刘中华
- 作品数：17 被引量：15H指数：3
- 供职机构：运城学院生命科学系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金农业部全国畜牧总站动物胚胎工程及分子育种湖北省重点实验室开放课题湖北省国际科技合作项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生环境科学与工程更多>>
- 诱导型IGF1转基因猪的构建
- 郑新民乔宪凤华文君肖红卫李莉周荆荣刘西梅张立苹程妮刘中华华再东毕延震魏庆信
- “诱导型IGF1转基因猪”应用于猪的育种和养猪生产。其技术原理为：通过基因重组技术，构建四环素诱导的IGF1表达载体；通过原核注射的转基因技术，将IGF1诱导表达载体导入猪的基因组，构建诱导型转IGF1基因猪；再应用在饲...
- 关键词：
- 关键词：转基因猪养猪育种技术
- 转基因鼠及基因沉默技术的研究
- 郑新民刘西梅乔宪凤魏庆信谷习文华文君肖红卫王亚刚丁军涛周荆荣李莉田永祥刘中华赵永贞李聚学
- 该成果中的相关技术比较成熟：其中①原核注射构建转基因鼠技术较广的应用于医学模型和功能基因验证，先后进行多种基因功能测试，构建成功转单基因小鼠8种，转双基因小鼠2种；②鼠基因沉默技术除在遗传工程小鼠上的大量工作和应用外，还...
- 关键词：
- 关键词：转基因鼠动物实验
- 不同长度茎部shRNA表达载体构建与鉴定
- 2010年
- 本研究针对同一目的基因设计构建不同茎部长度的shRNA表达载体,并对其在细胞及胚胎水平的干扰效应做一比较。以绿色荧光蛋白基因为沉默效应的靶基因,设计茎部长度分别为21bp、27bp、29bp的干扰片段,退火后连入带有H6启动子的真核表达载体psiSTRIKE中(分别命名为EGFP-21siRNA、EGFP-27siRNA和EGFP-29siRNA),将构建成功的载体以脂质体法转染小鼠胚胎成纤维细胞,利用荧光定量PCR对其荧光表达进行精确定量。不同茎部长度的shRNA载体均使绿色荧光蛋白基因表达降低,茎部为29bp时比21bp、27bp表现出更明显的沉默效应。细胞水平沉默效应的初步验证,为筛选适合小鼠个体水平的最佳发夹结构奠定了基础。
- 刘中华乔宪凤肖红卫刘西梅王华岩郑新民
- 关键词：基因沉默SHRNA绿色荧光蛋白小鼠荧光定量PCR
- 绿色荧光蛋白基因转基因小鼠传代中的生物学观察
- 引言随着转基因技术的发展,GFP报告基因已成为转基因动物上常用的的报告基因之一。目前对于转基因动物传代前后基因表达的变化,仅见个别基因的研究,常规育种所用的模型(数学方程式来表达,数学期望、
- 肖红卫郑新民刘中华孙健
- 关键词：绿色荧光蛋白基因转基因小鼠传代生物学观察
- 文献传递
- 细胞和个体水平沉默效应的差异
- 2011年
- [目的]研究3种不同长度的四联shRNA载体及其在细胞与个体水平的沉默效应差异。[方法]以EGFP为靶标基因,用hU6、mU6、h7SK、hH1 4种启动子,构建21、27、29 bp的3种四联沉默载体,通过转染Vero细胞和注射小鼠肌肉,以实时荧光定量PCR的方法检测绿色荧光蛋白基因的mRNA水平。[结果]3种载体都有很强的沉默效应,其在细胞水平上的沉默效应远高于个体水平上,可以通过未成年鼠的肌肉注射进行转基因。[结论]多位点串联表达shRNA是一种可以达到较好干扰效果的方法,肌肉注射将是一个简便的转基因途径。
- 郑新民刘中华程妮肖红卫乔宪凤毕延震
- 关键词：细胞沉默
- 茎部长度为21、27、29bp的shRNA表达载体构建
- 2010年
- 利用shRNA(Small hairpin RNA)载体调控基因表达已经成为研究基因功能的有力工具。针对增强型绿色荧光蛋白标记基因(Enhanced green fluorescent protein,egfp),分别设计茎部长度为21bp、27bp、29bp的干扰片段,体外合成的单链shRNA片段退火后连入带有U6启动子的真核表达载体psiSTRIKE中,酶切及测序结果证明设计的干扰片段已经成功克隆进入表达载体,为进一步在小鼠细胞以及个体水平上综合评价不同茎部长度shRNA的干扰效应奠定了基础。
- 李莉刘西梅郑新民刘中华
- 关键词：小发夹RNA基因沉默RNA干扰绿色荧光蛋白基因
- 不同茎部长度shRNA对模型小鼠EGFP基因表达干扰的研究
- 本研究以增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)为靶标,分别设计构建茎部长度为21 bp、27 bp和29 bp的shRNA表达载体,通过转染细胞和显微注射对不同茎部长度的shRNA表达载体在小鼠细胞及个体水平的干扰效应做一系...
- 刘中华
- 关键词：SHRNARNA干扰实时荧光定量PCR绿色荧光蛋白
- 文献传递
- 两种方法研究不同茎部长度串联shRNA表达载体对EGFP基因的干扰效应
- 2010年
- 目的:旨在观察不同茎部长度串联shRNA表达载体对EGFP基因的干扰作用。方法:采用体外培养的Vero细胞,选用不同茎部长度串联shRNA表达载体+EGFP表达载体+脂质体转染的方法,将构建好的干扰载体转染Vero细胞,然后使用实时荧光定量RT-PCR对其沉默效应进行定量分析。在小鼠腿部肌肉注射干扰质粒,实时荧光定量RT-PCR对其沉默效应进行定量分析。结果:转染Vero细胞时,pGenesilR21、pGenesilR27和pGenesilR29荧光表达量仅为对照质粒pEGFP-C1的4.3%、3.0%和6.9%;小鼠腿部肌肉注射干扰质粒时,pGenesilR21、pGenesilR27和pGenesilR29荧光表达量仅为对照质粒pEGFP-C1的2.5%、1.3%和5.1%。结论:在细胞和个体水平,不同茎部串联干扰载体对目的基因的抑制效应均很明显(达到90%以上),比单一位点产生的沉默效应要强许多,不同茎部长度干扰效应彼此间差异不显著。
- 肖红卫刘中华刘西梅郑新民乔宪凤李莉
- 关键词：SHRNA表达载体EGFP基因沉默效应干扰质粒PEGFP-C1脂质体转染
- 向小鼠导入α-1，3-GT沉默基因及其整合效果的研究
- 为了沉默α-1,3-半乳糖苷转移酶，在己报道的shRNA序列前加上人类H1启动子，设计一段沉默小鼠α-1,3-GT基因的siRNA序列。针对该序列分段设计引物，完全采用PCR法将其连接起来，再把该序列克隆到pGEM-T载...
- 刘中华
- 关键词：小鼠受精卵沉默基因显微注射法母鼠异种器官移植序列克隆
- 文献传递
- 转基因技术在动物遗传改良上的应用进展被引量：5
- 2009年
- 简要介绍了几种比较常用的转基因方法,包括显微注射法、脂质体介导法、电转染法、胚胎干细胞法、病毒载体法、精子载体法、卵巢直接注射法。传统的转基因方法与基因打靶、体细胞核移植、RNA干扰以及线粒体转移技术相结合,在基因功能研究和疾病治疗中发挥越来越重要的作用。特别是近年来在植物上出现的外源基因清除技术,为我们在动物上彻底去除外源基因的影响提供了新思路。
- 刘中华王华岩乔宪凤郑新民
- 关键词：转基因技术动物外源基因
