任俊宇
- 作品数：10 被引量：27H指数：3
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- 外泌体介导的miR-663a通过调控TGF-β1/Smad信号通路影响结肠癌细胞侵袭和迁移
- 2023年
- 目的探讨外泌体介导的miR-663a通过调控转化生长因子(TGF)-β1/Smad信号通路对结肠癌细胞侵袭和迁移的影响。方法从人骨髓间充质干细胞(BMSC)培养液上清中分离外泌体,透射电子显微镜观察外泌体结构,Western印迹检测外泌体中CD63、CD81蛋白表达;将miR-NC、miR-663a mimics分别转染于外泌体,并分组为:EXO组(未转染的外泌体)、EXO-miR-NC组、EXO-miR-663a组,实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测各组外泌体中miR-663a的表达;将上述各组外泌体分别与SW480细胞共培养,并分别命名为SW480+EXO组、SW480+EXO-miR-NC组、SW480+EXO-miR-663a组,在SW480+EXO-miR-663a组中加入TGF-β1/Smad信号通路激活剂SRI-011381,命名为SW480+EXO-miR-663a+SRI组,另取SW480细胞记为SW480组作为对照,激光共聚焦显微镜观察SW480细胞内吞外泌体;Transwell实验检测各组细胞的侵袭与迁移;Western印迹检测各组细胞中TGF-β1、Smad2、Smad3蛋白表达。结果透射电子显微镜观察到BMSC细胞的外泌体均呈现出直径为30~100 nm的囊泡状结构,Western印迹结果表明,CD63和CD81蛋白在BMSC细胞的外泌体中高表达,而在细胞裂解液中几乎不表达;EXO组中miR-663a的表达水平显著高于BMSC细胞(P<0.05);与EXO组和EXO-miR-NC组比较,EXO-miR-663a组中miR-663a的表达水平显著升高(P<0.05);激光共聚焦显微镜结果显示,PKH26标记红色荧光的外泌体主要位于SW480细胞胞质内,并分布在核周围,大部分SW480细胞可见到红色荧光信号;与SW480组比较,SW480+EXO组细胞侵袭数目、迁移数目及TGF-β1、Smad2、Smad3蛋白表达显著降低(P<0.05);与SW480+EXO组和SW480+EXO-miR-NC组比较,SW480+EXO-miR-663a组细胞侵袭数目、迁移数目及TGF-β1、Smad2、Smad3蛋白表达进一步显著降低(P<0.05);SW480+EXO-miR-663a+SRI组细胞侵袭数目、迁移数目及TGF-β1、Smad2、Smad3蛋白表达显著高于SW480+EXO-miR-663a组(P<0.05)。结论外泌体介导的miR-663a通过抑制TGF-β1/Smad信�
- 任俊宇周锐泽雷梓许宁黄凤昌李文亮
- 关键词：外泌体结肠癌细胞侵袭细胞迁移
- 上皮钙黏素1基因启动子甲基化对结肠癌上皮钙黏素和β-连接素表达的影响被引量：6
- 2011年
- 目的探讨上皮钙黏素基因（CDH1）启动子甲基化与结肠癌上皮钙黏素（E—cadherin）及β-连接素（β-catenin）的表达及临床病理特征的关系。方法采用甲基化特异性PCR技术检测68例结肠腺癌组织、癌旁组织及正常黏膜组织中CDH1基因启动子甲基化的状况。采用免疫组织化学法检测E-cadherin及β—catenin蛋白的表达．结果癌旁组织及癌组织中CDH1启动子甲基化的阳性表达分别为32．4％（22／68）、57．4％（39／68），正常组织均为阴性表达（P〈0．05）。E—cadherin在正常组织、癌旁组织及腺癌组织中阳性表达率分别为92．6％、66．2％和44．1％。正常组织中β—catenin均表达于细胞膜上，无胞质和（或）胞核表达。而β—catenin在癌旁组织及癌组织中胞质和（或）胞核表达分别为29．4％和50．0％。CDH1基因启动子甲基化阳性率与E-cadheftn表达则呈负相关（r=-0．312，P=0．01），与β-catenin胞质和（或）胞核表达呈正相关（r=0．309，P=0．018）。CDH1基因启动子甲基化及E-cadherin、β-catenin的异常表达均与结肠癌分化程度及转移密切相关（P〈0．05）。结论CDH1基因启动子甲基化可能是导致结肠癌E-cadheftn与β-catenin异常表达及肿瘤侵袭性增强的重要原因。
- 李臣董坚陈明清李文亮任俊宇陈圣雄李秋恬耿计伟缪延栋杨静
- 关键词：上皮钙黏素Β-连接素结肠肿瘤甲基化
- 神经导向分子Semaphorin 5A在人胃癌侵袭和转移过程中作用的研究
- 2012年
- 目的探讨神经轴突导向分子Semaphorin5A表达与胃癌患者临床病理特征的关系及其在胃癌侵袭和转移过程中的作用。方法使用免疫组织化学方法检测Semaphorin5A在171例不同性别、年龄、组织学类型和TNM分期胃癌患者组织中的表达。使用Western印迹方法检测Semaphorin5A在具转移能力的胃癌细胞株（SGC7901和MKN-45）和无转移能力的胃癌细胞株（SNU-1和AGS）中的表达情况。运用RNA干扰技术构建Semaphorin5A—siRNA表达载体并转染胃癌细胞株SGC7901，建立Semaphorin5A稳定低表达的胃癌细胞株，经细胞粘附实验、划痕实验和Transwell小室侵袭实验检测Semaphorin5A基因沉默后对胃癌细胞粘附、运动和侵袭的影响。结果Semaphorin5A表达水平与胃癌分化程度（x2=6．32，P=0．01）、胃癌淋巴结转移（x2=7．68，P=0．01）和远处转移（x2=13．6，P=0．00）有关，与患者年龄（x2=0．21，P=0．79）、性别（x2=1．79，P=0．15）和胃癌浸润深度无关（x2=1．34，P=0．55）。SGC7901和MKN-45细胞株中Semaphorin5A的表达水平明显高于SNU一1和AGS细胞株（P〈0．01）。Semaphorin5A基因表达沉默可抑制胃癌细胞的粘附、运动和侵袭能力。结论Semaphorin5A可能通过提高胃癌细胞粘附、运动和侵袭能力，在胃癌侵袭和转移过程中发挥促进作用。
- 潘国庆张翔凌任俊宇陆建波付红梅
- 关键词：RNA干扰肿瘤浸润肿瘤转移细胞黏附
- 大蒜素对诱癌Wister鼠模型腺窝异常病灶产生的影响分析被引量：1
- 2014年
- 目的探讨大蒜素对Wister鼠模型中腺窝异常病灶(abnormal crypt focus,ACF)的影响。方法 60只Wister大鼠,按照20mg/kg皮下注射二甲肼(dimethylhydrazine,DMH),每周1次,连续喂养18周。随机分为大蒜素组和非大蒜素组,将每组分为3批,分别在开始用药后8周、16周与24周分别处死大鼠,每批10只,美兰染色后镜片下观察大肠组织。结果大肠被均等分为10份进行观察,ACF大部分分布于中段和远端,大约在50%~80%处。非大蒜素组的基本情况:8周ACF平均(63.97±1.22)个/只,16周ACF平均(83.97±1.13)个/只,24周ACF平均(69.33±2.01)个/只;大蒜素组的基本情况:8周ACF平均(9.4±1.12)个/只,16周ACF平均(7.17±1.33)个/只,24周ACF平均(4.97±1.23)个/只。非大蒜素组ACF的发生情况显著高于大蒜素组,2组ACF发生率和数量差异有统计学意义(χ2=15.88,P<0.01)。结论大蒜素可以明显降低Wister大鼠腺窝异常病灶的发生数量,在一定程度上降低直肠癌的发生率,起到预防的作用。
- 黄鉴珠珠李文亮周锐泽任俊宇董坚
- 关键词：大蒜素直肠癌
- miRNA-210对人乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响被引量：9
- 2013年
- 目的:探讨miRNA-210(miR-210)在人乳腺癌组织中的表达及其对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、迁移和侵袭的影响。方法:收集2011年10月至2012年6月期间昆明医科大学第一附属医院20例乳腺癌患者组织标本,real-time PCR检测乳腺癌组织和癌旁组织以及乳腺癌细胞MDA-MB-231和正常乳腺细胞MCF-10a中miR-210的表达。采用Lipofectami-neTM2000将miR-210 inhibitor转染至MDA-MB-231细胞中,通过荧光显微镜检测miR-210的转染效率,MTT和软琼脂克隆形成实验检测MDA-MB-231细胞的增殖,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,Transwell法检测细胞的迁移、侵袭能力。结果:miR-210在乳腺癌组织和MDA-MB-231细胞中的表达水平均显著高于癌旁组织和正常乳腺细胞(P<0.01)。miR-210 inhibitor成功转染MDA-MB-231细胞,转染效率为(88.29±2.98)%,转染miR-210 inhibitor后MDA-MB-231细胞的增殖和克隆形成能力明显减弱(P<0.05),被阻滞于G0/G1期的细胞数明显增多[(64.23±3.12)%vs(55.53±0.96)%,P<0.01],凋亡细胞比例也显著增加[(31.90±3.05)%vs(15.98±0.63)%,P<0.01],细胞的迁移[(291.00±43.12)vs(1137.38±83.49)个,P<0.01]、侵袭[(131.63±32.01)vs(647.88±31.20)个,P<0.01]均受到明显抑制。结论:miR-210在乳腺癌组织和细胞中过表达,转染miR-210 inhibitor后乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖、迁移和侵袭能力明显减弱。
- 张楠李少遊巩雅宁任俊宇田晰晰董坚
- 关键词：乳腺癌MDA-MB-231MIRNA增殖
- MicroRNA-183在结直肠癌发病中的调节作用
- 目的： 寻找在结直肠癌中表达异常且相对稳定的miRNA,并结合生物信息学手段预测其与结直肠癌发病相关的靶基因,初步验证miRNA对其靶基因的调控作用。为结直肠癌的早期诊断及治疗提供新的策略和思路。 方法： ...
- 任俊宇
- 关键词：结直肠癌PDCD4
- 文献传递
- 神经导向分子Semaphorin 5A在人胃癌形成过程中作用的研究被引量：2
- 2012年
- 目的:检测神经导向分子Semaphorin 5A在胃癌组织中表达,并探讨其在胃癌发生过程中的功能作用。方法:使用反转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测Semaphorin 5A在不同胃癌细胞系中的表达,使用Real-time RT-PCR和蛋白质印迹法检测Semaphorin 5A在30例胃癌组织和对应的胃黏膜组织中的表达;采用RNA干扰技术建立稳定Semaphor-in 5A表达抑制胃癌细胞系,使用MTT法、软琼脂克隆形成实验和流式细胞仪分别检测Semaphorin 5A基因沉默后对胃癌细胞增殖、生长和凋亡的影响。结果:Semaphorin 5AmRNA在不同胃癌细胞系中高表达,Semaphorin 5A在30例胃癌组织中的表达水平明显高于对应的正常胃黏膜组织,P<0.05;Semaphorin 5A表达沉默后能够抑制胃癌细胞的增殖、克隆性生长和促进胃癌细胞的凋亡。结论:Semaphorin 5A在胃癌组织中高表达,通过增强胃癌细胞的增殖、克隆性生长能力和抑制胃癌细胞的凋亡在胃癌的发生过程中发挥着重要作用。
- 潘国庆张翔凌任俊宇付红梅陆建波
- 关键词：胃肿瘤RNAI胃癌发生细胞增殖
- 微小RNA-26a对结肠癌细胞SW480的侵袭和转移的影响被引量：3
- 2020年
- 目的探讨miR-26a对结肠癌细胞SW480的侵袭和转移的影响。方法将结肠癌细胞SW480分为3组:对照组,miR-26a mimics组和miR-26a inhibitor组。miR-26a inhibitor组加入miR-26a inhibitor(100 mol·L^-1),miR-26a mimics组加入miR-26a mimics(100 mol·L^-1),对照组加入阴性对照无关序列(100 mol·L^-1),培养24 h。用细胞增殖检测试剂盒法检测细胞增殖活力,用Transwell实验检测细胞侵袭能力,用划痕实验检测细胞迁移能力。结果对照组、miR-26a mimics组和miR-26a inhibitor组于48 h细胞增殖能力(OD值)分别为0.48±0.08,0.67±0.09和0.31±0.05;这3组的侵袭能力(细胞通过matrigel基质胶数量)分别为243±17,356±34和112±11;这3组细胞迁移率分别为(56.78±4.39)%,(87.28±4.78)%和(35.49±4.21)%。miR-26a mimics组和miR-26a inhibitor组与对照组比较,上述指标的差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论miR-26a能促进结肠癌细胞SW480侵袭和转移。
- 任俊宇黄凤昌杨军许宁周锐泽李文亮
- 关键词：结肠癌细胞SW480增殖
- 遗传性非息肉性大肠癌生物标志物的血清miRNAs的筛选被引量：3
- 2013年
- 目的:应用microRNA(miRNA)芯片筛选及qRT-PCR技术检测可作为遗传性非息肉性大肠癌生物标志物的血清miRNAs.方法:选取4个遗传性非息肉性大肠癌患者及3个无家族史正常人的血清miRNAs进行miRNA芯片检测,再用q-PCR方法对于芯片结果进行验证.结果:miRNA芯片筛查出57个上调及30个下调miRNAs,在这些差异性表达的miRNAs中选出8个较为理想的miRNAs作进一步研究,运用3个靶基因预测软件预测靶基因后取交集,得到294个靶基因,均是属于mir-20a-5p,mir-548b-5p和mir-548as-3p的靶基因.用qPCR的方法在标本中进行验证发现mir-548as-3p的表达情况符合芯片结果-在遗传性非息肉性大肠癌患者血清中表达上调.结论:血清miRNAs在遗传性非息肉性大肠癌患者中的差异性表达,mir-548as-3p可能为遗传性非息肉性大肠癌非侵入性的生物标志物.
- 田晰晰珠珠黄鉴任俊宇王跃张楠陈明清董坚
- 关键词：遗传性非息肉性大肠癌生物标志物
- 结肠癌细胞CDH1基因启动子甲基化对E-上皮钙黏素和β-连接素表达的调控作用被引量：3
- 2011年
- 目的观察结肠癌细胞中上皮钙黏素基因（CDH1）启动子甲基化对上皮钙黏素（E—cadherin）和β-连接素（β—catenin）表达的影响。方法通过甲基化特异性PCR（MSP）、逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测DNA甲基化抑制剂5-氮-2′-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）干预前后人结肠癌HT-29细胞株CDH1基因启动子甲基化状态及E—cadherin mRNA的改变，并运用免疫荧光标记及激光共聚焦观察E—cadherin和β-catenin在细胞内的表达及分布。结果（1）HT-29细胞在用药前CDH1基因启动子甲基化扩增阳性，非甲基化扩增阴性，用5-Aza-CdR处理后CDH1基因启动子甲基化扩增阴性，非甲基化扩增阳性；（2）5-Aza—CdR处理前细胞RT—PCR不能扩增出E—cadherin mRNA特异性条带，5-Aza—CdR处理后则可检测到E—cadherinmRNA转录，且mRNA水平与药物的浓度呈正相关，平均灰度比值1μmol／L时为0．491±0．011，2μmol／L时为0．568±0．013（P〈0．05：（3）5-Aza-CdR处理前细胞未见E-cadherin表达，13-catenin主要表达于细胞质及细胞核中，5-Aza—CdR处理后在细胞膜可见E—cadherin及-catenin表达。且随着5-Aza—CdR诱导E-cadherin的表达，β-catenin在细胞膜的分布增加，而在细胞质及细胞核的分布明显减少。免疫荧光双重染色显示β-catenin胞膜分布与E—cadherin一致。结论CDH1基因启动子甲基化可能是导致结肠癌细胞E—cadherin表达缺失及β—catenin异位分布的重要因素。
- 李臣任俊宇洪敏李少遂刘为青高嫦娥陈圣雄周华华陈明清董坚
- 关键词：上皮钙黏素Β-连接素结肠癌甲基化
