刘述先
- 作品数：102 被引量：444H指数：14
- 供职机构：中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学自然科学总论更多>>
- 安氏隐孢子虫热休克蛋白编码基因的克隆、表达和分析被引量：9
- 2007年
- 目的克隆、表达和分析安氏隐孢子虫Mr70000热休克蛋白(CaHSP70)的部分编码基因。方法依据公布的CaHSP70基因序列设计引物,以江苏徐州安氏隐孢子虫(XZ-BOV)总RNA为模板,反转录PCR(RT-PCR)扩增目的编码基因。PCR产物经TA克隆后,亚克隆入pET28a原核表达载体,构建重组质粒pET28a-CaHSP70,转化感受态大肠埃希菌BL21(DE3),异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达并获得纯化的重组蛋白(简称为rCaHSP70)。用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、蛋白质印迹(Western blotting)和ELISA对该重组蛋白进行分析和鉴定。采用相关生物信息学软件对序列进行分析。结果根据克隆的目的基因序列推导的氨基酸序列与GenBank登录的CaHSP70一致。SDS-PAGE和Western blotting分析显示,重组蛋白(rCaHSP70)Mr约为43000(含6个组氨酸),以包涵体的形式存在,可被辣根过氧化物酶标记的抗组氨酸抗体、安氏隐孢子虫感染的小鼠血清、微小隐孢子虫感染的儿童血清和rCaHSP70免疫小鼠血清识别。rCaHSP70存在多个功能位点和潜在的抗原决定簇。种系发生分析表明XZ-BOV与安氏隐孢子虫进化关系最近。ELISA检测结果表明,rCaHSP70免疫的C57BL/6小鼠与BALB/c小鼠血清特异性抗体滴度均显著高于免疫前。结论XZ-BOVHSP70部分编码基因的克隆获得成功,研究获得的重组蛋白具有一定的免疫原性和免疫反应性。
- 刘海鹏曹建平李小红卢潍媛沈玉娟徐馀信臧炜刘述先
- 关键词：安氏隐孢子虫热休克蛋白重组抗原表位分析
- 日本血吸虫谷胱甘肽-S-转移酶基因和产毒大肠杆菌纤毛抗原基因的联合表达被引量：1
- 1999年
- 目的：编码日本血吸虫２６ｋＤａＧＳＴ和产毒大肠杆菌纤毛抗原Ｋ９９基因的联合表达。方法：ＰＣＲ扩增的Ｋ９９基因克隆入ｐＵＣ１８载体，再将限制性酶切获得的ＧＳＴ基因克隆入ｐＵＣ１８－Ｋ９９重组质粒。限制性酶切和琼脂糖凝胶电泳选择连接方向正确的重组质粒用于重组蛋白的表达。共表达产物采用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ、反向ＩＨＡ、ＥＬＩＳＡ和透视电镜观察进行分析鉴定。结果：共表达产物的分子量约５０ｋＤａ，存在于宿主菌体表面的纤毛中，ＧＳＴ抗血清和Ｋ９９抗血清均可识别共表达产物，提示共表达产物既有ＧＳＴ表位，又有Ｋ９９抗原表位。结论：日本血吸虫２６ｋＤａＧＳＴ和产毒大肠杆菌Ｋ９９基因共表达获得成功。
- 张威张景六刘述先
- 关键词：日本血吸虫纤毛抗原GST
- 日本血吸虫副肌球蛋白全基因核酸疫苗在小鼠诱生的保护性免疫力被引量：13
- 1999年
- 目的： 研究日本血吸虫大陆株副肌球蛋白全基因核酸疫苗免疫Ｃ５７ ＢＬ／６ 及ＢＡＬＢ／ｃ 小鼠诱生的保护性免疫力。方法： 将构建的日本血吸虫大陆株副肌球蛋白全基因核酸疫苗 （ｐＣＭＶ－ＳｊＣ９７） 经后腿胫前肌免疫Ｃ５７ＢＬ／６及ＢＡＬＢ／ｃ小鼠， 共免疫３ 次， 每次间隔３ ｗ ｋ。末次免疫后３ ｗ ｋ 以血吸虫尾蚴攻击感染， ６ ｗｋ 后计数成虫负荷及肝、脾、肠组织虫卵数。设不含ＳｊＣ９７ 编码基因的空载体质粒免疫组为对照组。结果： ｐＣＭＶ－ＳｊＣ９７ 免疫Ｃ５７ ＢＬ／６ 小鼠主要诱生ＩｇＧ２ａ 和ＩｇＧ２ｂ 亚类， 而免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠除诱生ＩｇＧ２ａ 和ＩｇＧ２ｂ 亚类外， 还诱生ＩｇＧ１。ｐＣＭＶ－ＳｊＣ９７ 免疫Ｃ５７ＢＬ／６ 小鼠诱生较明显的减虫率 （３５．５％ ～４１．１％ ） 和减卵率 （肝、脾及肠组织减卵率分别为４４．５％ ～５９．６％ 、５６．７％ ～８２．４％ 及５７．９％ ）， 而对ＢＡＬＢ／ｃ小鼠未诱生保护性。结论： ｐＣＭＶ－ＳｊＣ９７ 核酸疫苗能对Ｃ５７ＢＬ／６ 小鼠诱生较明显保护性免疫力， 而对ＢＡＬＢ／ｃ
- 周生华刘述先宋光承徐裕信孙文宇
- 关键词：日本血吸虫副肌球蛋白核酸疫苗保护性免疫力
- 日本血吸虫重组GST抗原对水牛的保护性研究被引量：7
- 1996年
- 在日本血吸虫病非流行区，选无疫水接触史，８个月龄左右的水牛，用日本血吸虫重组ＧＳＴ抗原进行免疫观察对水牛的保护性。结果显示，攻击感染血吸虫尾蚴后，实验组比对照组平均虫荷减少２２．３％，粪卵ＥＰＧ差异有显著意义，毛蚴孵出率降低近４０％，肝、肠组织血吸虫卵沉积量减少４７．９４％～５６．８３％。
- 罗新松刘述先何永康喻鑫玲林金莲宋光承徐裕连李毅李岳生
- 关键词：保护性免疫水牛日本血吸虫
- 日本血吸虫非适宜宿主东方田鼠和SD大鼠特异性DNA序列的克隆
- 2010年
- 目的比较日本血吸虫非适宜宿主东方田鼠和SD大鼠特异性DNA序列的差异。方法提取东方田鼠、SD大鼠、C57BL/6小鼠和KM鼠肝脏DNA,根据东方田鼠特异性DNA序列片段(GenBank登录号:AF277394)设计引物,PCR方法扩增以上4种鼠的基因组特异性DNA,琼脂糖凝胶电泳鉴定特异条带,纯化后的PCR产物克隆到pGEM-T Easy载体,进行DNA序列分析。结果 PCR扩增东方田鼠、SD大鼠DNA分别得到520bp左右的特异扩增片段,同源性为99%。C57BL/6小鼠和KM鼠没有扩增出此特异片段。结论日本血吸虫非适宜宿主东方田鼠和SD大鼠之间特异性DNA序列有高度的同源性。
- 胡媛袁忠英沈玉娟朱小华刘述先曹建平
- 关键词：日本血吸虫东方田鼠SD大鼠
- 日本血吸虫原肌球蛋白cDNA的克隆及其在大肠杆菌中表达(英文)
- 2002年
- 克隆日本血吸虫原肌球蛋白编码基因 ,并在大肠杆菌中表达。方法 抽提日本血吸虫 (大陆株 )成虫总RNA ,经逆转录—聚合酶链反应 (RT PCR)获得编码日本血吸虫原肌球蛋白的cDNA片段 ,该片段与全序列比较 ,缺氨基端 1 4个氨基酸。该PCR产物克隆入T载体并对插入片段进行序列测定后 ,亚克隆入表达载体pbV2 2 0 ,经琼脂糖凝胶电泳、限制性酶切反应和PCR鉴定后 ,选择克隆用于温控表达。结果 RT PCR产物克隆入T载体 ,序列测定表明 ,在核苷酸水平和推断和氨基酸水平 ,与曼氏血吸虫分别有96 5%和 98 1的同源性。目的DNA片段亚克隆入原核表达载体pBV2 2 0 ,在大肠杆菌DH5α中诱导表达。经SDS PAGE和Westernblot分析表明 ,该非融合表达产物相对分子质量约为 3 2 0 0 0 ( 3 2kDa) ,日本血吸虫 (大陆株 )成虫天然原肌球蛋白免疫兔血清能特异识别该重组蛋白。
- 曹建平刘述先宋光承徐馀信
- 关键词：日本血吸虫大陆株原肌球蛋白克隆
- 全文增补中
- 东方田鼠血清被动转移小鼠对血吸虫的发育及虫卵肉芽肿的影响
- 1998年
- 实验研究表明，人工感染日本血吸虫尾蚴能穿透东方田鼠的皮肤并移行至肺脏，感染后第１２天虫体发育停滞，逐渐萎缩，至第２０天消失［１］。为了探明东方田鼠血清抗体对血吸虫的作用，１９９６年３月～１１月，我们用东方田鼠血清被动转移小白鼠，观察小白鼠体内血吸虫的...
- 林金莲何永康喻鑫玲罗新松罗新松张新跃李毅
- 关键词：血吸虫发育虫卵肉芽肿
- 重组日本血吸虫26 kDa GST抗原免疫水牛后抗体动态及免疫保护性效果被引量：5
- 2001年
- 目的 观察重组日本血吸虫 2 6kDaGST抗原 (reSjc2 6GST)免疫役用放养水牛 (简称水牛 )后抗体动态及免疫保护性的效果。 方法 试验组 96头水牛 ,用reSjc2 6GST免疫 3次 ,每次间隔 2wk ,3次剂量分别为 0 2、 0 2和 0 1mg。对照组 90头水牛不作免疫 ;观察 2组水牛免疫前及免疫后 2、 5、 9、 12、 15和 2 0个月的抗体水平及血吸虫感染率的变化。 结果 试验组机体产生特异性抗reSjc2 6GST抗体 ,其抗体水平呈明显的梯形升高趋势。试验组免疫后 2 0个月血吸虫感染率比免疫前下降了 62 2 % ,比同期对照组低 67 7%。 结论 用reSjc2 6GST免疫水牛能产生特异性抗体 ,在免疫后 2 0个月内维持较高水平 ,有一定的抗血吸虫自然感染的保护力。
- 何永康宋光承刘述先罗新松张新跃徐裕信喻鑫玲杨瑞青
- 关键词：血吸虫抗体水平日本血吸虫
- 日本血吸虫中国大陆株硫氧还蛋白基因及其克隆表达方法和应用
- 本发明涉及日本血吸虫(中国大陆株)硫氧还蛋白(SjcTrx)基因的序列及其克隆表达方法和应用。本发明公开的SjcTrx基因具有序列1所示的核苷酸序列及编码相应的氨基酸序列。本发明还公开了SjcTrx基因在大肠杆菌中的表达...
- 曹建平韩海勃刘述先徐馀信汤林华沈玉娟李小红卢潍媛
- 文献传递
- 活化剂HYP协同rSjc26GST的抗血吸虫性肉芽肿的效果及其机制的研究被引量：3
- 2005年
- 目的探讨活化剂HYP协同rSjc26GST的抗肝内血吸虫卵肉芽肿病变的效果及机制。方法采用活化剂HYP联用rSjc26GST、福氏佐剂(FCA)联用rSjc26GST、单用HYP和单用福氏佐剂分别免疫BALB/c小鼠,末次免疫后1周,免疫和对照组小鼠均用日本血吸虫尾蚴攻击感染,7周后测定其免疫效应,观察其抗血吸虫卵肉芽肿病变的效果。结果活化剂HYP联用rSjc26GST组的总虫卵数和成熟虫卵数减少率分别为55.37%和54.31%,均显著高于FCA联用rSjc26GST组的30.3096和38.07%;该两组肝内虫卵肉芽肿的直径及面积分别下降36.86%和35.25%及62.59%和60.44%;两组IgG和IgG1水平均明显升高。结论活化剂HYP协同rSjc26GST比FCA具有更好的抗肝内血吸虫卵肉芽肿病变的效果,其机制与体液免疫(IgG和IgG1)的增强密切相关。
- 龚唯骆伟刘述先施云松陈家旭宋光承周卫芳胡永德李允鹤
- 关键词：血吸虫性肉芽肿病变日本血吸虫尾蚴福氏佐剂IGG1
