侯利华
- 作品数：86 被引量：127H指数：6
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 人干扰素INF-ω在植物乳杆菌中的表达与鉴定
- 2009年
- 目的以植物乳杆菌为载体,将干扰素IFN-ω基因导入植物乳杆菌内,作为先期探索和尝试,构建重组阴道微生态菌株。方法采用抗菌肽诱导双组分调节表达系统,以细菌素Sakacin A为诱导物、sapK和sapR为双组分调节基因的穿梭质粒pSIP300,将干扰素ω基因置于pSIP300上,构成重组质粒pSIP300-ω,在大肠埃希菌DH5α中进行扩增,分别电转化3株植物乳杆菌:Lacbacillus plantarum1.3,Lacbacillus plantarum1.11,Lacbacillusplantarum14917。结果与结论经SDS-PAGE与ELISA检测证实,成功构建了能够表达IFN-ω重组植物乳杆菌Lacbacillus plantarum1.11/pSIP300-ω。
- 曹晓梅张虎成刘树玲侯利华付玲陈薇
- 关键词：植物乳杆菌
- 丙型肝炎病毒部分非结构区蛋白B细胞表位的研究
- 丙型肝炎病毒（HCV）是导致非胃肠道传播的肝炎的主要致病原.为单股正链RNA病毒,3.000多个氨基酸的前体蛋白切割后分为结构区与非结构区蛋白,HCV的非结构蛋白在病毒的复制及成熟中发挥重要的作用.如NS3的丝氨酸蛋白酶...
- 侯利华
- 关键词：丙型肝炎病毒B细胞表位噬菌体肽库
- 文献传递
- 前列腺干细胞抗原与热休克蛋白70羧基端结构域的融合表达及纯化
- 2012年
- 目的构建前列腺干细胞抗原(prostate stem cell antigen,PSCA)及热休克蛋白70(heat-shock protein,HSP70)羧基端结构域的重组表达质粒,对重组融合蛋白进行诱导、表达及纯化,为肿瘤疫苗的研究奠定基础。方法克隆人HSP70羧基端基因及PSCA基因,构建重组表达载体pET21-PSCA-HSPC,重组融合蛋白经(isopropyl-β-D-thiogalactoside,IPTG)进行诱导表达,利用单克隆抗体进行Western blot鉴定,最后进行蛋白纯化。结果成功构建了重组表达质粒pET21-PSCA-HSPC;SDS-PAGE结果显示目的蛋白以可溶性形式存在,经镍柱亲和层析、苯基柱疏水及凝胶过滤柱纯化后,重组融合蛋白纯度在95%以上。结论该研究成功实现了PSCA与HSP70羧基端结构域的可溶性表达。
- 董磊张晓鹏易绍琼任军侯利华付玲于长明陈薇
- 关键词：前列腺干细胞抗原热休克蛋白
- 特异靶向AML1-ETO+细胞的渗透肽的表达纯化与筛选
- 细胞渗透肽(cell penetrating proteins,CPP)是一类由5～30个氨基酸组成的短肽,具有特殊的细胞膜穿透作用。研究发现其能够将药物大分子物质转运到细胞内,在细胞生物学和细胞免疫学,尤其是在药物开发...
- 赵陶然董韵竹张金龙吴诗坡侯利华赵兴卉徐俊杰陈薇
- 关键词：AML1-ETO白血病蛋白表达
- 文献传递
- 基于活体成像的表达人PSCA抗原的小鼠肿瘤模型的建立被引量：1
- 2011年
- 目的:探讨并建立可供药物评价或生物学功能研究的表达人PSCA抗原的荧光素酶小鼠肿瘤模型。方法:克隆人PSCA基因及荧光素酶基因luc,构建真核表达质粒pcDNA-PSCA及pcDNA-luc,共转染RM-1细胞株;照度计检测转染细胞的荧光素酶活性,RT-PCR及流式细胞术检测PSCA的表达,筛选出共表达荧光素酶及人PSCA的RM-PSCA/luc细胞株;将RM-PSCA/luc细胞接种C57BL/6小鼠,观察所致肿瘤的生长情况及小鼠存活状况,并对小鼠进行活体成像检测Luc的表达;采用免疫组织化学染色方法检测人PSCA在小鼠肿瘤组织中的表达。结果:筛选到了稳定共表达Luc及人PSCA抗原的RM-PSCA/luc细胞,接种实验小鼠全部成瘤,肿瘤生长迅速,小鼠平均存活38天;转染荧光素酶基因的肿瘤细胞生物特性稳定,活体成像仪检测到转染荧光素酶细胞在小鼠体内活体成像,荧光素酶表达活性的强弱能够反映肿瘤大小;免疫组织化学染色方法检测到小鼠肿瘤组织PSCA的表达。结论:成功构建了可用于活体成像表达人PSCA抗原的小鼠肿瘤模型,为相关肿瘤药物及疫苗的研发奠定基础。
- 董磊张晓鹏易绍琼毛亚丽于婷侯利华付玲于长明陈薇
- 关键词：前列腺干细胞抗原肿瘤模型
- 乙肝核心蛋白与结核抗原或抗原片段的重组融合蛋白及用途
- 本发明涉及乙肝核心蛋白和结核分枝杆菌抗原或抗原片段所构成的一种或数种重组融合蛋白，所述的结核抗原或抗原片段以单抗原或抗原片段，或者组合在一起的多种抗原或抗原片段的形式插入到乙肝核心蛋白的相同或不同的许可位点。本发明所述的...
- 陈薇徐俊杰殷瑛张军董大勇李浩侯利华付玲
- 文献传递
- 杀灭芽孢杆菌芽孢的复合制剂
- 本发明公开了一种杀灭芽孢杆菌芽孢的复合制剂。本发明提供的复合制剂，其活性成分是乳酸链球菌素和L-丙氨酸。应用本发明的复合制剂，在常温条件下，在15min内，对芽孢的杀灭率可达99.37％，比常规试剂乳酸链球菌素提高了约5...
- 陈薇李曼侯利华曹晓梅付玲李建民张晓鹏董大勇宋小红
- 文献传递
- 利用SEC-HPLC测定鼠神经生长因子的纯度被引量：1
- 2013年
- 目的：建立检测鼠神经生长因子（mNGF）纯度的分子排阻高效液相色谱法（SEC-HPLC）。方法：利用TSK G3000 SWXL分析柱和Waters 2695/2487高效液相色谱系统检测mNGF标准品纯度，并对方法的专属性、线性、重复性、中间精密度、检测限及耐用性等指标进行评估。结果：空白溶剂在mNGF积分范围内无特异峰出现；样品浓度与吸收峰之间线性回归系数R2=0.9998；6次进样峰面积相对标准偏差（RSD）为1.18%；中间精密度分析RSD为0.45%；检测限为0.2μg；耐用性实验表明磷酸盐浓度在0.2~0.3 mol/L之间变动对检测结果无影响。结论：各项指标符合规定，SEC-HPLC法可用于检测mNGF的纯度。
- 张金龙任军付玲宋晓红陈俭勤吕鹏侯利华
- 关键词：鼠神经生长因子纯度
- 一种新的丙型肝炎病毒单链丝氨酸蛋白酶基因的构建、表达与鉴定
- 2002年
- 根据丙型肝炎病毒 (HCV)丝氨酸蛋白酶晶体结构特点 ,设计并构建了一种新的单链型丝氨酸蛋白酶分子 .该分子由辅因子NS4A的核心序列、柔性连接子GSGS和NS3丝氨酸蛋白酶结构域组成 .利用设计的 3条引物 ,通过 2轮PCR获得单链丝氨酸蛋白酶基因 ,插入原核表达载体pQE30中 ,转化大肠杆菌M15 ,获得重组克隆 .经低剂量诱导和低温培养 ,目的基因获得高水平可溶表达 .以金属螯合层析法纯化的重组蛋白纯度达 95 %以上 .间接ELISA法检测 98份血清证实 ,该蛋白具有良好的抗原性和特异性 ;以重组蛋白底物NS5ab和单链丝氨酸蛋白酶建立了简便、实用的丝氨酸蛋白酶体外活性检测系统 ;以该系统观察了PMSF和EDTA对蛋白酶活性的影响 .结果表明 ,PMSF能够抑制蛋白酶的酶切活性 ,而EDTA不能抑制酶的活性 .单链型HCV丝氨酸蛋白酶的成功表达以及体外活性检测系统的建立 ,为丝氨酸蛋白酶抑制剂的研制奠定了物质基础 .
- 杜桂鑫侯利华陈万荣刘树玲张永国孙大铭王海涛
- 关键词：丙型肝炎病毒基因表达
- 鼠疫抗原LcrV在乳酸乳球菌中的表达与鉴定被引量：3
- 2010年
- 目的以乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)为载体,将鼠疫抗原LcrV基因导入乳酸乳球菌内,构建重组肠道微生态菌株,作为黏膜免疫疫苗的先期探索和尝试。方法采用酸诱导P170启动子,乳酸乳球菌本身的SP310mut2信号肽,将鼠疫杆菌LcrV抗原结构基因克隆到质粒pAM J397上,电转化感受态Lactococcus lactis PSM565。结果经重组子PCR鉴定,SDS-PAGE检测,W estern-b lot鉴定,在Lactococcus lactisPSM565/pAM J397-V培养基上清中获得了38 kD的鼠疫抗原LcrV蛋白。结论在乳酸乳球菌中成功表达了鼠疫V抗原,为下一步鼠疫黏膜疫苗的研制打下基础。
- 曹晓梅张虎成李曼刘树玲侯利华付玲陈薇
- 关键词：乳酸乳球菌黏膜免疫
