高彦茹
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
- 供职机构：暨南大学生命科学技术学院生殖免疫研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 重组猪卵透明带-3α抗原及其抗体的制备
- 2006年
- 目的:制备重组猪卵透明带-3α(rpZP3α)抗原及其抗体供发展避孕疫苗研究。方法:在2L发酵罐中接种毕赤酵母GS115-pZP3α工程菌,高密度发酵表达rpZP3α蛋白,表达的蛋白经螯合镍离子的亲和柱纯化后,用SDS-PAGE和Western blot进行鉴定,以Quantity One软件对rpZP3α进行定量分析。rpZP3α免疫家兔,间接免疫荧光法检测抗血清对rpZP3α和猪卵透明带的抗体反应。IVF试验体外检测抗rpZP3α抗体对猪、小鼠精卵结合的影响作用。结果:工程菌高密度发酵产物经分离纯化后获得能与抗pZP3抗体反应的46kD成分,平均产量为8mg/L,用其免疫家兔获得抗rpZP3α抗血清,间接免疫荧光法分析显示此抗血清能与猪卵透明带反应,产生亮绿荧光。体外精卵结合试验中,随着兔抗rpZP3α抗血清浓度的加大,其对猪、鼠精卵结合的抑制作用也增强。ELISA结果显示抗rpZP3α抗体与rpZP3α蛋白以及天然pZP3蛋白两种抗原反应的强度和趋势基本一致。结论:通过酵母体系制备的rpZP3α及其抗体具有免疫学活性。
- 高彦茹潘善培谢琪璇肖銮娟柯琼
- 关键词：毕赤酵母抗体
- 重组IL-5质粒pVAX1-mIL-5增强卵透明带DNA避孕疫苗黏膜免疫效能被引量：2
- 2006年
- 目的:探讨利用白细胞介素5作为DNA疫苗佐剂增强黏膜免疫反应,提高卵透明带DNA避孕疫苗抗生育效能的可行性。方法:用pVAX1-m IL-5和卵透明带避孕疫苗pVAX1-pZP3α壳聚糖纳米微粒口服免疫雌性小鼠,共设3组,每组6只。A组单独用50μg pVAX1-pZP3α免疫;B组用疫苗加等量的pVAX1-m IL-5质粒为佐剂共免疫;C组为空白对照组。每组动物接受3次免疫(第0、3、6周)。采用ELISA法检测小鼠血清及阴道冲洗液中抗pZP3 IgA抗体。第10周雌雄交配,统计雌鼠怀孕情况;第16周取双侧卵巢作石蜡连续切片,光镜观察卵巢病理学变化。结果:B组全部小鼠血清抗体呈阳性反应,A组只有3只小鼠血清抗体呈阳性反应,且B组小鼠的抗体滴度水平均高于A组小鼠;抗生育率B组小鼠为100%,A组小鼠为50%,C组小鼠为0%,2检验分析结果表明各组间的差异有统计学意义,抗生育效能与交配时抗pZP3 IgA抗体的强度有关;卵巢切片的组织病理学观察结果表明,有抗生育效能的小鼠卵巢组织可观察到各级形态正常的卵泡,无淋巴细胞浸润,与对照组及无抗生育效能的小鼠卵巢结构无差异。结论:利用重组质粒pVAX1-m IL-5与卵透明带DNA疫苗共免疫小鼠,能增强疫苗诱发黏膜免疫反应的能力,提高卵透明带DNA避孕疫苗的抗生育率;没有观察到小鼠卵巢组织结构发生病理学改变。
- 柯琼潘善培谢琪璇肖銮娟何柳媚董志炜高彦茹
- 关键词：白细胞介素5DNA疫苗卵透明带黏膜免疫
- 重组猪卵透明带抗原pZP3α在毕赤酵母中的分泌表达
- 2006年
- 为制备rpZP3a蛋白供发展避孕疫苗研究，将编码天然提取pZP3a上的DNA序列（446—1423）插入至毕赤酵母分泌型表达载体pPICZaA上，重组质粒pPICZaA—pZP3a线性化后通过电穿孔转入毕赤酵母GS115，经抗生素Zeoein筛选获得工程菌。在2L发酵罐中，用甲醇诱导工程菌进行高密度发酵生产rpZP3a。分离浓缩发酵上清液，通过螯合铜离子的亲和柱纯化rpZP3a，用SDS-PAGE和Westernblot进行鉴定，以Quantity One软件对rpZP3a进行定量分析并计算纯度和回收率。用rpZP3a免疫家兔，以ELISA法和间接免疫荧光法检测抗血清对rpZP3a和猪卵透明带的抗体反应。获得了分泌表达rpZP3a的工程菌，其高密度发酵产物经分离纯化后获得能与抗pZP3抗体反应的46kD成分，命名为rpZP3a，平均产量为8mg／L，纯度达92％。回收率为63％。用其免疫家兔获得抗rpZP3a抗血清，ELISA测定显示能与rpZP3a和天然提取pZP3反应。间接免疫荧光法分析显示抗rpZP3a抗血清能与猪卵透明带反应，产生亮绿荧光。用酵母表达系统成功表达了rpZP3a，该蛋白保留有天然pZP3的免疫活性。
- 高彦茹潘善培谢琪璇肖銮娟柯琼李文星史卫卫
- 重组猪卵透明带抗原-3α在毕赤酵母中的分泌表达及活性鉴定
- 透明带(ZP)是包被在卵母细胞外的非细胞结构，是精子与卵细胞识别和结合的部位。体外抗猪ZP3(pZP3)血清能与人ZP发生交叉反应，因此pZP3被用于发展人用避孕疫苗的研究。pZP3由pZP3α和pZP3β组成，其中pZ...
- 高彦茹
- 关键词：巴氏毕赤酵母分泌表达蛋白纯化精卵结合
- 文献传递
