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天府肉鹅IFN-a基因克隆表达及抗病毒活性的研究: 此文对天府肉鹅IFN-α(TFGoIFN-α)基因(GenBank登录号HQ115583)开展了以下系列研究:TFGoIFN-α基因克隆、TFGoIFN-α原核表达、重组蛋白复性、复性蛋白抗病毒活性的研究。　　 1.T...; 高丽芹; 关键词：天府肉鹅原核表达克隆表达抗病毒活性

天府肉鸭IFN-α基因的密码子使用法特征分析被引量：1: 2011年; 密码子简并性特征造成了不同物种密码子使用的偏好性不同,这对外源基因的表达强度有着较大的影响。运用软件对选取的16种IFN-α和天府肉鸭IFN-α基因(EU925650)进行了密码子偏爱性分析。通过进化树的构建结果显示天府肉鸭IFN-α,与北京鸭、河南肉鸭以及绍兴鸭IFN-α的亲缘关系最为接近。通过CAI,ENC,GC3S等数据分析进行了密码子偏爱性特征的分析。结果显示,天府肉鸭IFN-α系统保守基因,与禽类IFN-α基因的密码子使用类似。; 刘菲高丽芹程安春汪铭书韩清林赵婷婷唐卫杰; 关键词：IFN-Α 密码子偏爱性

天府肉鹅IFN-α基因的克隆及生物信息学分析被引量：11: 2010年; 采用RT-PCR方法从天府肉鹅外周血单核细胞中扩增了IFN-α基因;并将上述扩增片段克隆到pMD18-T载体中,构建了重组质粒。用生物信息学软件及在线分析方法对IFN-α基因的核苷酸序列及其推导的氨基酸序列进行了分析,同时与13个物种的IFN-α基因进行了同源性比较。结果表明,成功地克隆了IFN-α基因,该基因与同类水禽(鸭、鹅)的IFN-α基因有90%以上的同源性,在进化树中位于同一分支,研究结果为开发鹅的干扰素制剂奠定了基础。; 刘菲赵婷婷程安春汪铭书韩清林高丽芹唐卫杰; 关键词：干扰素克隆生物信息学

抗鹅细小病毒卵黄IgG的制备及其间接ELISA检测方法的建立被引量：5: 2011年; 采用水稀释-辛酸-硫酸铵法粗提与DEAE50纤维素层析相结合的方法从免疫鹅细小病毒(GPV)的鹅卵内提取鹅卵黄IgG,通过核酸蛋白检测仪和SDS-PAGE测定IgG的浓度和纯度后,制备兔抗鹅IgG酶标抗体;建立了针对GPV的间接ELISA抗体检测方法,确定其最佳工作条件,并对该ELISA的特异性及重复性进行检测;应用该间接ELISA检测了GPV VP3基因疫苗的免疫效果。结果显示,获得的纯化鹅卵黄IgG浓度为10mg/mL,抗体纯度达到94.5%,兔抗鹅IgG的血清琼脂扩散效价约为1∶32;经筛选确定该ELISA的最佳工作条件为:最适抗原包被浓度为20μg/mL,最适血清稀释度为1∶100,酶标抗体的最佳工作浓度为1∶3 000。用建立的间接ELISA检测禽流感病毒、新城疫病毒、传染性支气管炎病毒、传染性法氏囊炎病毒、鸭肝炎病毒、鸭瘟病毒的阳性血清均为阴性,表明该方法特异性强、重复性好。经临床初步应用,能检出GPV VP3基因疫苗产生的抗体,在肌肉注射100μg与200μg基因疫苗的鹅血清中,IgG均从第14天开始上升,并分别在第35、21天达到最大值。表明本试验制备的兔抗鹅IgG酶标抗体具有较好的应用价值。; 刘菲唐卫杰程安春汪铭书赵婷婷韩清林高丽芹; 关键词：纯化间接ELISA

天府肉鹅IFN-α基因克隆表达及抗病毒活性的研究: 此文对天府肉鹅IFN-a （TFGoIFN-a）基因（GenBank登录号HQ115583）开展了以下系列研究：TFGoIFN-a基因克隆、TFGoIFN-a原核表达、重组蛋白复性、复性蛋白抗病毒活性的研究。 1....; 高丽芹; 关键词：复性生物学活性; 文献传递

兔抗鹅IgG酶标抗体的制备及初步应用被引量：2: 2011年; 为了研究兔抗鹅IgG酶标抗体的制备,试验采用水稀释-辛酸-硫酸铵法粗提,透析除盐,DEAEA-50纤维素层析相结合的方法提取鹅卵黄IgG,经核酸蛋白检测仪和SDS-PAGE测定IgG浓度;制备兔抗鹅IgG酶标抗体;利用酶标抗体检测小鹅瘟病毒(GPV)VP3基因疫苗的免疫效果。结果表明,粗提的IgG浓度为10 mg/mL,抗体纯度可达到94.5%;免疫扩散得出兔抗鹅IgG抗血清效价约1∶32,抗体酶标后效价为1∶3000;酶标抗体可以作为检测疫苗效果一种很好的工具。; 刘菲唐卫杰韩清林赵婷婷高丽芹严晓玲; 关键词：酶标

鹅α干扰素基因在COS-7细胞中的瞬时表达及抗病毒功能初探: 2011年; 为了研究鹅α干扰素(goIFN-α)基因的特性和功能,将天府肉鹅的α干扰素基因克隆到pcDNA3.1(+)真核表达载体上,构建重组质粒pcDNA3.1-goIFN-α,脂质体介导将其转入COS-7细胞中;应用间接免疫荧光、酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)和免疫印迹(Western-blot)法检测goIFN-α基因在COS-7细胞中的转录和表达情况,并对COS-7细胞表达上清液进行抗病毒活性检测.结果表明:目的蛋白在转染12 h后就可以被检测出,36 h前目的蛋白在上清液中快速增加,之后增加速度变慢;重组质粒能够在COS-7细胞内得到高效表达,表达的蛋白分子质量为38ku,比预测的分子质量(约21 ku)大;间接免疫荧光显示,细胞内出现黄绿色荧光,胞核附近最亮;表达产物经细胞病变抑制法测定,显示出具有明显的抗猪水泡性口炎病毒(VSV)及小鹅瘟病毒(GPV)的活性.; 刘菲唐卫杰程安春汪铭书赵婷婷高丽芹; 关键词：COS-7细胞免疫印迹间接免疫荧光

天府肉鹅IFN-α成熟肽基因的原核表达及抗病毒活性被引量：2: 2011年; 参照已克隆的天府肉鹅IFN-α完整ORF基因序列设计引物,克隆成熟肽基因,与载体pET32a连接,构建原核表达载体,并在表达菌Rosetta中表达,SDS-PAGE分析鉴定,通过Ni-IMAC亲和层析纯化和稀释透析复性后,采用微量细胞病变抑制法分析测定IFN的抗病毒活性。结果显示,IFN-α成熟肽基因全长486 bp,共编码161个氨基酸;成功构建了原核表达载体pET32a-mGoIFN-α并得到表达,SDS-PAGE和Western-blot分析表达蛋白的大小为38 ku;纯化复性后的表达蛋白抗水泡性口炎病毒(VSV)活性的比活力为5.52×103U/mg,表明重组蛋白具有良好的抗病毒活性。; 刘菲高丽芹程安春汪铭书韩清林赵婷婷唐卫杰严晓玲; 关键词：天府肉鹅 Α干扰素原核表达抗病毒活性水泡性口炎病毒

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高丽芹