刘佩娟
- 作品数：11 被引量：23H指数：3
- 供职机构：第四军医大学实验动物中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金陕西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>
- GANT61通过自噬性细胞死亡抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖被引量：3
- 2017年
- 目的观察Hedgehog通路抑制剂GANT61对人乳腺癌MCF-7细胞的抑制作用。方法 GANT61作用MCF-7细胞后,通过流式细胞术检测细胞死亡;提取处理细胞总RNA和蛋白。分别采用Real-time PCR和Western blot检测Hedgehog通路SHH、Gli1、Gli2及自噬标志物LC3-Ⅱ表达;处理细胞固定后通过电子显微镜观察GANT61诱导的自噬体形态;自噬抑制剂3-MA处理细胞或自噬相关基因atg5 siRNA转染细胞后再用GANT61作用,流式细胞术检测细胞死亡数量。结果 GANT61能明显诱导MCF-7死亡,降低Hedgehog通路SHH、Gli1、Gli2表达水平,提高LC3-Ⅱ蛋白表达,并可诱导MCF-7细胞产生自噬体。3-MA及atg5 siRNA可减弱GANT61诱导的细胞死亡。结论 GANT61通过诱导自噬性细胞死亡机制发挥抗乳腺癌细胞活性。
- 宋扬刘佩娟辛智倩张波赵勇张彩勤白冰师长宏张海
- 关键词：自噬性细胞死亡乳腺癌MCF-7细胞
- 骨形态发生蛋白9(BMP9)基因敲除小鼠的构建
- 目的 运用CRISR/Cas9技术敲除小鼠基因组中BMP9基因片段,构建BMP9基因敲除小鼠.方法 根据BMP9基因的外显子序列,设计一段sgRNA并合成.sgRNA和Cas9体外转录后显微注射,注射后的受精卵细胞移植至...
- 周珂辛智倩刘佩娟师长宏王华张海
- 关键词：基因敲除小鼠
- 乙醇脱氢酶2(ALDH2)基因敲除大鼠的构建
- 目的：运用CRISR/Cas9技术敲除大鼠基因组中ALDH2基因片段,构建ALDH2基因敲除大鼠.
方法：根据ALDH2基因的外显子序列,设计一段sgRNA并合成.将sgRNA纯化后进行体外转录,取50μg/m...
- 周珂辛智倩刘佩娟武斌刘莉赵勇张彩勤白冰师长宏王华张海
- 关键词：酒精性肝病动物模型乙醇脱氢酶2基因敲除
- 抗乳腺癌多形上皮黏蛋白1单克隆抗体的制备及初步应用被引量：1
- 2015年
- 目的 制备并鉴定抗多形上皮黏蛋白1（MUC1）单克隆抗体,将抗体应用于人乳腺癌组织、纤维腺瘤、囊性增生症及正常乳腺组织的临床鉴别,采用免疫组化方法进行检测.方法 用合成的MUC1重复序列短肽与钥孔血蓝蛋白（KLH）及牛血清白蛋白（BSA）偶联后作为抗原免疫Balb/c小鼠,杂交瘤技术筛选出稳定分泌单克隆抗体的细胞株.制备单克隆抗体,以ELISA、Western blot、流式细胞术、免疫荧光法对抗体进行特异性鉴定及亚类分析;将抗体应用于人乳腺癌组织、纤维腺瘤、囊性增生症及正常乳腺组织的临床鉴别,采用免疫组化方法进行检测.结果 获得4株稳定分泌抗MUC1的杂交瘤细胞株,第1株反应性最强,效价1∶10 7以上.抗体亚型3株为IgG1,1株为IgM,轻链均为κ型.经Western blot、流式细胞术、免疫荧光、免疫组化检测证实抗体与乳腺癌细胞株MCF-7特异性结合,单抗检测MUC1在乳腺癌组织与纤维腺瘤、囊性增生症及正常乳腺组织之间表达差异明显（均P＜0.01）.结论 抗MUC1单克隆抗体经检测效价高、特异性强,为乳腺癌早期诊断和靶向治疗的进一步研究奠定了基础.
- 李航袁时芳凌瑞贠军李永平王辉李郁宋朝君刘佩娟
- 关键词：乳腺肿瘤黏蛋白类
- 基因工程小鼠制备和保种、育种技术研究
- 本文从小鼠的超数排卵、采集胚胎、原核受精卵显微注射、胚胎移植、基因型鉴定等多个环节,详细阐述制备基因工程小鼠的技术操作要领;通过实施辅助生殖技术IVF(体外受精)、精子和胚胎的冷冻、复苏技术实现了基因工程小鼠的保种和育种...
- 张彩勤赵亚谭邓旭张海赵勇白冰刘佩娟辛智倩师长宏
- 关键词：保种措施育种方法
- 利用CRISPR/Cas9技术构建miRNA-29b1基因敲除小鼠被引量：8
- 2016年
- 目的应用CRISPR/Cas9技术构建miRNA-29b1基因敲除小鼠。方法针对miRNA-29b1基因设计一段sgRNA,sgRNA和Cas9体外转录后显微注射至C57BL/6小鼠受精卵细胞。小鼠出生后取其基因组DNA进行测序以鉴定基因型,同时取小鼠心、肝、脾、肺、肾等脏器研磨后提取总RNA,通过real-time PCR分析miRNA-29b1在这些脏器中的表达。结果设计了20 bp的miRNA-29b1sgRNA并与Cas9一起进行了体外转录,显微注射小鼠受精卵细胞后获得miRNA-29b1基因突变小鼠。测序结果表明突变小鼠有两种基因型,一种为10 bp的缺失突变;另一种为22 bp的缺失突变,同时伴有3 bp的插入突变。与野生型小鼠相比,基因突变小鼠心、肝、脾、肺、肾等组织中miRNA-29b1表达量下降明显。结论应用CRISPR/Cas9技术成功构建miRNA-29b1基因敲除小鼠。
- 赵勇师长宏赵亚辛智倩刘佩娟张彩勤白冰白杰英王华张海
- 关键词：基因敲除小鼠
- 基因工程小鼠制备和保种、育种技术研究被引量：2
- 2016年
- 本文从小鼠的超数排卵、采集胚胎、原核受精卵显微注射、胚胎移植、基因型鉴定等多个环节,详细阐述制备基因工程小鼠的技术操作要领;通过实施辅助生殖技术IVF(体外受精)、精子和胚胎的冷冻、复苏技术实现了基因工程小鼠的保种和育种,涉及相关技术的要点改进和操作体会,成功建成了基因工程小鼠的制备和保种、育种平台,提供了良好的技术服务。
- 张彩勤赵亚谭邓旭张海赵勇白冰刘佩娟辛智倩师长宏
- 关键词：保种育种
- 人前列腺癌骨转移裸鼠移植模型的建立及其循环肿瘤细胞的特性被引量：5
- 2016年
- 目的利用裸鼠移植模型研究雄激素阻断对人前列腺癌骨转移发生的影响,并初步探索肿瘤转移过程中循环肿瘤细胞(CTCs)的生物学特性。方法将40只裸鼠随机平分为两组,一组裸鼠手术切除睾丸以阻断雄激素的分泌,另一组为正常对照。心脏注射绿色荧光蛋白和荧光素酶双标的人前列腺癌细胞PC3-Luc-GFP,剂量为每只1×106/50μL,制备实验用骨转移模型。通过小动物活体成像系统检测人前列腺癌骨转移模型的建立;将发现转移的骨组织切片进行HE染色分析,并分离转移模型中CTCs,通过Western blot检测CTC中转移相关分子RANKL和TOPK的表达。结果成功建立了前列腺癌骨转移模型,切除睾丸组的骨转移发生率为2/13(15.38%),而正常对照组的骨转移发生率为5/14(35.71%);再次重复裸鼠移植模型的建立,合并两次动物实验结果得出:切除睾丸组的骨转移发生率为3/26(11.54%),而正常对照组的骨转移发生率为10/27(37.04%),两组间差异有显著性(P<0.05);CTCs中RANKL和TOPK表达量均明显高于原始的前列腺癌细胞。结论在裸鼠移植模型中阻断雄激素能显著降低前列腺癌骨转移的发生率。CTC的转移能力高于原始的前列腺癌细胞。
- 张彩勤张海赵勇白冰刘佩娟师长宏
- 关键词：前列腺癌裸鼠模型睾丸切除循环肿瘤细胞
- GST融合蛋白包涵体纯化方法的探索被引量：3
- 2012年
- 探讨GST融合蛋白包涵体纯化的方法。将表达Rpfd与GST融合蛋白的质粒PGEX-4T1-Rpfd转入大肠杆菌DH5a,IPTG诱导表达目的蛋白。通过比较盐酸胍裂解和Novagen蛋白折叠试剂盒预处理,及调整不同类型蛋白复性液,观察上述因素对GST融合蛋白包涵体纯化效果的影响。结果:超声后先去除可溶性表达,再使用20 mmol Tris-HCl和0.1 mmol DTT进行复性,可获得高效纯化,具有活性的GST融合蛋白。对于GST包涵体蛋白进行纯化时,去除可溶性表达蛋白,改变蛋白复性液的成分,可有效提高蛋白纯化效果。
- 季林刘佩娟王毅赵勇毛峰峰赵善民尚淑琴师长宏
- 关键词：谷胱甘肽S-转移酶包涵体纯化
- 基于CRISPR/Cas9技术构建严重联合免疫缺陷小鼠被引量：2
- 2016年
- 目的应用CRISPR/Cas9技术靶向敲除编码小鼠T、B细胞的Rag2基因及编码NK细胞的IL2rg基因,构建T、B细胞及NK细胞联合免疫缺陷小鼠。方法根据Genbank报道的Rag2及IL2rg基因序列,分别针对其外显子设计25 bp左右的sgRNA并进行合成,sgRNA退火后克隆入p X330载体。Rag2-sgRNA、IL2rg-sgRNA及Cas9重组质粒体外转录为mRNA后显微注射入BALB/c小鼠受精卵细胞,受精卵细胞移植到受体动物获得子代小鼠,首建鼠(F0)与野生型小鼠交配获得F1代小鼠,突变的F1代小鼠互交后筛选F2代纯合子小鼠。通过基因测序、流式细胞技术及接种人源性肿瘤细胞系方法检测子代小鼠基因型和表型。结果成功构建了Rag2-sgRNA、IL2rg-sgRNA重组质粒并对其进行了体外转录,mRNA显微注射并移植后获得57只F0小鼠。连续交配后,获得F2代纯合子小鼠。序列分析表明子代小鼠中IL2rg有两个基因型,分别是10 bp和11 bp的缺失突变;而Rag2只有一个基因型,为8 bp的缺失突变。与野生型BALB/c小鼠相比,小鼠外周血中CD3、B220及NKp46阳性细胞数量明显降低。接种人乳腺癌细胞系SKBR-2HL后,肿瘤生长良好,且随着时间延长肿瘤组织逐渐增大。结论利用CRISPR/Cas9技术可有效实现BABL/c小鼠体内Rag2、IL2rg基因突变,并导致小鼠T、B及NK细胞功能异常。
- 赵亚李红武师长宏张彩勤赵勇刘佩娟白冰唐娟白杰英张海
- 关键词：基因敲除免疫缺陷小鼠
