刘银坤
- 作品数：306 被引量：1,153H指数：17
- 供职机构：复旦大学附属中山医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学化学工程更多>>
- 由质谱分析数据建立乙肝病人与健康人的分类模型被引量：3
- 2009年
- 建立运用表面加强激光解吸电离-飞行时间质谱获取乙肝病人和健康人血清蛋白指纹图谱数据,并用偏最小二乘(PLS)变量筛选法建立乙型肝炎(HBV)病人和健康人的分类模型,最终得到分类模型的交叉检验相关系数达0.97以上,判别准确率显著提高。对模型进行分析,找出对乙型肝炎病人和健康人的差异有重要影响的因素或变量。这些变量为某些质荷比区间内特定蛋白的峰强度值,反映这些质荷比区间内蛋白量的增加或减少,与乙肝病的形成有密切关系,可作为重要的生物标志物,进一步加以研究。本研究采用所得模型的拟合值等一些信息来做分类图,能较好地表达回归模型的分类效果。
- 徐琨朱尔一杨芃原刘银坤
- 关键词：乙型肝炎
- 一种肝癌肿瘤血管特异性靶向多肽
- 本发明涉及蛋白质多肽生物技术领域，具体涉及一种可与肝癌肿瘤血管特异性结合的多肽。本发明采用噬菌体随机肽库体内展示技术和激光显微切割技术在高转移人肝癌裸鼠模型上筛选出与肝癌肿瘤血管内皮细胞特异结合的靶向多肽LCI－X<Su...
- 徐泱孙惠川汤钊猷钦伦秀刘银坤
- 文献传递
- 全反式维甲酸对人肝癌高转移细胞株MHCC97-H表达基质金属蛋白酶的影响被引量：5
- 2003年
- 目的 研究全反式维甲酸 (ATRA)对人肝癌高转移细胞株MHCC97 H表达基质金属蛋白酶 (MMPs)的影响。方法 应用明胶酶谱法检测ATRA对体外培养MHCC97 H细胞分泌MMPs酶谱的影响 ;细胞免疫荧光法检测ATRA对MHCC97 H细胞表达MMP 9的影响 ;利用侵袭小室模型 ,检测ATRA对MHCC97 H细胞体外侵袭能力的影响。结果 MHCC97 H在体外培养时可分泌大量的MMPs ,其中以MMP 9和其活性形式为主。ATRA在体外可显著地抑制MHCC97 H细胞MMPs的表达 ,降低肿瘤细胞穿透人工重组基底膜的能力 ,且在一定的浓度范围内 ,抑制作用与药物浓度呈正相关。结论 抑制肿瘤细胞分泌MMPs的能力 。
- 田波李雁冀学宁陈洁叶胜龙刘银坤汤钊猷
- 关键词：全反式维甲酸肝癌肿瘤转移细胞株MHCC97-H基质金属蛋白酶
- 肝癌转移、复发预测的蛋白质分子标志物被引量：13
- 2010年
- 肝癌转移是一个多步骤、多因素相互作用的复杂过程.在肝癌转移复发的蛋白质组学研究方面,发现了很多新的潜在蛋白质分子标志物.由于仅用单个指标是无法进行准确预测的,采用多个指标进行联合检测将是今后肝癌转移预测的研究方向.本文综述了所涉及肝癌转移复发早诊的新型分子标志物.
- 舒宏康晓楠刘银坤
- 关键词：肝癌复发分子标志物
- 细胞角质蛋白19与肝癌模型生长转移关系的探讨被引量：7
- 2003年
- 目的 分析荷瘤裸鼠血清中细胞角质蛋白 19(CK19)的浓度变化与肿瘤转移的关系。方法 将 3次肺转移筛选的人肝细胞癌 (HCC)细胞株 (HCCLM 3 )接种于 3 0只BALB/c nu/nu裸小鼠皮下 ,随机分 6组 ,于接种后 2、3、4、5、6、7周分别处死 1组 ,用放射性核素标记的免疫吸附试验(ELISA)检测裸鼠血清中CK19浓度 ,并称量肿瘤重量、肺组织连续切片检查转移率。结果 接种细胞后各时点的肿瘤重量依次为 (0 .3 1± 0 .13 )、(0 .61± 0 .12 )、(1.43± 0 .3 7)、(2 .3 8± 0 .92 )、(3 .74± 0 .96)、(4 .85± 1.0 2 )g ;肺转移率依次为 0、0、2 0 %、10 0 %、10 0 %、10 0 % ;在第 5、6、7周时每只裸小鼠肺转移灶中位数依次为 81、118、15 0个 ;裸鼠血清中CK19浓度依次为 (4 .79± 1.16)、(5 .0 6± 1.2 1)、(8.5 5± 1.2 5 )、(4 0 .71± 9.87)、(76.2 9± 2 0 .0 0 )、(95 .94± 19.68) μg/L ,在出现转移时CK19浓度明显升高 (P <0 .0 1)。结论 荷瘤裸鼠外周血中CK19浓度与肿瘤进展呈明显正相关性 ,当发生肺转移时明显升高 。
- 李雁汤钊猷叶胜龙薛琼陈洁刘银坤钦伦秀田波
- 关键词：肝癌肿瘤转移放射性核素细胞株
- 人肝癌转移抑制基因存在的功能研究
- 2009年
- 目的寻求人8号染色体上存在肝癌转移抑制基因的功能证据。方法前期通过微细胞介导的染色体转移方法（MMCT），将正常人8号染色体导入到大鼠肝癌高转移细胞株C5F中获得的微细胞杂交克隆Neo8／C5F-1—10和大鼠肝癌细胞株C5F，分别被接种到6—7周龄雌性BALB／CA裸鼠皮下进行自发转移实验，观察皮下成瘤及肺部大体转移灶形成情况，肺组织连续切片并计数镜下转移灶，结果进行单因素方差分析。结果所有微细胞杂交克隆均能皮下成瘤，微细胞杂交克隆的自发转移实验发现有6个杂交克隆出现肺转移表型的明显抑制（P〈0．05），其中2个杂交克隆肺转移表型发生完全抑制。结论人8号染色体对大鼠肝癌高转移细胞株C5F的成功导入改变了CSF的转移表型，提供了人8号染色体上存在肝癌转移抑制基因的直接的功能证据。
- 刘虎叶胜龙钦伦秀刘银坤薛琼汤钊猷
- 关键词：肝细胞染色体抑制基因
- 双向电泳-质谱技术筛选肝癌血清标记物被引量：28
- 2005年
- 采用双向电泳-质谱技术筛选肝癌特异的血清蛋白标记物,以利于肝癌的早期诊断和治疗.肝癌、肝炎和正常三组各20例血清先采用超声、高丰度蛋白去除、脱盐预处理以优化双向电泳,图像分析三组血清图谱寻找差异点,基质辅助激光解吸飞行时间质谱对差异点进行鉴定.结果显示,通过样品预处理,血清上样体积平均增加3～4倍,参考胶点数由218个增至332个,白蛋白和免疫球蛋白明显减弱,水平条带明显减少.图谱比较所得37个差异点,经鉴定为7种蛋白.与正常组比较,转铁蛋白、甲状腺素运载蛋白在肝炎和肝癌组低表达,α-1抗胰蛋白酶、凝聚素、铜蓝蛋白、触珠蛋白在肝炎和肝癌组均高表达.α-1抗胰蛋白酶在肝癌组较肝炎组高表达,而热休克蛋白27只在肝癌组表达.上述结果提示,双向电泳-质谱技术可发现肝癌发生发展过程中血清蛋白表达谱质或量的变化,从而为肝癌的早期诊断及治疗奠定基础.
- 冯钜涛刘银坤MOHAMAD RADWAN ALMOFTI代智周海君宋海燕陆豪杰汤钊猷
- 关键词：肝癌蛋白质组学急性反应蛋白热休克蛋白
- stathmin蛋白促进人SMMC-7721肝癌细胞增殖侵袭能力被引量：2
- 2014年
- 目的构建微管解离蛋白stathmin过表达的人SMMC-7721肝癌细胞株,并探讨stathmin过表达对肝癌细胞增殖侵袭的影响。方法采用脂质体将Flag-pcDNA3.1-stathmin重组质粒和Flag-pcDNA3.1空质粒分别转染人SMMC-7221肝癌细胞,抗生素加压筛选,构建稳定表达stathmin的SMMC-7721细胞(实验组),以稳转空质粒的细胞为对照组,Western blot对建系细胞进行鉴定。采用CCK-8和软琼脂克隆形成实验检测细胞增殖;流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡和细胞周期;体外细胞运动侵袭实验(Transwell)测定细胞的运动、侵袭能力。结果实验组中stathmin的表达0.76±0.12较对照组0.16±0.05明显增加(P<0.05),成功构建了过表达stathmin的人SMMC-7721肝癌细胞株;CCK-8和软琼脂克隆形成实验显示,实验组的细胞增殖较对照组明显增加(A4500.60±0.05 vs.0.29±0.03,P<0.01);实验组细胞凋亡降低[(5.80±0.33)%vs.(11.57±1.09)%,P<0.05],细胞周期阻滞在G2/M期;Transwell实验结果证实,与对照组比较,实验组细胞运动和侵袭能力均显著加强[运动实验透膜细胞数:(54.03±7.21)个vs.(130.45±14.13)个;侵袭实验透膜细胞数:(17.75±2.52)个vs.(57.76±8.50)个],差异均有统计学意义(P<0.01)。结论 stathmin的过表达能促进人SMMC-7721肝癌细胞的增殖侵袭能力。
- 龚舒陶忠桦刘晓燕郭坤刘银坤甘淋
- 关键词：STATHMIN细胞增殖肿瘤浸润肿瘤转移
- 小肝癌与不典型增生结节的差异糖蛋白筛选及其聚糖结构鉴定
- 2016年
- 目的筛选不典型增生结节(dysplastic nodule,DN)和小肝癌(small hepatocellular carcinoma,sHCC)之间的差异糖蛋白,并分析其聚糖结构,为肝癌的早期诊断提供参考。方法对DN和sHCC各15例的石蜡组织切片进行蛋白质修复和提取;运用定量蛋白质组学技术鉴定DN和sHCC中的差异糖蛋白;利用IPA分析差异糖蛋白功能与相关信号通路,筛选出与肿瘤相关的差异糖蛋白;纯化目标糖蛋白,优化抗体辅助凝集素芯片技术(antibody overlay lectin microarray)分析其聚糖结构。结果本研究共鉴定到26个差异糖蛋白;IPA分析筛选得到肿瘤相关的重要差异糖蛋白为α-1抗胰蛋白酶(α-1-antitrypsin,A1AT)和补体C3;相比于DN,sHCC中A1AT与凝集素CAL、GSL I、JAC、GSL II、PHA-L、GNL、WGA等亲和的聚糖结构增多,C3与CSL、LTL、WFL亲和的聚糖结构增多,此结果说明在sHCC中,A1AT的T/Tn抗原、!三/四天线的N-聚糖结构、高甘露糖和唾液酸等结构的含量增加;而C3的N-乙酰半乳糖胺(GalNAc)、Lewis X抗原[Fucα3(Galβ4)GlcNAc]、H-type 2抗原[Fucα2(Galβ4)]和半乳糖β(1,3/1,6)连接N-乙酰半乳糖[Galβ3(-6)GalNAc]结构增多。结论在DN和sHCC中,A1AT、C3聚糖结构的变化可能为肝癌早期诊断提供新的糖生物学标志物。
- 李薇张舒尚舒欣金光植秦雪丛文铭刘银坤
- 关键词：小肝癌凝集素
- 肝细胞肝癌侵袭性及门静脉癌栓形成与ezrin被引量：6
- 2005年
- 目的探讨细胞骨架连接蛋白ezrin在肝癌组织以及肝癌细胞系中的表达,及其与肿瘤侵袭性的关系。方法手术切除肝细胞肝癌标本及其相应癌旁肝组织41例以及同期良性肝病肝组织9例,按照肿瘤大小、有无播散灶及远处转移、有无包膜、有无门静脉癌栓等将肿瘤分为高侵袭和低侵袭两组,分别采用RT-PCR、Western和免疫组化技术检测ezrin的表达。并检测MHCC97L、MHCC97H和LM3三株细胞系的ezrin表达。结果高侵袭肝细胞肝癌组织ezrin表达强度显著高于低侵袭肝细胞肝癌组织(P<0·05),癌栓组织ezrin表达强度更高(P<0·05)。三株细胞系均表达ezrin,其强度随侵袭性增高依次增强。结论Ezrin在肝癌组织中的表达增加与肿瘤侵袭及门静脉癌栓的形成相关。Ezrin在MHCC97L、MHCC97H和LM3三株细胞系均表达,其表达强度随侵袭性增强而依次增加。
- 孙琦蛮樊嘉周俭刘银坤余耀吴志全邱双健肖永胜
- 关键词：肝细胞EZRIN门静脉癌栓
