侯俊
- 作品数：106 被引量：229H指数：7
- 供职机构：解放军第三〇二医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金军队“十一五”科技攻关课题首都医学发展科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学经济管理更多>>
- 永生化人肝细胞的初步研究：hTERT真核表达质粒的构建和鉴定
- 目的:构建人端粒酶逆转录酶(hTERT)真核表达质粒,为 hTERT 稳定转染细胞提供简单、快速的检测方法,并为建立永生化人肝细胞系奠定基础。方法:PCR 扩增 hTERT 基因和绿色荧光蛋白(GFP)基因, 利用基因重...
- 赵擎孙颖胡燕侯俊游绍莉赵军辛绍杰貌盼勇
- 关键词：人端粒酶逆转录酶质粒构建真核表达
- 文献传递
- HCV特异性IgM抗体与HCV RNA及其与肝病活动的相关性研究
- 2000年
- 侯俊何红霞貌盼勇洪世雯杨松涛付体权
- 关键词：肝疾病丙型肝炎病毒RNA
- 肠道病毒71型强神经毒分离株VP1蛋白的表达鉴定
- 胡燕白冰珂沈宏辉侯俊高蓉罗声栋貌盼勇
- 文献传递
- HIV核心抗原p24原核系统的高效表达、纯化及活性鉴定被引量：2
- 2005年
- 目的 在原核表达系统中对HIVp2 4抗原基因进行克隆和高效表达、纯化并鉴定其活性。方法 利用PCR技术从HIV-1全基因质粒 (B2N)中扩增p2 4抗原基因 ,并克隆入T载体中。通过酶切消化后连接到表达载体pRSET上 ,用此连接产物转化大肠埃希菌BL2 1,经IPTG诱导 ,表达p2 4抗原。利用固定化金属离子 (Ni2 + )配体亲和层析技术从表达蛋白中纯化目的蛋白。并运用双酶切技术、SDS-PAGE电泳、WesternBlot(WB)及ELISA法分别对插入基因片段的正确性、表达产物的活性及特异性进行检测。结果 PCR产物约为 6 90bp ,与预期p2 4抗原全基因片段大小一致。重组质粒T-p2 4和pRSET-p2 4经BamHⅠ和HindⅢ双酶切 ,其插入的外源基因片段均为 6 90bp。将纯化前与纯化后的蛋白作SDS PAGE电泳 ,均可见一条约 2 4× 10 3的外源基因表达带 ,与计算的相对分子质量相符。经WB和ELISA试验 ,证明基因工程表达的p2 4抗原具有较高的特异性及活性。结论 成功构建了HIVp2 4表达载体pRSET-p2 4 ,并在原核细胞中高效表达 。
- 侯俊貌盼勇洪世雯胡燕杨健洋沈宏辉朱雷
- 关键词：HIV核心抗原纯化原核系统外源基因表达
- 包涵体蛋白3种纯化方法的比较被引量：9
- 2016年
- 目的比较3种纯化方法对表达的肠道病毒71型(EV71)VP1区包涵体蛋白的纯化效果。方法分别用差速离心法、固定化金属离子亲和层析(IMAC)及不同浓度饱和硫酸氨沉淀法3种包涵体蛋白纯化法对原核表达EV71 VP1包涵体蛋白进行纯化,蛋白垂直(SDS-PAGE)电泳检测蛋白纯化效果。结果差速离心法可以进行大批量表达蛋白纯化,纯化效果较好,但存在蛋白损失较多,且纯化蛋白不能反复冻融的问题。IMAC柱纯化获得的蛋白纯度较高,且蛋白性状稳定,但仍存在纯化蛋白量较少的问题。饱和硫酸氨沉淀纯化法无法获得纯度较高的包涵体蛋白。结论差速离心法可用于大批量蛋白纯化,纯化蛋白应避免反复冻融,可小量分装冻存后备用。IMAC柱纯化可获得纯度较高且性状相对稳定的纯化蛋白,其在相应抗体检测方法学的建立及疫苗制备方面均有广泛用途。饱和硫酸氨法只适用于表达蛋白的初步浓缩纯化。
- 柴燕涛姜棋予谢国明胡燕邬顺全杨锐创貌盼勇侯俊
- 关键词：包涵体蛋白蛋白纯化
- 检测HIV-1/2型抗体的双抗原夹心方法的建立及其试剂盒的研制
- 2001年
- 侯俊何红霞貌盼勇洪世雯胡燕沈宏辉杨松涛
- 关键词：抗体试剂盒
- 人源单克隆抗人免疫缺陷病毒1型抗体Fab段基因的获得被引量：2
- 2000年
- 应用噬菌体抗体库技术有效地筛选出了多株抗HIV 1人源单克隆抗体。以逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)从HIV 1感染者外周血淋巴细胞中扩增抗体轻重链可变区基因 ,插入载体 pCOMB3 ,建立噬菌体抗体库。分别以HIV 1gp41、gp12 0和 gp16 0为固相抗原 ,经过多轮筛选 ,从中获得了多株抗HIV 1gp41、gp12 0和 gp16 0的单克隆抗体Fab段基因。抗HIV特异性噬菌体抗体随抗体库的筛选高度富集 ,抗gp41阳性克隆率由第 2轮的 5 %增加到第6轮的 87%。间接ELISA、竞争抑制ELISA和Dotblot检测结果表明 ,获得的抗HIV 1噬菌体抗体具有较高抗原结合活性和特异性。研究结果显示 :应用该技术获得人源抗病毒基因工程单克隆抗体既省时省力 ,又可获得任意目的单抗基因 ,且易获得高亲和力的抗体。
- 何红霞貌盼勇侯俊朱雷洪世雯王琰
- 关键词：噬菌体抗体库人源单克隆抗体
- 高尔基体蛋白73在原发性肝癌预后判断中的应用价值被引量：5
- 2014年
- 目的 探讨血清高尔基体蛋白73（GP73）在原发性肝癌预后判断中的价值.方法 用酶联免疫吸附试验定量检测血清GP73,分别测定63例原发性肝癌患者术前、术后（2周、4周）以及术后3 ～12个月复发的21例重新入院患者的GP73的浓度.结果 原发性肝癌患者术前GP73平均水平为240.5±81.4 ng/ml,手术治疗后2周GP73平均浓度为114.4±34.1 ng/ml,治疗后4周平均浓度为57.6±23.3 ng/ml,治疗前浓度显著高于治疗后浓度（P＜0.05）.肝癌复发的患者重入院后GP73浓度（181.2±72.4 ng/ml）明显高于GP73.术后的浓度（P＜0.05）.结论 GP73作为一个新型肝癌血清标记物在判断肝癌预后中具有较好的应用价值.
- 刘爱霞刘佳戴亮王卫东赵静陈霖徐军侯俊李伯安
- 关键词：高尔基体预后肝肿瘤
- 表达HBV preS2S基因重组MVA假病毒颗粒的构建及抗原性鉴定被引量：2
- 2008年
- 目的构建携带HBVpreS2S基因的重组MVA假病毒颗粒,评价其抗原性。方法将HBVpreS2S基因通过基因重组构建入穿梭载体pSC11,得到质粒pSC11-preS2S,将此质粒转染MVA病毒通过同源重组得到MVA-preS2S,通过免疫印迹法鉴定其抗原性。结果利用基因测序,PCR鉴定证实所得假病毒颗粒可以表达HBVpreS2S基因,并且具有良好的抗原性,经过9次传代得到单克隆重组病毒。结论本试验成功地构建了表达HBVpreS2S基因的重组MVA假病毒颗粒MVA-preS2S,为基因治疗HBV慢性感染做了一项实验性奠基工作。
- 栾翔凌刘素君胡燕侯俊沈宏辉王志杰辛绍杰貌盼勇
- 关键词：痘苗病毒HBV基因治疗
- 化学发光法检测抗-HEV IgG方法的建立
- 2014年
- 目的 建立化学发光检测抗HEV IgG方法,用于HEV感染的实验室诊断及流行病学调查,为试剂盒研制打下基础.方法 以HEV重组抗原包被微孑孔板,辣根过氧化物酶标记的单克隆抗人IgG抗体为第二抗体,建立抗HEV IgG的化学发光检测方法,评价其灵敏度、特异性、精密性等指标.检测患者血清中抗HEV IgG抗体并与第三方试剂比较.结果 建立了检测抗HEV IgG的化学发光方法,检测500例临床患者标本并与对照试剂盒对比,阳性符合率为99.32％,阴性符合率为98.58％,总符合率98.80％,其灵敏度、特异性、重复性均达到设计要求.结论 建立了化学发光检测血清中抗-HEV IgG的方法,具有敏感性高、特异性强、操作简便等特点,适用于戊型肝炎的临床诊断和流行病学调查.
- 张敏娜胡燕侯俊高蓉史素娟王保君欧卫军杨永平貌盼勇
- 关键词：化学发光
