黄亚平
- 作品数：4 被引量：14H指数：2
- 供职机构：四川农业大学更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划长江学者和创新团队发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 内江猪γ干扰素基因的克隆、序列分析及真核表达载体的构建被引量：9
- 2007年
- 将内江猪的外周血淋巴细胞在刀豆素(ConA)的刺激下培养24 h后,提取总RNA,应用一步法RT-PCR扩增γ干扰素(IFN-γ)cDNA,克隆到PMD18-T载体,命名为pMD-N-IFN-γ,测序结果证明克隆的cDNA全长603 bp,其ORF为501bp,编码166个氨基酸,与Genbank公布的IFN-γ比对,核苷酸同源性在99.4%以上,从而证实成功地克隆了内江猪IFN-γ基因。以pMD-N-IFN-γ质粒为模板亚克隆完整ORF区,连接到真核表达质粒pcDNA3.1(+)的EcoRI、XhoI两位点之间,经单双酶切鉴定,成功的构建了IFN-γ真核表达载体pcDNA3.1(+)-N-IFN-γs。
- 黄亚平郭万柱李晓琪
- 关键词：Γ干扰素克隆真核表达载体构建
- 荣昌猪白细胞介素-10(IL-10)基因的克隆及原核表达被引量：5
- 2007年
- 根据GenBank收录的猪白细胞介素-10(PIL-10)设计1对特异性引物,经刀豆蛋白素A(conA)诱导猪淋巴细胞并提取总RNA,RT-PCR方法首次扩增出荣昌猪PIL-10的全长基因。序列分析表明PIL-10全长771 bp。设计1对引物亚克隆荣昌猪IL-10基因成熟蛋白编码基因(477 bp)。利用基因重组技术构建了PET32a(+)-PIL-10融合表达载体,经酶切鉴定,DNA测序证实重组质粒构建正确。将重组质粒转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导,SDS-PAGE,重组菌的RT-PCR,Western blotting结果表明融合表达成功。
- 李晓琪郭万柱黄亚平张丽
- 关键词：荣昌猪白细胞介素-10克隆原核表达
- 荣昌猪、内江猪干扰素γ基因的克隆及原核表达研究
- 根据已发表的猪干扰素γ基因(PoIFN-γ)序列(Genbank 登陆号：S63967)设计合成特异性引物，分别以ConA诱导的荣昌猪、内江猪外周血淋巴细胞总RNA为模板，用一步RT-PCR方法扩增出约600bp的目的片...
- 黄亚平
- 关键词：荣昌猪内江猪IFN-Γ基因基因克隆原核表达
- 文献传递
- 内江猪IL-18基因的克隆及原核表达
- 2007年
- 以ConA刺激的内江猪外周血单核淋巴细胞(PBMC)为模板,采用RT-PCR技术扩增出猪IL-18全长基因,克隆其成熟蛋白的编码基因(471bp)至pMD18-T克隆载体,经双酶切和测序获得阳性克隆。通过EcoRⅠ/XhoⅠ双酶切及连接反应,构建了pET-32a(+)-IL-18原核表达质粒。经双酶切和DNA测序证实重组质粒构建正确,将阳性重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE,Western-blot证实表达出35kD左右的融合蛋白。经实验确定重组内江猪IL-18蛋白诱导表达的最佳条件为IPTG 0.2mmol/L,30℃诱导培养5h。在最佳表达条件下,pIL-18的相对含量为59.6%。内江猪IL-18的原核表达为重组IL-18的纯化及其生物学功能的进一步研究提供了基础。
- 张丽郭万柱李晓琪黄亚平李雯
- 关键词：内江猪白细胞介素18原核表达
