细胞溶血素A的hylA基因为靶基因,设计3对特异性引物,优化并建立检测大肠埃希菌O157∶H7的多重PCR方法,对其特异性和敏感性进行检测,最后对其临床应用效果进行了初步验证。【结果】成功建立了快速检测和鉴定动物源大肠埃希菌O157∶H7rfbE、fliC和hylA基因的多重PCR方法,该方法特异性较好,灵敏度较高,可达2.0×102CFU/mL。【结论】初步建立了检测动物源大肠埃希菌O157∶H7的多重PCR方法,该方法可用于携带大肠埃希菌O157∶H7临床动物的分子流行病学调查。
- 胡慧段志刚崔保安张龙现陈雅君陈丽颖张红英彭新然孟振北王亚宾
- 关键词：多重PCR
- 动物源大肠杆菌O157：H7多重PCR检测方法的初步研究
- 目的: 建立快速、特异的分离鉴定大肠杆菌O157：H7的多重PCR方法。方法: 根据GenBank上已发表的大肠杆菌O157：H7菌体抗原和鞭毛抗原的基因序列(rfbE和fliC基因)设计两对特异引物，分别建立了针对rf...
- 陈雅君段志刚魏战勇王亚宾崔保安张龙现陈丽颖胡慧
- 关键词：多重PCR
- 文献传递
- 猪流感病毒毒株感染对猪外周血淋巴细胞炎性因子转录时相的影响被引量：1
- 2014年
- 试验用猪流感病毒（Swine influenza virus，SIV）（毒株）体外感染猪外周血淋巴细胞（Peripheral blood mononuclear cell，PBMC），利用real—timePCR方法对病毒感染不同时间细胞中的病毒量和炎性细胞因子mRNA表达量进行检测。结果显示，感染后1h就可检测到病毒，但病毒量相对较小；在24h时病毒开始大量增殖；在72h病毒量达到最高峰，为1h时20倍以上。IL-1βmRNA的表达量在48h增加到最高；IL-6mRNA的表达量在感染后1h内显著增加；IL-8mRNA的表达量在12h时达到最大量；IL-12P35mRNA的表达量在72h迅速上升，为对照的56．1倍；IL-12P40mRNA的表达量在1～2h表达量较高；IL-13在72h达到最大值，为对照的30．7倍；IL-17mR—NA的表达量在72h达到最大值，为对照的4．9倍；IL-18mRNA的表达量在12h达到对照的1．9倍。结果表明，SIV感染PBMC后，随着病毒的大量复制，多种炎性细胞因子表达量显著增加。
- 张云张龙现王亚宾李金磊陈雅君崔保安胡慧
- 关键词：猪流感病毒转录时相
- 一种猪传染性胃肠炎病毒毒株
- 本发明公开了一种猪传染性胃肠炎病毒毒株，其特征在于：猪传染性胃肠炎病毒（swine transmissible gastroenteritis virus），CCTCC NO：V201216。本发明的猪传染性胃肠炎病毒灭...
- 胡慧魏战勇崔保安陈雅君张莉娟刘中原寇亚楠
- 文献传递
- 猪传染性胃肠炎病毒HN-2012分离株S基因遗传变异分析及其真核表达研究
- 引言猪传染性胃肠炎(Transmissible gastroenteritis of swine,TGE)是由猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)引起的一种高接触性传染病,主要引起猪呕吐、腹泻和脱水死亡,不同品种和年龄的猪只均...
- 程慧芳陈雅君刘中原寇亚楠崔保安胡慧
- 动物源性肠出血性大肠杆菌O157∶H7及其3个毒力基因的多重PCR快速检测研究被引量：8
- 2013年
- 目的建立快速、特异的分离鉴定大肠杆菌O157∶H7及其3个主要毒力基因(hylA、eaeA和stx2基因)的多重PCR方法。方法根据GenBank公布的大肠杆菌O157∶H7菌体抗原rfbE基因、鞭毛抗原fliC基因、溶血素(hlyA)基因、紧密黏附素(eaeA)基因和志贺样毒素2(stx2)基因为靶基因,设计5对特异性引物,在同一扩增体系中进行PCR,优化反应体系,测定特异性和灵敏度,并进行了临床样品的检测。结果该方法扩增目的基因片段分别为327bp、247bp、494bp、384bp和779bp,特异性和灵敏度均高,细菌纯培养物的检测灵敏度为104cfu/mL。结论初步建立了快速、灵敏、特异的检测肠出血性大肠杆菌O157∶H7及其3个毒力基因的多重PCR方法,可用于临床动物携带大肠杆菌O157∶H7的分子流行病学调查及食品微生物检测。
- 陈雅君王亚宾张莉娟张龙现陈丽颖刘中原申果胡慧
- 关键词：动物源性毒力基因多重PCR
