冉多良
- 作品数：243 被引量：839H指数：14
- 供职机构：新疆农业大学动物医学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技支撑计划新疆维吾尔自治区重大科技专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 牛病毒性腹泻病毒内标双重TaqMan荧光RT-PCR方法的建立及初步应用被引量：1
- 2014年
- 为建立牛病毒性腹泻病毒（BVDV）内标双重TaqMan荧光RT-PCR方法,本研究根据BVDV 5＇-UTR区序列设计引物和荧光标记探针,通过重叠延伸PCR（SOE-PCR）扩增获得内标模板,经体外转录得到可以作为内标物的cRNA。经反应条件的优化,建立了BVDV内标双重TaqMan荧光RT-PCR检测体系。结果表明：当cRNA浓度为103拷贝/μL时,二者均有较好的扩增曲线;该方法对I型BVDV的检测灵敏度为0.25 TCID50,对II型BVDV的检测灵敏度为2.5 TCID50;利用该方法对猪瘟病毒等其他相关核酸的检测结果均为阴性;重复性检测Ct值变异系数为0.54~4.73。对506份临床样品检测,结果有23份样品为阳性,阳性样品检出数量和编号与不含内标的单一荧光RT-PCR方法完全一致,表明该方法可以用来对BVDV进行准确、快速检测,并且可以对检测结果进行质量监控。
- 季新成史茜郭春娟王科珂冉多良
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒内标
- 不同免疫刺激剂的安全性及免疫增强特性评价
- 2024年
- 本研究旨在评价不同免疫刺激剂的安全性及免疫增强特性,为后续亚单位疫苗的制备提供佐剂选择依据。本研究利用不同免疫刺激剂皮下免疫小鼠,免疫两次,间隔1周,最后1次免疫后的第7天处死小鼠,观察小鼠脏器大体病变;利用ELISA方法检测小鼠血清中细胞因子的变化;取注射部位及主要脏器进行组织病理学观察。研究结果表明,免疫刺激剂壳聚糖和HMT13均引起促炎细胞因子IFN-γ显著增加,HMT13和ISA201会引起大量Ig G的产生;此外,壳聚糖刺激还可引起大量IL-17的分泌。本研究通过观察小鼠主要脏器及注射部位的大体和组织病理学变化以及检测小鼠血清中细胞因子的变化等方法评价了免疫刺激剂Alum、壳聚糖、α-半乳糖基神经酰胺、HMT13、ISA201的安全性及免疫增强特性,为后续亚单位疫苗佐剂的选择提供了数据支持及参考依据。
- 周梦婷宋银娟李娜冯雅茹冉多良李斌储岳峰
- 关键词：免疫刺激剂安全性
- 牛病毒性腹泻病毒E0基因原核表达载体的构建及表达被引量：2
- 2012年
- 采用RT-PCR方法,利用牛病毒性腹泻病毒(BVDV)C24V株接种MDBK细胞,提取病毒RNA,扩增出BVDV-E0基因,将所得片段与pET-28a表达载体连接,转化至BL-21大肠杆菌中,筛选阳性克隆,鉴定后证明pET-28a-E0原核表达载体构建成功。经IPTG诱导后收集菌体进行SDS-PAGE和Western-blot鉴定,鉴定结果表明,目的蛋白在大肠杆菌中得以表达。
- 王璐郭春娟吴星星宫玉玲季新成冉多良
- 关键词：克隆原核表达
- 荧光蛋白标签对gD囊膜蛋白在BHK-21细胞亚细胞定位的影响被引量：3
- 2016年
- 【目的】探究荧光蛋白标签对马疱疹病毒I型(Equine herpes virus type 1,EHV-1)gD囊膜蛋白亚细胞定位的影响。【方法】以EHV-1基因组为模板利用PCR扩增gD全基因,分别克隆至pAcGFP1-C1和p Ds Red2-N1质粒,构建p Ac-GFP-gD(GFP-gD)和p Ds-gD-Red(gD-Red)重组质粒;将GFP基因插入gD基因信号肽序列之后并克隆至PVAX-1质粒,构建PVAX-S-GFP-gD’(S-GFP-gD’)重组质粒;将Flag标签序列与gD囊膜蛋白N端序列融合后并克隆至p VAX-1表达载体,构建p VAX-Flag-gD(Flag-gD)重组质粒。将4种不同重组真核表达质粒分别转染BHK-21细胞,通过激光共聚焦显微镜对不同融合蛋白gD进行亚细胞定位。【结果】成功构建4种不同的融合蛋白gD真核表达载体;在BHK-21细胞单独表达时,不同融合蛋白gD绝大部分都定位于高尔基体,极少量定位于细胞核内。【结论】不同插入位点的荧光蛋白标签对gD囊膜蛋白亚细胞定位无明显影响,这对今后研究其它蛋白亚细胞定位提供参考。
- 王世民张艳楠胡月苏艳冉多良包晓玮
- 关键词：亚细胞定位
- 简述新疆地区羊小反刍兽疫及综合防控被引量：1
- 2018年
- 小反刍兽疫作为一种副黏病毒科麻疹病毒是由于小反刍兽疫病毒所引起的,并有发病快、发病率高的特征,如果未曾得到及时有效的治疗,还会导致比较大的经济损失,要求各养殖人员对小反刍兽疫的特征有一个清晰的认知,能及时采取相应的防控措施进行控制。
- 韩露冉多良
- 关键词：病原体
- 新疆乌鲁木齐垦区猪瘟免疫程序的确定
- 2011年
- 为探讨一种适合新疆乌鲁木齐垦区的猪瘟免疫程序,对不同日龄仔猪进行猪瘟免疫,然后采集血样,检测猪瘟抗体效价。根据效价不断校正,最终确定科学合理的猪瘟免疫程序。其免疫程序是:猪瘟的超前免疫,剂量1头份,根据抗体效价下降情况,35日龄进行二免,剂量4头份;仔猪常规免疫:一免30日龄、剂量2头份;二免50日龄、剂量4头份;生产母猪免疫:配种前(后)15d进行免疫,剂量4头份。
- 李翀冉多良
- 关键词：猪瘟猪瘟抗体免疫效价免疫程序
- 一株新疆野鸭源新城疫病毒F基因的克隆及序列分析
- 张慧敏木哈买提江·铁格斯加尔肯苏占强杜润慈冉多良姚刚刘建华
- 口蹄疫病毒表位嵌合蛋白在枯草芽胞杆菌中的分泌表达被引量：3
- 2014年
- 为了将口蹄疫病毒(FMDV)中和表位展示在病毒样颗粒(VLP)表面,以猪圆环病毒2型(PCV2)衣壳蛋白为骨架,用FMDV O/Mya-98/2010毒株G-H环替换PCV2自身中和表位,构建嵌合衣壳蛋白CaO。为分泌表达CaO蛋白,在芽胞杆菌穿梭质粒pHCMC05的多克隆位点中顺次插入枯草芽胞杆菌P43启动子和中性蛋白酶B分泌信号肽(nprBsp),构建分泌型大肠杆菌-枯草芽胞杆菌穿梭质粒p7257-P43。然后将合成的CaO基因插入p7257-P43质粒nprBsp的下游,构建分泌表达质粒p7257-P43-CaO。将该质粒转化枯草芽胞杆菌WB800,氯霉素诱导表达。上清经SDS-PAGE检测,嵌合蛋白CaO在枯草芽胞杆菌中得到表达。Western-blot证实,该蛋白具有反应原性。免疫电镜可观察到直径约15nm±2nm的VLP,表明嵌合蛋白在体外能有效组装。
- 任晓冰窦小龙魏婕苗书魁冉多良马文戈
- 关键词：口蹄疫病毒猪圆环病毒2型枯草芽胞杆菌
- 鸭维甲酸诱导蛋白Ⅰ基因原核表达和单克隆抗体的制备及鉴定被引量：1
- 2014年
- 本试验旨在制备针对鸭维甲酸诱导蛋白Ⅰ(RIG-Ⅰ)全长蛋白的单克隆抗体。从鸭脾脏cDNA中扩增鸭RIG-Ⅰ基因N端长度均为900bp的a(1—900bp)和b(751—1650bp)2段基因片段,将其克隆入原核表达载体pET-30a中;重组质粒转化BL21感受态细胞后,经IPTG诱导表达,将获得的目的蛋白免疫BALB/c小鼠,将其脾淋巴细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,并进行间接ELISA检测。结果显示,筛选出17株与分段表达的鸭RIG-Ⅰ蛋白有良好反应性的杂交瘤细胞株,测定单克隆抗体上清效价均为1∶512;间接免疫荧光(IFA)与Western blotting分析结果显示,10H7C3和2A10A2 2株单克隆抗体与原核表达的鸭RIG-Ⅰ全长蛋白有良好的反应性。本研究制备了特异性鼠抗鸭RIG-Ⅰ单克隆抗体,为进一步研究RIG-Ⅰ基因的功能奠定了基础。
- 周长良张雅春王伟李越赵颖慧臧凤霞冉多良孟庆文陈洪岩
- 关键词：单克隆抗体原核表达
- H5N1亚型禽流感病毒M2基因的原核表达及纯化被引量：1
- 2007年
- 将含缺失跨膜区M2蛋白重组质粒pGEXsM2的大肠杆菌,用终浓度为0.6 mmol/L IPTG在37℃下诱导表达,获得可溶性表达的融合蛋白;在Western blot试验中,M2特异性单克隆抗体14C2与目的蛋白发生反应,在35 kD处有一条特异性条带,表明表达的重组M2蛋白具有免疫学活性;表达产物使用GST亲和吸附柱进行纯化,获得了大量的目的蛋白及微量的GST蛋白,使用分光光度仪确定纯化后M2蛋白的浓度约为5.6 mg/mL。本实验为进一步研究M2生物学特性、建立M2特异性抗体的间接ELISA检测方法及研制M2亚单位疫苗奠定了基础。
- 王文娟孟庆文李贺冉多良刘光亮肖一红吴东来
- 关键词：禽流感病毒纯化
