刘蓓蓓
- 作品数：41 被引量：43H指数：3
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- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 猪支原体对枝原净和泰农的药物敏感性分析
- 2020年
- 猪支原体病是造成国内外养猪业严重经济损失的重要疾病之一,抗菌药物是临床治疗猪支原体感染最快速、有效的手段。本研究以会严重危害猪群健康的猪肺炎支原体(10株)、猪鼻支原体(10株)和猪滑液支原体(1株)作为支原体的代表,采用微量肉汤稀释法测定这些支原体对临床常用抗支原体药物(枝原净和泰农)的敏感性。结果显示猪肺炎支原体对枝原净的敏感性范围为0.015μg/mL^0.25μg/mL,对泰农的敏感性介于0.03μg/mL^0.06μg/mL;猪鼻支原体对枝原净的敏感性范围为0.03μg/mL^0.5μg/mL,对泰农的敏感性为0.06μg/mL^128μg/mL;枝原净对猪滑液支原体标准株的最小抑菌浓度(Minimum Inhibitory Concentration,MIC)为0.03μg/mL,对泰农的MIC为0.25μg/mL。本研究结果有助于了解当前支原体的临床耐药情况,为猪支原体病的防控以及制定合理的抗菌药物治疗方案提供科学依据。
- 李俊韦艳娜刘蓓蓓熊祺琰邵国青肖海君谭涛冯志新
- 关键词：支原体泰农抗菌药物敏感性
- 猪鼻支原体血清抗体间接ELISA检测方法的建立被引量：2
- 2017年
- 猪鼻支原体是猪体内的一种常在菌,可引发猪的多发性浆膜炎、肺炎、关节炎、心包炎等炎症。由于猪鼻支原体与猪其他支原体有较高的交叉反应,目前并没有特异性的血清学诊断方法的报道。本试验以建立猪鼻支原体特异性ELISA检测方法为目的,将猪鼻支原体的表面可变脂蛋白Vlp的特定肽段作为包被抗原,优化该方法检测条件,最终确定:其抗原的最佳包被浓度为0.312 5μg·mL^(-1);一抗的最佳稀释度为1∶100,作用时间为30min;二抗的最佳稀释浓度为1∶20 000,最佳作用时间为30min;显色时间为10min;阴阳性的判定值为0.27。交叉性试验结果显示,Vlp抗原与猪其他支原体阳性血清及猪常见传染病阳性血清均无交叉反应。在重现性试验中,批内及批间的变异系数均低于10%,证明重现性良好。利用所建立的方法对已知阴性及阳性样本进行检测,结果显示特异性和灵敏度均良好。最后,用建立的方法对人工感染后28d的猪血清和247份临床样品进行检测,感染猪血清抗体呈阳性,建立的Vlp-ELISA方法、吐温20膜蛋白-ELISA方法对不同猪群临床样品检测的阳性率趋势相同。综上所述,建立的Vlp-ELISA方法特异性、稳定性良好,可以广泛用于临床猪鼻支原体血清抗体检测,为该病的检测和防控提供了重要工具。
- 王佳熊祺琰熊祺琰华利忠刘蓓蓓甘源冯志新刘茂军武昱孜
- 关键词：间接ELISA血清学诊断VLP
- 福建地区鸡滑液囊支原体的分离、药物敏感性及耐药株全基因组序列分析被引量：3
- 2021年
- 2018年自福建省疑似鸡滑液囊支原体感染病鸡中分离得到9株鸡滑液囊支原体,采用微量肉汤稀释法测定了其对9种抗菌药物的敏感性,对筛选出的多重耐药株(MS HB)进行了全基因组序列分析。结果显示,福建地区鸡滑液囊支原体临床株对泰万菌素和泰妙菌素较为敏感,对泰乐菌素、多西环素、土霉素和替米考星敏感性次之,而对氟苯尼考和恩诺沙星最不敏感。多重耐药株(MS HB)基因组大小为766081 bp;GC含量为28.02%;共注释到1464个基因,其中,包括多个毒力基因和1个耐药基因(ermQ),与敏感标准株WVU1853全基因组序列比对得出大环内酯类和氟喹诺酮类药物耐药基因的多个突变位点。研究结果丰富了对鸡滑液囊支原体流行病学的认识,并可为该地区临床治疗鸡滑液囊支原体感染的合理用药选择提供理论依据和实践指导。
- 李俊牛志强侯博华利忠韦艳娜刘蓓蓓王丽谢星张珍珍熊祺琰邵国青李新国冯志新
- 关键词：鸡滑液囊支原体药物敏感性
- 猪巴氏杆菌Lh-4株单因子发病模型的建立
- 2021年
- 人工接种猪巴氏杆菌Lh-4株于SPF仔猪,以复制猪肺疫发病模型,并探讨其发生发展的规律,为今后研究该病的防治提供依据。选取5头30日龄SPF仔猪,随机分为攻毒组3头和对照组2头。联合采用滴鼻和皮下注射攻毒(109 CFU/头),攻毒后每天观察临床症状和测定直肠温度,并分别于0、4、10、16 d采集鼻拭子和抗凝血,进行细菌PCR检测。死亡和16 d时剖检,进行组织学观察,同时进行巴氏杆菌在各组织中的分布测定及细菌再分离,最后对具有类似临床症状的病原进行检测。结果发现,攻毒组有2头出现包括发烧、败血症、支气管肺炎、胸膜炎、心包炎等典型的猪肺疫临床症状和病理变化,1头出现了轻微临床症状。所有攻毒猪均能再分离到巴氏杆菌,其中典型发病猪各组织脏器中均有巴氏杆菌的分布,但轻微发病猪仅在心、肺、扁桃体和淋巴结中检测出。发病猪其他有类似临床症状的相关病原检测均为阴性。成功建立了猪肺疫发病模型,为巴氏杆菌病的发生发展规律,致病机制及其他巴氏杆菌临床分离株致病性的确定提供依据。
- 华利忠冯志新李玉峰袁厅刘蓓蓓张磊邵国青
- 关键词：猪肺疫SPF猪病理变化
- 猪肺炎支原体PCR快速检测方法的应用研究被引量：3
- 2017年
- 为对猪场中猪肺炎支原体的感染和发病情况进行有效地病原学监测,本研究筛选国内外最常用且引用率最高的靶向16S rRNA基因的引物对作为检测猪肺炎支原体的特异性引物,通过制定临床猪肺组织样品、鼻拭子样品和肺泡灌洗液样品的标准化采集与处理方法,比较菌液样品、肺组织样品、鼻拭子样品与支气管肺泡灌洗液等不同样品的不同DNA提取方法,验证PCR检测方法适用的临床样本范围。结果表明,对于菌液样品和鼻拭子样品可选用经济快速的水煮法,对于肺组织样品和肺泡灌洗液样品使用高效的试剂盒提取法。本研究表明,使用靶向16S rRNA基因的引物对进行PCR检测,可满足临床上对猪肺炎支原体快速检测的要求。
- 柳丽张磊刘蓓蓓甘源韦艳娜冯志新熊祺琰刘茂军邵国青
- 关键词：猪肺炎支原体PCRRRNA
- 猪鼻支原体临床分离株体外抗生素敏感性研究
- 2024年
- 为探究猪鼻支原体(Mhr)临床分离株对常见抗生素的敏感性,利用微量肉汤稀释法检测12种临床常见支原体病治疗用抗生素对本实验室2010-2021年间分离得到的31株Mhr临床分离株的最低抑菌浓度(MIC)。结果显示:Mhr临床分离菌株对泰妙菌素最为敏感,其MIC_(50)为0.030μg/mL,MIC_(90)为0.125μg/mL;对多西环素与环丙沙星也较为敏感,MIC_(50)和MIC_(90)值均为0.50和1.00μg/mL;对泰乐菌素和泰万菌素的MIC呈现双峰分布;对替米考星和林可霉素的MIC_(90)值均达到≥128μg/mL,分别有29%和32%的菌株MIC≥128μg/mL,出现了明显的耐药趋势。本研究结果丰富了我国Mhr临床菌株的药物敏感性数据,为临床用药提供了数据支撑及合理指导。
- 邵佳韦艳娜王佳王佳黄媛媛华利忠甘源华利忠甘源邵国青刘蓓蓓熊祺琰
- 关键词：临床分离株药物敏感性
- 猪肺炎支原体对上皮细胞氧化损伤的分析被引量：4
- 2014年
- 分析猪肺炎支原体致病株168和弱毒株168L对上皮细胞的氧化损伤。用猪肺炎支原体168和168L株体外感染猪肺泡上皮细胞(SJPL),通过对感染细胞进行MTT和NO检测,筛选感染时间和感染剂量,利用间接免疫荧光(IFA)检测细胞上Mhp,通过H2O2和DAPI验证细胞损伤。结果:在5×106 CCU感染36h时,细胞活力相同,Mhp168株感染细胞的NO浓度显著高于Mhp168L株(P<0.05);H2O2检测显示Mhp168对细胞的氧化损伤显著高于Mhp168L株,同时都显著高于对照(P<0.01);IFA观察分析显示Mhp168株在细胞上的黏附量高于Mhp168L。DAPI染色显示Mhp168对细胞造成的损伤程度高于Mhp168L。通过优化感染时间和感染剂量,找到了猪肺炎支原体强弱毒株对上皮细胞损伤的显著差异点,分析了猪肺炎支原体强弱毒株对上皮细胞的氧化损伤,为深入研究猪肺炎支原体强弱毒株感染细胞的差异机制奠定了基础。
- 李彦伟刘茂军刘蓓蓓武昱孜倪博白方方纪燕张映邵国青
- 关键词：猪肺炎支原体上皮细胞
- 一种通用的猪支原体抗原含量快速检测试剂盒及其应用
- 本发明提供一种通用的猪支原体抗原含量快速检测试剂盒及其应用，属于生物工程技术领域。该试剂盒包括采用猪支原体抗原包被的酶标板和兔抗EF‑Tu血清；所述兔抗EF‑Tu血清是采用重组EF‑Tu蛋白免疫新西兰兔，采血分离血清后所...
- 韦艳娜熊祺琰于岩飞冯志新王丽刘蓓蓓王佳郝飞韩蕊邵国青
- 文献传递
- 猪鼻支原体强毒株及其应用
- 本发明提供猪鼻支原体强毒株及其应用，涉及微生物技术领域。本发明猪鼻支原体强毒株，是猪鼻支原体（<I>Mycoplasma hyorhinis</I>）HEF16株，保藏号为CCTCC NO:M2017462。本发明还提供...
- 熊祺琰王佳邵国青冯志新华利忠韦艳娜甘源吴猛刘蓓蓓武昱孜
- 文献传递
- 半固体培养法制备非洲猪瘟病毒pA104R蛋白的单克隆抗体
- 2024年
- 为了快速、高效制备非洲猪瘟病毒(ASFV)单克隆抗体,本研究通过大肠杆菌系统表达并纯化了ASFV重组蛋白pA104R。以ASFV重组蛋白pA104R为抗原,分别比较了CpG ODN联合氢氧化铝佐剂和常规弗氏佐剂两种免疫策略,并重点比较半固体培养法和常规有限稀释法来制备ASFV pA104R单克隆抗体的效率。结果显示,本研究获得了相对分子质量为3.5×104的ASFV重组可溶性蛋白pA104R,通过其与CpG ODN联合氢氧化铝佐剂免疫小鼠,在第21 d即可达到融合要求,本试验方法(重组蛋白pA104R与CpG ODN联合氢氧化铝佐剂免疫)较重组蛋白pA104R与常规弗氏佐剂免疫节省14 d时间。通过半固体培养法筛选单克隆的试验周期比有限稀释法缩短28 d,并减少了亚克隆的工作量。半固体培养法获得5株阳性杂交瘤细胞,挑选效价较高的3株(9A4、9H6、11F5)进行鉴定,重链均为IgG,轻链均为KAPPA。纯化后的3株单克隆抗体针对pA104蛋白和全病毒蛋白质的效价分别达1∶160000~1∶320000和1∶200~1∶400。本研究优选了CpG ODN联合氢氧化铝佐剂结合半固体培养法筛选pA104R的单克隆抗体,为单克隆抗体制备提供了快速高效的新策略。
- 刘蓓蓓韦艳娜韦艳娜谢星陈蓉郝飞张珍珍倪博袁厅郝飞
- 关键词：非洲猪瘟病毒单克隆抗体
