马金芳
- 作品数：5 被引量：0H指数：0
- 供职机构：复旦大学更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 一种φC31位点特异重组酶突变体、其制备方法及应用
- 本发明属于遗传工程领域，具体涉及一种位点特异重组酶、其制备方法及应用。ΦC31位点特异重组酶已成为哺乳细胞遗传操作的有效工具，但其在哺乳细胞上介导整合位点特异性以及整合效率有待于进一步提高。为此，本发明提供了一种ΦC31...
- 朱焕章辛清婷马金芳刘韶辉唐丽莎彭斯曼余龙
- 文献传递
- 一种位点特异重组酶、其制备方法及应用
- 本发明属于遗传工程领域，具体涉及一种位点特异重组酶、其制备方法及应用。本发明提供了一种新的位点特异重组酶，该位点特异重组酶特异性的识别下列结构式所示脱氧核苷酸序列，在箭头位置裂解所示脱氧核苷酸序列，并将attB识别位点的...
- 朱焕章刘韶辉马金芳辛清婷彭斯曼唐丽莎余龙
- 文献传递
- 人肺癌变过程中的分子遗传学改变
- 人肺癌变过程中的分子遗传学改变肺癌的发生发展是多基因参与、多阶段发生、极其复杂的病理过程。本实验室曾应用比较基因组杂交技术，分析了肺鳞癌组织形态学变化进程中相应的细胞分子遗传学改变。发现癌变进程的不同阶段参与改变的染色体...
- 马金芳
- 关键词：肺癌癌变过程分子遗传学细胞生长增殖
- ΦC31位点特异性整合酶DNA结合功能域的鉴定
- 2010年
- DNA结合功能域的确定是阐明位点特异性重组酶整合机制的关键,而对酶DNA结合功能域进行突变研究是提高酶整合效率和整合特异性的重要方法.为了鉴定ΦC31位点特异性整合酶的DNA结合功能域,依据对ΦC31整合酶序列的生物信息学分析结果,利用PCR和克隆技术在pET22b原核表达载体上构建ΦC31整合酶重组截短突变体表达质粒,将获得的表达质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)菌株扩大培养并用IPTG诱导融合蛋白的表达,经镍柱纯化获得了纯度达90%以上的重组蛋白,分子量也与预期大小一致,Western印迹确定了重组蛋白的特异性.凝胶迁移滞后实验显示野生型以及截短突变体蛋白ΦC311-528、ΦC311-472、ΦC311-413能与细菌附着位点DNAattB和噬菌体附着位点DNAattP结合的条带,而截短突变体ΦC311-353、ΦC311-279、ΦC311-120观察不到相应的结合条带.6个截短突变体质粒在体内重组活性蓝白斑实验中均表现为蓝斑,显示出皆丧失体内重组活性.研究证实,ΦC31整合酶半胱氨酸富集域(第353～413位氨基酸)具有DNA结合的功能,而C末端缬氨酸富集区(第528～613位氨基酸)也与其重组活性相关.这为进一步了解ΦC31整合酶的结构与功能,最终引导其结构进化,提高其特异性和整合效率奠定了基础.
- 辛清婷马金芳王玮刘绍辉李荣秀朱焕章
- 关键词：ΦC31整合酶原核表达和纯化
- 一种ΦC31位点特异重组酶突变体、其制备方法及应用
- 本发明属于遗传工程领域，具体涉及一种位点特异重组酶、其制备方法及应用。ΦC31位点特异重组酶已成为哺乳细胞遗传操作的有效工具，但其在哺乳细胞上介导整合位点特异性以及整合效率有待于进一步提高。为此，本发明提供了一种ΦC31...
- 朱焕章辛清婷马金芳刘韶辉唐丽莎彭斯曼余龙
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