黄志伟
- 作品数：8 被引量：44H指数：2
- 供职机构：中国科学院广州生物医药与健康研究院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 人雌激素相关受体α配体结合域的原核表达载体构建·表达及鉴定被引量：1
- 2008年
- [目的]构建含人雌激素相关受体α配体结合域区段的原核表达载体,并在大肠杆菌表达系统中表达。[方法]用Trizol试剂提取人肺腺癌A549细胞总RNA,逆转录为cDNA;应用PCR扩增人EERα-LBD基因片段,插入表达载体pET-30a-c(+)中;转化大肠杆菌BL2 l(DE3)PLysS,经IPTG诱导后表达并鉴定。[结果]应用PCR方法扩增出约687 bp的基因片段,酶切、纯化、连接至载体后,经测序与GenBank中的一致,表达蛋白相对分子质量约32 kD,纯化后用生物大分子相互作用系统鉴定为目的蛋白。[结论]已成功获得人EERα-LBD融合蛋白,为进一步的研究和应用奠定了基础。
- 王燕飞黄志伟
- 关键词：基因克隆原核表达
- 饥饿状态下HNF4α对MTP的表达调控
- 2010年
- 肝细胞核因子4α(HNF4α)是肝脏中一种重要的转录因子,其参与多个代谢途径的调控.微粒体甘油三酯转运蛋白(MTP)是极低密度脂蛋白装配和分泌过程的限速酶.C57BL/6J小鼠中研究发现,饥饿可以诱导肝细胞MTP基因的表达.在HepG2细胞中进一步证实饥饿可以诱导MTP表达,同时HNF4α表达也显著上升.实验证实MTP是HNF4α的靶基因之一,用腺病毒介导的HNF4α过表达和HNF4α的激动剂均显著提高MTP的表达;HNF4α特异性siRNA抑制HNF4α的表达,MTP的mRNA和蛋白水平相应下调.结果证明,在饥饿状态下可以诱导MTP和HNF4α的表达,MTP的表达量上升是受到HNF4α的转录调控.
- 瞿林兵谭文娟管敏黄志伟陈凌
- 关键词：肝细胞核因子4Α饥饿
- 骨科相关中药对雌激素受体的激活作用
- 2006年
- 目的构建含有雌激素受体配体结合域的哺乳动物细胞杂交基因报告系统,研究骨科相关中药对雌激素受体(ER)活性的影响。方法PCR扩增雌激素受体配体结合域,将配体结合域克隆到真核表达质粒pCMV-BD构建细胞杂交基因报告系统,研究骨科相关中药与雌激素受体的关系;MTT法检测中药对细胞活力的影响。结果成功构建含有雌激素受体配体结合域的哺乳动物细胞杂交基因报告系统,部分中药可以显著提高细胞活性,并对雌激素受体具有激活作用。结论中药治疗骨质疏松可能通过雌激素受体发挥疗效,细胞杂交基因报告系统可以用来研究中药的作用机理。
- 王海彬王军舰黄辉刘琳刘少军徐传毅何伟樊粤光黄志伟
- 关键词：中药雌激素受体HELA细胞配体结合域
- 黄芪注射液对雌激素受体的激活作用研究被引量：32
- 2006年
- 目的构建含有雌激素受体配体结合域的哺乳动物细胞杂交基因报告系统,研究黄芪注射液对雌激素受体(ER)活性的影响。方法PCR扩增雌激素受体配体结合域,将配体结合域克隆到真核表达质粒pCMV-BD构建细胞杂交基因报告系统,研究黄芪注射液与雌激素受体的关系;MTT法检测黄芪注射液对细胞活力的影响。结果成功构建含有雌激素受体配体结合域的哺乳动物细胞杂交基因报告系统,黄芪注射液不能提高细胞活性,但对雌激素受体具有激活作用。结论黄芪注射液可能通过雌激素受体发挥疗效,细胞杂交基因报告系统是研究中药作用机理的手段之一。
- 王海彬王军舰黄辉刘琳刘少军徐传毅何伟樊粤光黄志伟
- 关键词：黄芪注射液雌激素受体HELA细胞配体结合域
- 水翁花提取物的PPARγ配体活性鉴定被引量：1
- 2008年
- [目的]鉴定水翁花提取物2,4-二羟基-6-甲氧基-3,5-二甲基查耳酮(DMC)的PPARγ配体结合活性及其特点。[方法]用GAL4嵌合体报告基因试验检测DMC的PPARγ配体结合活性;用油红O染色法检测DMC对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响;用[3H]-2-脱氧葡萄糖摄取试验检测DMC对3T3-L1脂肪细胞葡萄糖摄取的影响;用荧光实时定量PCR检测经DMC处理的3T3-L1脂肪细胞中PPARγ靶基因的表达情况。[结果]DMC能以剂量依赖型的方式对PPARγ产生激活作用,促进脂肪细胞的分化,显著提高脂肪细胞的葡萄糖摄取率,并且提高脂肪细胞中一些PPARγ靶基因的表达量。[结论]DMC能通过激活PPARγ促进脂肪细胞的葡萄糖摄取。
- 金晓辉魏孝义黄志伟吴东海
- 关键词：PPARΓ葡萄糖摄取
- 利用哺乳动物细胞双杂交体系研究仙灵骨葆对雌激素受体的作用被引量：8
- 2006年
- 目的:利用哺乳动物细胞双杂交体系研究仙灵骨葆对雌激素受体(ERs)活性的影响。方法:通过MTT法检测仙灵骨葆对Hela细胞活力的影响,并构建含有ERs配体结合域(LBD)的质粒pCMV-BD及含有报告基因Lusferase的质粒pFR-Luci,将二者与内标质粒pFRTlaczeo共转染到Hela细胞中,形成Gal4DBD-ERa和ERb LBD细胞杂交报告系统。以染料木苷为阳性对照验证本杂交系统,并利用本系统考察仙灵骨葆对ERs活性的影响。结果:仙灵骨葆在25～2 500 ng·mL-1浓度范围内可以促进HeLa细胞的增殖。10μmol．L-1染料木苷可以显著提高Gal4DBD-ERα和ERβLBD细胞杂交报告系统中ERa和ERb的活性,证明本系统构建成功。仙灵骨葆对ERa具有浓度依赖性的激活作用,2500 ng·mL-1浓度时ERa的相对荧光活性是DMSO对照组的18倍;仙灵骨葆对ERb也具有一定的激活作用,2500 ng·mL-1浓度时ERb的相对荧光活性是DMSO对照组的4倍。结论:本研究成功构建了含有雌激素受体配体结合域的细胞杂交系统,仙灵骨葆对该系统的ERs具有激活作用。
- 王小娟王海彬于静娟杨俊兴黄志伟
- 关键词：仙灵骨葆雌激素受体配体结合域细胞转染
- 通络生骨胶囊对雌激素受体的激活作用被引量：2
- 2006年
- 目的:构建含有雌激素受体配体结合域的哺乳动物细胞杂交基因报告系统,研究通络生骨胶囊对雌激素受体(ER)活性的影响。方法:PCR扩增雌激素受体配体结合域,将配体结合域克隆到真核表达质粒pCMVBD构建细胞杂交基因报告系统,研究通络生骨胶囊与雌激素受体的关系;MTT法检测通络生骨胶囊对细胞活力的影响。结果:成功构建含有雌激素受体配体结合域的哺乳动物细胞杂交基因报告系统,通络生骨胶囊可以显著提高细胞活性,并对雌激素受体具有激活作用。结论:通络生骨胶囊可能通过雌激素受体发挥疗效,细胞杂交基因报告系统可以用来研究中药的作用机理。
- 王海彬王军舰黄辉刘琳刘少军徐传毅何伟樊粤光黄志伟
- 关键词：通络生骨胶囊雌激素受体HELA细胞
- 富含生育三烯酚的棕榈油对动脉粥样硬化小鼠糖代谢的影响
- 2009年
- 目的探讨富含生育三烯酚的棕榈油(TRF)对动脉粥样硬化小鼠糖代谢的影响及其可能的作用机制。方法载脂蛋白E基因缺陷(ApoE-/-)小鼠分为模型对照组、TRF0.05%和0.2%(W/W)组。TRF均匀混于饲料中,各组饲料中添加10%(W/W)的脂肪和0.2%(W/W)的胆固醇诱导动脉粥样硬化的形成。小鼠经TRF处理12和14周后分别进行口服葡萄糖耐量实验(OGTT)和胰岛素耐量实验(ITT);用相应试剂盒检测血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、游离脂肪酸(FFA)和胰岛素的含量;实时荧光定量PCR分析白色脂肪组织(WAT)中过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、脂联素和葡萄糖转运体4(Glut4)的mRNA水平;利用荧光素酶报告系统检测TRF对PPRAγ的激活作用。结果OGTT和ITT实验显示,在非禁食和禁食的情况下,TRF均能够降低ApoE-/-小鼠的血糖,改善胰岛素的敏感性;TRF组小鼠血清中TG和FFA的水平均低于模型对照组;在WAT中,与模型对照组相比,TRF0.2%组上调脂联素mRNA水平(1.73±0.32)倍,TRF0.05%和0.2%组分别增加Glut4mRNA水平(1.89±0.24)和(2.01±0.61)倍,PPARγmRNA水平没有改变。荧光素酶报告系统检测结果显示,TRF对PPARγ-配体结合结构域、PPARγ1和PPARγ2的激活作用分别是溶剂对照组的(2.7±0.2),(6.1±0.6)和(5.3±0.1)倍。结论TRF能够很好地改善动脉粥样硬化小鼠的糖代谢,TRF发挥这些作用的部分原因是通过激活PPARγ来实现的。
- 李凤娟康战方黄志伟
- 关键词：动脉粥样硬化糖代谢过氧化物酶体增殖物激活受体
