黄琴
- 作品数：9 被引量：16H指数：2
- 供职机构：重庆医科大学附属儿童医院更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人MxA基因重组真核载体抗乙型肝炎病毒作用的实验室研究被引量：1
- 2010年
- 目的:研究重组真核载体PcDNA3.1-MxA体外抗HBV的作用,为研究MxA基因(myxovirus-resistant A)治疗慢性HBV感染奠定基础。方法:将构建成功的重组真核载体PcDNA3.1-MxA转染入HepG2.2.15。将HepG2.2.15分为实验组(转染PcDNA3.1-MxA的HepG2.2.15)和对照组(转染PcDNA3.1的HepG2.2.15),应用RT-PCR方法检测两组HepG2.2.15内MxA mRNA(P<0.01),并应用ELISA法检测两组HepG2.2.15内HBsAg、HBeAg的水平。结果:RT-PCR扩增结果显示实验组的MxA mRNA水平均较对照组明显升高,实验组HBsAg、HBeAg水平明显低于对照组(均P<0.01)。结论:转染重组真核载体PcDNA3.1-Mx AHepG2.2.15内MxA蛋白明显抑制了HBV DNA的复制及表达,为进一步研究MxA蛋白体内抗病毒作用提供理论。
- 黄琴彭明利赵瑞秋刘爱平任红许红梅
- 关键词：HEPG2.2.15
- Linc00238在乙型肝炎病毒复制中的调控作用被引量：1
- 2018年
- 目的探讨长链非编码RNA00238(long intergenic non-coding RNA 00238,Linc00238)在乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)复制中的调控作用及其可能机制。方法利用LincRNA芯片比较HBV(+)与HBV(-)肝组织样本中LincRNA表达的差异,根据芯片检测结果,最终选择Linc00238为研究对象。Real-time PCR验证Linc00238表达;利用过表达及RNA干扰,检测Linc00238对HBV复制、转录以及表达的影响。利用双荧光素酶报告系统检测Linc00238对HBV启动子活性的影响。结果LincRNA芯片在HBV(+)组织中共发现13条LincRNA表达发生变化,其中2条上调,11条下调,Real-time PCR进一步证实Linc00238在HBV(+)肝组织样本中的表达明显降低,在HBV稳定表达细胞系HepG2. 2. 15、HepAD38及HBV瞬时转染细胞模型中同样发现Linc00238表达下调,提示HBV感染抑制Linc00238表达。过表达Linc00238后,HBV复制及蛋白表达明显降低(P <0. 05),引入sh00238干扰Linc00238表达后,HBV复制及蛋白表达恢复(P> 0. 05);双荧光素酶报告系统显示:HepG2细胞共转染p HBs-luc、p HBx-luc、p HBc-luc及p CDNA-linc00238后的荧光素酶活性与对照组比较,差异无统计学意义(P> 0. 05)。结论 Linc00238对HBV蛋白及DNA表达具有抑制作用,但不能通过影响HBV启动子活性抑制HBV的表达与复制。
- 黄琴张祯祯刘泉波
- 关键词：乙型肝炎病毒荧光素酶报告基因
- 含人MxA基因重组腺病毒抗乙型肝炎病毒作用的实验室研究
- 目的从健康中国人外周血单个核细胞中克隆人类MxA基因,应用腺病毒载体系统AdEasy system构建重组腺病毒质粒pAdMxA。研究重组腺病毒AdMxA体外抗HBV作用效果,为后续体内实验研究提供实验和理论基础。方法从...
- 许红梅毛国强黄琴赵瑞秋
- 文献传递
- 人抗黏液病毒A基因重组腺病毒体外抗乙型肝炎病毒的作用被引量：1
- 2011年
- 目的:研究人抗黏液病毒A(MxA)基因重组腺病毒AdMxA体外抗乙型病毒性肝炎病毒(HBV)的作用效果。方法:以1倍感染复数(MOI)(1倍MOI感染组)及5倍MOI(5倍MOI感染组)的重组腺病毒AdMxA分别转染HepG2.2.15细胞,以未感染HepG2.2.15细胞为对照(未感染组),利用RT-PCR检测3组HepG2.2.15细胞内MxAmRNA水平表达,并检测3组HepG2.2.15细胞内HBsAg及HBeAg滴度变化。结果:3组HepG2.2.15细胞内MxAmRNA水平比较差异有统计学意义(F=226.294,P<0.001),3组细胞内HBsAg、HBeAg水平比较差异有统计学意义(F值分别为94.519和44.065,P均<0.001),而1MOI及5MOI感染组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:重组腺病毒AdMxA感染HepG2.2.15后其MxAmRNA表达水平明显升高,并能显著抑制HepG2.2.15细胞中HBV的复制及表达,重组腺病毒AdMxA有望成为一种有效的基因治疗方法。
- 毛国强彭明利赵瑞秋黄琴刘爱平任红许红梅
- 关键词：重组腺病毒
- 人MxA基因重组真核载体的构建及鉴定被引量：2
- 2008年
- 目的:应用真核载体PcDNA3.1构建含我国健康人目的基因MxA的重组真核载体PcDNA3.1-MxA。方法:在大肠杆菌JM109中扩增前期已构建的含有目的基因MxA的PAdtrack-MxA和真核载体PcDNA3.1,使用两者共同的限制性内切酶XbaⅠ、NotⅠ进行双酶切,并连接以构建重组真核载体PcDNA3.1-MxA,然后通过氨苄青霉素抗性筛选,双酶切及PCR鉴定,选取鉴定正确的克隆测序,并应用DNAssist 2.0软件对序列与前期获得的基因序列以及已知GenBank中MxA基因序列进行同源性分析。结果:经限制性内切酶、PCR鉴定重组真核载体PcDNA3.1-MxA构建成功。测序结果表明本实验所克隆片段长2012bp,包含人MxA基因序列,核苷酸序列分析表明与前期获得的目的基因序列完全相同,而与GenBank中人MxA基因序列同源性也达99.75%,仅有5个碱基不同,且所编码的氨基酸仅1个发生改变,此氨基酸位于MxA蛋白的非功能区。结论:重组真核载体PcDNA3.1-MxA构建成功,为下一步研究MxA抗乙型肝炎病毒作用奠定了基础。
- 黄琴赵瑞秋刘爱平许红梅
- 关键词：MXAPCDNA3.1
- 人MxA基因重组腺病毒载体的构建及鉴定被引量：4
- 2006年
- 目的:克隆中国人MxA基因并构建含有MxA基因的重组腺病毒载体,为下一步应用其进行抗乙型肝炎基因治疗研究奠定基础。方法:从健康中国人外周血中分离单个核细胞,用Trizol试剂提取总RNA。应用逆转录PCR(RT-PCR)方法,以自行设计的引物扩增全序列MxA基因,应用基因克隆技术将MxA基因克隆到腺病毒穿梭质粒pAdTrack(携带有绿色荧光蛋白基因)中,将线性化的pAdTrack-MxA和腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共同电转化入新鲜感受态大肠杆菌BJ5183中,两者在其中完成同源重组,MxA重组腺病毒质粒经卡那霉素抗性鉴别和PacI酶切确证,验证正确的MxA重组腺病毒线性化转染入293细胞中包装成完整病毒颗粒,观察绿色荧光蛋白(GFP)表达并检测重组腺病毒的病毒滴度。结果:重组腺病毒穿梭质粒pAd-Track-MxA连接成功,测序结果表明克隆的MxA基因序列与GenBank中人MxA基因序列仅有5个核苷酸不同但所编码氨基酸仅1个发生改变,且此氨基酸位于非功能区。MxA重组腺病毒经PacI酶切后产生30kb和4.5kb大小2个片段表明同源重组成功。重组腺病毒经293细胞包装后可观察到绿色荧光,收获病毒并测感染滴度为1.59×108(pfu/ml),具有较高感染效率。结论:我们已成功克隆了中国人的MxA基因,并成功构建重组腺病毒质粒,为进一步应用此基因进行抗乙型肝炎基因治疗研究奠定了基础。
- 毛国强彭明利黄琴赵瑞秋朱朝敏任红许红梅
- 关键词：逆转录基因克隆腺病毒
- 乙型肝炎病毒前C区基因变异的研究进展被引量：5
- 2006年
- 一般认为HBV感染的自然史中,HBeAg阳性表示病毒复制,有传染性,而抗-HBe(+)表示病毒复制静息,是感染恢复期。但目前很多乙型肝炎患者血清病原学检测出现HBeAg(-)、抗-HBe(+),而病毒仍处于复制中的异常情况,且在感染HBV后临床上表现为不同的疾病过程,现在认为这些均与乙型肝炎病毒前C区的基因变异有关。现就乙肝病毒前C区变异的特征及其与临床表现的关系进行综述。
- 黄琴许红梅
- 关键词：肝炎病毒乙型病毒病毒
- 关于MxA蛋白抗病毒作用及其机制的研究进展被引量：2
- 2007年
- MxA蛋白是由Ⅰ型干扰素(IFN-α/β)诱导产生的、属于动态蛋白超家族的一类大分子GTPase,除了具有这一类蛋白的共性外,其最大的、独有的特性在于:对于一系列RNA病毒、双链DNA病毒等有广谱的抗病毒活性.实验还发现:MxA基因启动子区域的多态性很大程度上影响了它的抗病毒作用.本文对MxA蛋白的抗病毒活性、机制以及影响因素研究进展进行综述,以指导临床病毒感染的诊断和治疗.……
- 黄琴许红梅
- 人MxA基因重组腺病毒载体的构建及鉴定
- 目的:克隆中国人MxA基因并构建含有MxA基因的重组腺病毒载体,为下一步应用其进行抗乙型肝炎基因治疗研究奠定基础。方法:从健康中国人外周血中分离单个核细胞,用Trizol试剂提取总 RNA。应用逆转录PCR(RT-PCR...
- 毛国国黄琴赵瑞秋朱朝敏许红梅
- 文献传递
